林檎叶水提物及其不同极性组分的抑菌和清除自由基作用的研究

采用管碟法及体外抗氧化活性测试方法,以抑菌圈大小及对DPPH的半清除率浓度(IC50)为指标,评价林檎叶水提物及其不同极性组分(包括乙酸乙醑、正丁醇萃取物、及乙醇沉淀物和剩余组分)的抑菌及清除DP-PH自由基的能力.结果显示林檎叶乙酸乙酯组分对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、毛霉、红酵母及啤酒酵母均有抑制作用;且对DPPH自由基的清除能力最强,且清除率和质量浓度之间存在剂量依赖的关系,IC50值为0.33 mg/mL.有望成为新型的天然防腐保鲜剂的原料.     

一摸香叶精油对致倦库蚊的生物活性及其成分分析

参照“农药登记卫生用杀虫剂的室内药效评价/驱避剂GB/T 17322.10—1998”,研究了一摸香鲜叶的水蒸汽蒸馏精油对致倦库蚊的驱避作用;参照“电热片蚊香的室内药效测定方法GB 13917.5—1992”,测试了该精油对致倦库蚊成蚊的熏杀效果;采用浸液法测试了其对致倦库蚊幼虫及蛹的毒杀活性;并用GC-MS测试分析了其化学成分.结果表明：一摸香叶精油在1.5 mg·cm^-2剂量下对实验室饲养的未吸血致倦库蚊雌成蚊的驱避100%保护时间为(6.54±0.17) h,对成蚊的熏杀24 h LC₅₀值为6.895 μg·cm^-3,对成蚊的熏蒸KT₅₀值为6.46 min (熏蒸剂量为11.850 μg·cm^-3),对Ⅳ龄期幼虫的24 h毒杀LC₅₀值为119.020 μg·ml^-1.精油中共鉴定出17种化合物,占该精油挥发性成分总量的97.4%.说明一摸香叶精油对致倦库蚊具有显著的驱避作用和极强的毒杀活性.     

斜卧青霉去泛素化蛋白酶CREB的缺失提高纤维素酶的生产

斜卧青霉Penicillium decumbens T.是1种重要的产纤维素酶丝状真菌,能有效地降解利用木质纤维素生产第2代生物燃料。为了提高斜卧青霉纤维素酶的产量,构建了去泛素化酶基因creB的敲除盒,并通过同源双交换重组的方法,获得了creB基因缺失突变株ΔcreB。该突变株呈现明显的纤维素酶表达分泌抗葡萄糖代谢阻遏效应,ΔcreB菌株的滤纸酶活、内切纤维素酶活、木聚糖酶活以及外切纤维素酶活分别提高1.8倍、1.71倍、2.06倍以及2.04倍,其胞外蛋白质含量提高了2.68倍。确定了creB基因缺失突变株具有抗碳源代谢物阻遏的生理现象,CREB对斜卧青霉生产纤维素酶的能力具有显著影响,为系统改造丝状真菌高产纤维素酶菌株提供了理论指导。     

以脂肪酶为指标筛选赤霉素高产菌株的研究

以藤仓赤霉菌978对978#菌丝机械断裂后,采用紫外(30W,20cm)诱变处理60s,以脂肪酶活性为初筛指标筛选得到4株产赤霉素效价比出发菌株高的突变株,其中菌株GL-2在添加3%豆油的发酵培养基中产赤霉素能力比菌株978#在全淀粉发酵培养基发酵产素能力提高了1.2倍.调整补油工艺后,菌株GL-2产素能力进一步提高到...     

海藻酸钙固定赤霉菌菌丝产素的研究

将赤霉菌丝固定在海藻酸钙微球中进行连续发酵,考察产赤霉素情况。对海藻酸钠和钙盐浓度固定赤霉菌菌丝的微球稳定性进行初步研究,讨论了固定不同菌龄的赤霉菌微球在不同葡萄糖浓度下的产素能力及菌丝生长能力。实验表明:菌丝微球较稳定的固定条件是菌丝8 g/L、海藻酸钠浓度3 g/L和钙离子浓度3 mol/L;摇瓶发酵72 h,90 h的菌丝微球中菌丝营养生长基本停止,当培养液葡萄糖浓度为2 g/L时,赤霉素终浓度为1 145.5 μg/ml,比生产速率为4.61×10^-3/h;在该条件下固定菌丝球的床层式连续发酵,赤霉素比生产速率为4.82×10^-3/h,是相应分批发酵过程中最大赤霉素生产速率的1.87倍。     

响应面设计法优化蕨渣基质的灵芝培养条件

探索灵芝在以蕨渣为主要成分的固态基质中的培养条件,可为蕨渣的开发利用提供理论依据。以蕨渣为主要原料,采用响应面法对灵芝培养条件（基质蕨渣比例、基质含水量和培养温度）进行优化。结果表明,基质蕨渣比例、基质含水量和培养温度对灵芝菌丝日平均生长速率均有极显著的影响（p<0.01）,且基质含水量与培养温度之间、基质蕨渣比例与基质含水量之间存在交互作用。优化出灵芝培养条件为蕨渣比例85%,基质含水量62.5%,培养温度27℃,在此条件下,灵芝菌丝日平均生长速率为3.48mm/d。多元回归分析结果显示,基质蕨渣比例、基质含水量、培养温度与菌丝日平均生长速率之间回归模型高度显著,可用于实际生产预测。首次报道了利用蕨渣培养灵芝,为蕨渣进一步的开发研究奠定基础。     

斜卧青霉转录调控因子BglR的缺失对纤维素酶生产的影响

【目的】斜卧青霉(Penicillium decumbens)作为高效分泌纤维素酶的重要丝状真菌,其纤维素酶的合成与分泌在转录水平上被调控。进一步研究纤维素酶基因表达的转录调控,构建高效高产纤维素酶的工业菌株。【方法】根据斜卧青霉114-2在不同碳源生长条件下基因组表达谱的差异,发现新的转录调控因子BglR(PDE-01706),该蛋白与产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Pc20g04780的锌指结构蛋白具有59%同源性。通过基因同源双交换,得到BglR缺失突变株ΔbglR-1,对突变株ΔbglR-1的表型、营养生长、产纤维素酶活、蛋白分泌能力及发酵液pH变化进行研究。【结果】转录调控因子BglR的缺失可导致突变株ΔbglR-1的β-葡萄糖苷酶活力提高40%,并造成其滤纸酶活、内切葡聚糖酶及木聚糖酶活明显降低。【结论】结果表明转录调控因子BglR对于斜卧青霉纤维素酶的调控有重要作用。     

磷脂酰丝氨酸外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除过程中的协作效应

为探讨磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用,用脂质体整合的方法将不同的磷脂整合到红细胞上或用N-乙酰马来酰胺(N-ethylmaleimide,NEM)预处理红细胞然后整合磷脂,制备含不同凋亡信号的红细胞模型,测定巨噬细胞对整合不同磷脂信号红细胞的结合率和吞噬率。结果表明,单独整合PS或用NEM处理造成PS外翻,可显著性提高巨噬细胞对红细胞的结合率,但对吞噬率没有影响;同时整合PS和氧化磷脂(氧化PS或氧化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)),或用NEM处理造成PS外翻后再整合氧化PS或氧化PC,不仅可显著提高巨噬细胞对红细胞的结合率,而且可显著性提高吞噬率。这些结果提示PS外翻可能参与了巨噬细胞对凋亡细胞的结合,而磷脂氧化可能启动了巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬,二者协作才可能完成巨噬细胞对凋亡细胞的清除。     

利用特比萘芬抗性筛选赤霉素高产菌株及相关发酵特性的研究

【目的】诱变、筛选赤霉素高产菌株,并明确该菌遗传稳定性及部分发酵特性。【方法】利用亚硝基胍、60Co-γ射线以及复合诱变的方法,结合抑真菌剂-特比萘芬抗性筛选,定向选育赤霉素高产突变株;通过琼脂斜面传代实验确定遗传稳定性;发酵罐培养了解其部分发酵性状。【结果】藤仓赤霉菌单细胞悬液先后经过终浓度为300 mg/L亚硝基胍30 min和60Co-γ射线300戈瑞下复合诱变,得到抗120μg/L特比萘芬的赤霉菌突变株。摇瓶复筛,确定赤霉素突变菌株的赤霉素合成能力,其中ZNL13-3菌产赤霉素效价为2 215±35 mg/L,较之诱变前发酵效价平均提高了11.87%。ZNL13-3菌株经连续15次试管斜面传代考察,菌株赤霉素合成的稳定性较好,能维持原发菌株93.2%,具有良好的遗传稳定性和生产应用前景。5 L发酵罐培养,比较菌丝浓度和产物浓度随发酵时间变化趋势,ZNL13-3菌比生产速率优于原发菌株。【结论】赤霉菌抗特比萘芬的变异特性与赤霉素高产之间存在某种对应关系,为进一步定向优化筛选优良菌株提供参考。