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1.
对一个中国汉族Gilbert综合征遗传家系致病基因突变位点进行鉴定,以期了解该病的分子遗传学基础。首先提取先证者基因组DNA,PCR扩增尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGT1A1基因的5个外显子,以琼脂糖电泳鉴定PCR产物,纯化后直接测序鉴定。基因扫描显示,与血清胆红素水平密切相关的UGT1A1基因在第1和第5外显子存在纯合突变,而 UGT1A1基因启动子区域和内含子/外显子剪接边界位点序列未检测到突变。进一步对其他家系成员该基因的相应位点进行突变检测,结果显示他们在第1和第5外显子也存在杂合突变,其中还有两个成员在启动子区域检测到(TA)插入突变。对家系成员未抗凝新鲜血液进行生化检测证实了基因突变分析的结果。综合以上结果发现该家系三种突变并存,致病因素为第1和/或第5外显子突变,为显性遗传,两种突变位点纯合导致先证者出现严重胆红素代谢功能障碍。该家系因此成为Gilbert综合征突变位点及其致病机理研究的一个典型临床病例。  相似文献   
2.
汉滩病毒S基因免疫小鼠的细胞免疫应答的初步观察   总被引:3,自引:0,他引:3  
将汉滩病毒S片段编码区基因插入到含CMV启动了/增强子(promoter/enhancer)的真核表达载体pVR1012中,构建成真核表达质粒pVRS22。质粒DNA经纯化后,注射经布比卡因预处理的Balb/c小鼠的股四头肌,多次免疫后,免疫小鼠淋巴细胞增殖功能的检测结果显示:免疫鼠的脾细胞能够对体处抗原刺激产生增殖反应;CTL活性检测结果表明:靶细胞^51Cr的释放是疚细胞依赖性的,并且与病毒感  相似文献   
3.
大鼠脑红蛋白(NGB)的原核表达、抗体制备及其细胞分布   总被引:12,自引:0,他引:12  
脑红蛋白 (NGB)是新发现的与脑内氧供应密切相关的分子 .为了检测细胞内脑红蛋白的表达、亚细胞分布从而对该分子进行深入的功能研究 ,成功地将大鼠脑红蛋白基因编码区构建于原核表达载体pGEX 4T 2 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得融合表达产物 .对含有融合蛋白的包含体进行溶解和复性 ,用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化 ,通过免疫家兔获得了兔源性抗NGB多克隆抗体 .采用Western印迹分析技术 ,用该抗体检测NGB基因的真核表达产物 ,证明该抗体有较好的针对NGB蛋白的专一性 ,可用于对NGB的结构和功能研究 .同时 ,用该抗体进行免疫组化分析发现 ,正常成年大鼠神经系统中有较多的NGB免疫反应阳性细胞分布 ,提示NGB是与神经系统功能密切相关的重要分子  相似文献   
4.
The coding region of S genome segment of Hantaan virus (76/118 strain) was inserted into the eukarytic expression plasmidpVR1012. The recombinant expression plasmid pVRS22 was constructed. Vero-E6 cells were transiently transfected in vitro with pVRS22 plasmid. The transient expression of Hantaan virus nucleocapsid proteins in Vero-E6 cells was detected by indirect immunofluorescence assay (IFA) with monoclonal antibody 5H5 against Hantaan virus.  相似文献   
5.
参考人和小鼠脑红蛋白(Neuroglobin,NGB)的cDNA序列设计简并引物,用RT-PCR方法从大鼠脑组织中扩增出大鼠NGB基因编码区的cDNA序列,该序列与小鼠NGB基因编码区的序列同尖性为96%,与人NGB基因编码区的序列同源性为88%,进一步分析表明,大鼠NGB基因编码区存在多个多态性位点;113t/c[138P],133a/g[N45D],388a/g[R130G],417t/c.该序列已被GenBank接受,登录号为AF333245,RT-PCR分析表明,该基因在大鼠脑,肝,肾,心肌和骨骼肌中均有较高水平表达,提示了其功能上的重要性。  相似文献   
6.
免疫组织化学方法检测脑红蛋白在大鼠中枢神经系统的分布   总被引:17,自引:0,他引:17  
目的 探讨脑红蛋白(NGB)基因在中枢神经系统中的分布。方法 用免疫组织化学ABC法研究了NGB蛋白在成年大鼠脑内的分布和定位。结果 NGB蛋白在成年大鼠脑中有非常广泛的表达。其分布区域包括大脑皮质,海马,丘脑和下丘脑的部分核团,脑桥及小脑,NGB免疫反应阳性物质定位于神经元的细胞质。结论 NGB蛋白在大鼠脑中有非常广泛的表达,提示NGB基因在中枢神经系统的功能活动中可能起重要作用。  相似文献   
7.
脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免疫Balb c小鼠 .通过传统的细胞融合方法制备了抗大鼠NGB的单克隆抗体 ,并对全部 4株单抗进行了亚类和亚型、效价和特异性鉴定 .为NGB结构与功能的深入研究提供了重要工具  相似文献   
8.
用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元,感染汉滩病毒后,检测原癌基因FOS的表达,加入HFRS病人恢复期血清,观察其对神经元的保护作用.将病毒感染的神经元经免疫组化染色,检测原癌基因FOS的快速表达;在病毒感染的神经元内加入HFRS病人恢复期血清,使用MTT比色试验检测神经元存活情况.病毒感染的神经元FOS表达明显增高,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);HFRS病人恢复期血清保护病毒感染的神经元组与感染对照组神经元活性明显不同,有显著性差异(P<0.001).HTNV感染体外培养的神经元,会使细胞内产生FOS的快速表达,HFRS病人恢复期血清对病毒感染的神经元有一定的保护作用.  相似文献   
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