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1.
汉滩病毒膜蛋白重组腺病毒的构建表达及免疫效果研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
探讨利用腺病毒载体作为汉滩病毒基因工程疫苗载体的可行性。通过PCR扩增,得到完整的汉滩病毒76-118株M片段编码区,将该片段克隆入质粒pAdTrackCMV的CMV启动子下游,得到阳性克隆pAdTrackCMV—M。Pmel线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdEasy—1共转化大肠杆菌BJ5183,经同源重组后得到重组病毒pAdEasy—M。pAdEasy—M经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,经Western—blot检测表明,G1、G2基因在293细胞中得到表达。重组病毒免疫BALB/c小鼠,产生了具有一定中和活性的抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的工程疫苗奠定了基础。  相似文献   
2.
观察了20位志愿者在接种试验性流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)双价灭活疫苗后的细胞免疫反应,并以其体液免疫反应作对照观察。用淋巴细胞转化试验测定细胞免疫水平。结果首针疫苗接种后42天和56天,特异性刺激指数(SSI)和非特异性刺激指数(NSI)均较免疫前显著增高(P_(SSI)<0.001;P_(NSI)<0.02),免疫后SSI累计阳转率为100%,NSI累计阳转率为60%,免疫后6个月二者均降低至正常水平。免疫后56天测定抗体,荧光抗体阳转率为100%;微量感染性中和试验表明,针对家鼠型病毒L99株中和抗体阳转率为95%,而针对野鼠型病毒JR株阳转率为65%。  相似文献   
3.
石晓宏  杭长寿 《病毒学报》1995,11(2):124-130
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫  相似文献   
4.
5.
本文报告流行性出血热R22和A9株病毒培养,同位素标记及核酸提取的初步研究,並获得了该病毒核酸的3个片段即L、M、S、分子量分别约为:3.8、1.9和0.86×10~5道尔顿,不论用20~70%蔗糖密度梯度离心提纯的病毒,或用30%蔗糖垫层离心的粗制病毒,均获同样结果,但多数情况下,用蔗糖密度梯度离心时,除病毒峰外,还发现主要由细胞组份(即线粒体和核糖体等)组成的另一峰,并经常影响病毒RNA的提取,对如何获得纯净病毒及其核酸进行了讨论。  相似文献   
6.
本文较系统地研究了在鸡胚细胞上温度和pH对流行性乙型脑炎病毒繁殖和干扰素产生的动态,以及病毒繁殖与干扰素产生的相互关系。温度是一个重要而明显直的影响因秦。在31—38.5℃范围内,随着培养温度的升高,干扰秦产生的滴度和浊度也增加。文叶1讨论了温度对病毒感染的意义。研究了不同NaHCO3含量及不同pH对流行性乙型脑炎病毒繁殖和干扰素产生的影响。与病毒相比,产生干扰秦的适宜pH的上限较适宜繁殖病毒者为低。pH7.10不利于病毒的繁殖,但不影响干扰素的产生,相反,pH7.80有利于病毒的繁殖而不利于干扰素的产生。影响病毒的繁殖及干扰素的产生取决于pH,而与NaI{c03的浓度无直接关系。研究的结果指出,发烧及pH的改变通过干扰素的产生,在病毒感染恢复机制中可能是重要的因素。  相似文献   
7.
本文运用放射免疫沉淀法(RIP)、Western-blot及ELSA夹心法,对一组针对流行性出血热病毒(EHFV)L99株、C4株的单克隆抗体(McAb)进行特性鉴定,其中4株McAb针对糖蛋白G2,29株针对核壳蛋白(NP),1株针对糖蛋白G1和NP。微量中和试验和血凝抑制(HI)试验分析表明,虽绝大多数抗NP McAb既无中和活性亦无HI活性,但有1株例外。具有明显的中和活性和HI活性,提示EHFV核壳蛋白上可能存在中和抗原和血凝抗原决定簇。2株抗G2 McAb具有较高的HI活性,1株抗G2 McAb有较低的中和活性和较高的HI活性,另一株抗G2 McAb仅具有中和活性,表明EHFV糖蛋白G2上存在独立的中和与血凝抗原决定簇,也可能存在具有中和、血凝双重功能的决定簇。竞争ELISA分析显示。G2蛋白上某些中和位点和血凝位点虽然独立分布,但在某一区域可能相当靠近或有部分重叠。  相似文献   
8.
将汉滩病毒(HTNV)M基因插入杆状病毒转移质粒pAcYMIB多角体启动子下游附近,与Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染Sf9细胞,经空斑筛选获得了表达包膜糖蛋白(G1、G2)的重组杆状病毒(AcvHanM)。经纯化AcVHanMDNA的Southemblot证实,M基因正确插入了杆状病毒基因组中。用抗糖蛋白混合单克隆抗体和病人血清做免疫荧光染色,观察到细小的特异性荧光颗粒,呈典型的核周分布。免疫荧光检测还证实,重组糖蛋白与9株抗糖蛋白单抗均起反应,提示重组糖蛋白的抗原位点分布与病毒毒粒糖蛋白相同或相似,用放射免疫沉淀(RIP)分析仅显示G2带,且表达的G2分子量略小于病毒G2,这可能与两者的糖基化程度不同有关。研究还表明,重组糖蛋白具有细胞融合活性。  相似文献   
9.
邱建明  杭长寿 《病毒学报》1996,12(3):212-219
采用逆转录-PCR方法,用3对引物分3个片段扩增强毒克隆(A9v)及弱毒克隆(A39s)的M基因片段cDNA并克隆入pGEM-T载体中,采用Sanger双脱氧法测定了A39s,A9v病毒G1糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由1978个核苷酸组成,比76/118株少6个核苷酸,并发现A39s在G1编码区有33个碱基及8个氨基酸与A9v不同,进一步与76/118,HV114的相关序列比较,发现G1编码  相似文献   
10.
本文用较高感染滴度的Vero-E6细胞和小白鼠乳鼠脑病毒,经56℃1小时加温或1:2,000福尔马林灭活后,免疫成年小白鼠、黑线姬鼠和长爪沙鼠。结果Vero-E6细胞培养的病毒均未使动物产生可测出的抗体,而小白鼠乳鼠脑病毒则获得良好的抗体阳转率(92%)。同时证明,热灭活较福尔马林灭活者好,加佐剂较不加佐剂好。  相似文献   
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