汉坦病毒的致病性和免疫应答以及抗病毒和疫苗研究进展——第四届汉坦病毒国际会议部份内容介绍

第四届肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）和汉坦病毒国际会议于１９９８年３月５日～７日在美国亚特兰大召开,会议共有９个专题。本文就汉坦病毒的致病性和免疫应答以及疫苗和抗病毒药物的研究现状以及最新进展作一简单介绍：研究较为深入的有美国引起汉坦病毒肺综合征的ＳｉｎＮｏｍｂｒｅ病毒,至今已确诊病例１７０多例,它的致病机理认为是由Ｔ细胞介导的免疫病理所致,而与我国由ＨＴＮ病毒引起的肾综合征出血热是由抗原抗体复合物引起的免疫病理有差异。汉坦病毒肺综合征不但由鼠传播,而且最新有证据表明ＳｉｎＮｏｍｂｒｅ病毒可经口人－人间传播,给预防和控制本病增加了困难。本文还介绍了疫苗免疫后的效果以及抗病毒药物的作用机理及效果     

基因芯片技术检测肾综合征出血热病毒核酸的研究

肾综合征出血热 (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属 (Hantavirus,HV)中的病毒引起的急性传染病,该病的病死率较高,早期诊断和治疗尤为重要.     

HFRSV结构蛋白及其提取方法研究的进展

ＨＦＲＳＶ结构蛋白及其提取方法研究的进展董萍,赵洪礼（沈阳军区军事医学研究所,１１００３１）肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）属于布尼亚病毒科第五个属－汉坦病毒属（Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ）［１］,包括了血清学上明显不同的六个血清型病毒：Ⅰ型汉坦病毒（Ｈａ...     

汉滩病毒S片段基因编码区在Vero—E6细胞中的表达

汉滩病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,主要引起人类肾综合征出血热［１］。我国是肾综合征出血热发生和流行的主要疫区,该病起病急、病死率高,流行范围广,因此寻找安全有效、低廉的疫苗是控制本病流行和发生的关键。基因免疫是近年来微生物学和免疫学研究的新热点［２...     

汉坦病毒结构蛋白表位研究进展

汉坦病毒主要引起人类的两种疾病:肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,汉坦病毒基因组由L、M、和S三个片段组成,分别编码病毒的RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1、G2和核衣壳蛋白NP。本文综述了核衣壳蛋白、囊膜蛋白G1和G2的B细胞表位和CTL表位的研究进展。     

插入CpG序列的汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

肾综合征出血热(HFRS)是一类由汉坦病毒引起的以发热、出血和急性肾功能损伤为特征的急性病毒性传染病.     

汉坦病毒及所致疾病

汉坦病毒是引起多种人类疾病的病原体,为布尼亚病毒科的一个属.已发现至少有20个血清/基因型,每型均有其特定啮齿类动物宿主,病毒种系发生与宿主种系发生密切相关.不同病毒型别对人类致病性不同,其损伤器官和病情轻重各异.已发现2种主要疾病肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS).在过去的几十年里,对汉坦病毒及其所致疾病的认识有了很大进展病毒型别不断增加,病毒致病谱不断扩大.有证据表明,在英国,汉坦病毒也可引起人类疾病,但无明显特征.     

东北三省6株肾综合征出血热病毒生物学性状的研究

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是我国重点防治的急性传染病,对于流行于不同地区的汉坦病毒(hanatavirus)进行分离和系统地鉴定,可以为HFRS的防治提供科学依据,特别是对流行株血清型及基因型的确定,是研制疫苗和确定防治重点及对策的重要前提,也为研究我国汉坦病毒的遗传和进化特征奠定了基础。研究对6株流行于东北三省的汉坦病毒进行了全面鉴定,其中H8205、H8207株为人源性汉坦病毒,其余均为鼠源性汉坦病毒。研究表明,6株病毒具有病毒型别明确,抗原性较为广谱,免疫原性好,在Vero细胞上适应能力强及病毒滴度高,以及来源及传代历史清楚等特点,适合作为双价HFRS纯化灭活疫苗候选毒株,并且可建立起完善和合格的生产用毒种库,为我国生产以Vero细胞为基质的双价肾综合征出血热纯化灭活疫苗奠定了坚实的基础。     

汉坦病毒感染者血清病毒RNA的临床意义

汉坦病毒感染啮齿类动物,但不引起疾病。人类可通过接触这些宿主动物的尿、粪等排泄物中携带的病毒而感染。汉坦病毒RNA检测技术已经由核酸分子杂交,发展为实时荧光定量PCR,敏感性、特异性和可重复性明显提高。汉坦病毒感染为急性感染性疾病,病程早期可以在患者血清中检出病毒RNA。汉坦病毒感染者血清中病毒RNA与凝血功能、炎症因子、疾病严重程度、疾病预后等密切相关。在肾综合征出血热(HFRS)患者的发热期和低血压休克期病毒载量较高,随着病程进展,病毒载量逐渐下降,直至消失。检测汉坦病毒感染者血清中病毒RNA载量有重要临床价值。     

流行性出血热的临床护理

流行性出血热又称肾综合征出血热,是由汉坦病毒引起的自然疫源性疾病,以发热、出血、肾损害为主要临床表现,其传染源是黑线姬鼠、褐家鼠,农村发病率较高。我院自2000-2004年共收治流行性出血热患者79例,现将临床护理总结如下。     

汉坦病毒糖蛋白的结构及功能研究进展

汉坦病毒感染人类可导致肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,其包膜糖蛋白(GP)是重要的结构蛋白,本文就汉坦病毒糖蛋白的结构和功能的研究进展作一综述。     

汉坦病毒S基因片段及其产物的研究

汉坦病毒是肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的病原体,近年来对其Ｓ基因片段生物学特性的研究取得了很大进展。本文不Ｓ基因片段的结构、编码核蛋白（ＮＰ）的免疫原性、抗原决定簇及ＮＰ的重组表达与应用一阐述。     

反转录病毒MSCV介导汉坦病毒核蛋白基因在NIH3T3细胞中整合和表达

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体.由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡.构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒鼠干细胞病毒(MSCV)重组体MSCV-FlagNP,通过磷酸钙转录法导入产病毒的包装细胞系BOSC23中,产生完整的重组MSCV-FlagNP病毒.然后以重组病毒感染NIH 3T3细胞,利用Puromycin的选择特性(pac基因)对感染细胞进行连续压力筛选,获得了转核蛋白抗性细胞.利用Southern blot和PCR方法分别对核蛋白基因在抗性细胞染色体整合情况及其完整性进行了鉴定.并且用Western blot在抗性细胞中可检测到核蛋白的表达.进一步以Flag单克隆抗体介导的免疫荧光染色联合共聚焦激光扫描荧光显微镜,分析了内源性Flag融合核蛋白在抗性细胞内分布,发现核蛋白主要分布于胞浆及胞核周围区,并且部分核蛋白可聚集形成胞浆包涵体.转核蛋白基因细胞模型的建立,对进一步研究汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制机制有重要意义.     

检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ELISA方法的建立

检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ＥＬＩＳＡ方法的建立张东海,孙辉,高峰（山东省淄博第二卫生学校,淄博２５５０１５）关键词肾综合征出血热病毒,循坏免疫复合物,特异性,ＥＬＩＳＡ肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）发病机理有多种学说,其中在体液免疫学说中...     

肾综合征出血热纯化疫苗的SDS-PAGE分析

为了证明蛑综合征出血热纯化疫苗的主要成分坦病毒蛋白,采用出血热纯化疫苗经浓缩后进行SDS－PAGE和Western-blotting分析。结果 经SDS－PAGE显示,肾综合征出血热纯化疫苗有三条蛋白带,分子量分别约为70kD、55kD和50kD,与汉坦病毒三种结构蛋白（糖蛋白G1、G2和核蛋白NP）的分子量相符;经Western-blotting显示,分子量50kD的蛋白带反应阳性,分子量70kD和55kD的蛋白带无反应,认定出血热纯化疫苗的主要成分为汉坦病毒蛋白,主要由G1、G2和NP三种结构蛋白构成。     

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位,同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明,热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到,分布与病毒ＲＮＡ一致,并且与组织的病理损害有关;体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。     

原核细胞表达的肾综合征出血热病毒核蛋白免疫原性及免疫保护作用的研究

对原核细胞表达的肾综合征出血热病毒核蛋白的免疫原性及免疫保护作用进行了研究,结果发现表达的核蛋白具有很强的免疫原性,免疫小白鼠血清中抗肾综合征出血热病毒荧光抗体滴度达１：１２８００;用免疫小鼠脾细胞和血情做被动免疫保护实验,结果显示脾细胞对部分乳鼠肾综合征出血热病毒的致死感染有保护作用,保护率可达３８％,而血清不具有免疫保护作用;同时也未观察到核蛋白免疫血清具有促感染乳鼠早死作用。表明核蛋白能诱导细胞免疫保护但不诱导抗体介导的免疫保护,同时也不引起抗体介导的早死,这就为肾综合征出血热病毒核蛋白作为该病毒基因工程疫苗的成分提供了一定的理论基础。     

汉坦病毒受体

汉坦病毒感染可引起两种严重威胁人类生命的传染性疾病:肾综合征出血热(HFRS)和肺综合征出血热(HPS)[1,2],这两种疾病都与急性血小板减少和血管渗透性变化有关[3].因此,弄清汉坦病毒与宿主细胞的相互作用及其机制,对控制汉坦病毒性疾病显得尤为重要.整合素对维持血管壁的渗透性和完整性具有重要作用.一种整合素可以在不同的细胞上表达,同一种细胞也可以表达多种不同的整合素,并且不同类型整合素的作用也各有不同.在汉坦病毒与内皮细胞相互作用研究中,细胞整合素受体起到了关键性的作用,致病性汉坦病毒通过细胞膜上β3整合素感染细胞,而非致病性汉坦病毒通过细胞膜上β1整合素感染细胞[4,5].这些都为汉坦病毒的受体和发病机制研究奠定了一定的基础.本文拟对该研究近况作一综述,为汉坦病毒致病机制的深入研究提供参考.     

汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究

汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体.其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段.汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有.为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达.经NI-NAT亲和柱和HiPrep16/10 DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Western blotting进行区分和鉴定.以T4 DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针.然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针.该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义.     

HFRS病毒特异性抗体与淋巴细胞亚群检测的意义

研究了肾综合征出血热病毒的特异抗体与淋巴细胞亚群检测对临床诊断的意义。用ELISA法对 30例临床诊断肾综合征出血热患者进行特异性IgM抗体检测 ,进而用流式细胞仪对IgM抗体阳性患者进行淋巴细胞亚群测定。正常对照 30例 ,均为健康人。肾综合征出血热患者特异性IgM抗体阳性 2 2例 ,检出率为 73 .33 % ,正常对照标本均未检出病毒特异性IgM抗体。肾综合征出血热患者CD4 +细胞百分比较正常对照组降低 ,CD8+细胞百分比较正常对照组增高 ,CD4 +/CD8+比值下降或倒置。肾综合征出血热病毒的特异性IgM抗体特异性强 ,可作为该病早期临床诊断的重要依据。肾综合征出血热患者的免疫功能明显下降 ,对于判定疗效和疾病预后等具有参考价值。