增溶抽提β－银环蛇毒素结合蛋白及某些突触前毒素对其结合的抑制作用

β－银环蛇神经毒素阻遏神经肌肉接头递质释放的作用机理，可能与它结合于一种突触前的电压依赖的Ｋ~＋通道有关。本文报告了从大鼠膈肌膜组分中用去垢剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶抽提β－银环蛇毒素结合蛋白的结果。这种结合蛋白抽提液的比结合活性为２００－４００ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，比膜制备物的比结合活力提高约一倍。抽提得率为５０％－７０％。抽提液与~（１２５）Ｉ标记的β－银环蛇毒素的结合可被曼巴蛇神经毒素（ｄｅｎｄｒｏｔｏｘｉｎ）完全抑制，其ＩＣ_（５０）约８×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ。但另一种β型神经毒素，β－蝮蛇神经毒素（β－ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｔｏｋｉｎ）却完全不能抑制这种结合。这提示，β－蝮蛇毒素与β－银环蛇毒素具有不同的作用位点。     

猪大脑皮层突触质膜糖皮质激素结合位点的测定

利用放射配体结合测定法,测得猪大脑皮层突触质膜上存在有皮质酮特异结合位点,该皮质酮膜结合位点的最大结合量（Ｂｍａｘ）为３３１．８±３６．９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白,平衡解离常数（Ｋｄ）为１８５．０±６２．７ｎｍｏｌ／Ｌ。竞争取代实验表明,它具有较高的甾体结合特异性,按亲和力大小排列为：皮质酮＞孕酮＞１７β－雌二醇≈醛固酮＞睾酮。     

电鳐β—蝮蛇毒素结合蛋白的抽提及其与毒素结合性质的研究

以加州电鳐电器官为材料,探索了用去垢剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶抽提β－蝮蛇毒素结合蛋白 合适条件,建立了此结合蛋白活性的检测方法,并分析了该结合蛋白与同位素＾１２５Ｉ标记β－ＡｇＴＸ的结合性质。     

川楝素在大鼠大脑皮层匀浆中的结合位点

从驱蛔中药楝属植物根皮提取的一种三萜化合物──川楝素是一个选择性地作用于突触前的神经肌肉传递阻遏剂。根据它作用的专一性和不可逆性推测,突触前末梢应存在着川楝素的结合位点。本工作利用３Ｈ－川楝素进行的结合实验表明,大鼠大脑皮层匀浆中存在川楝素的结合位点;３Ｈ－川楝素与结合位点复合物的平衡解离常数（ＫＤ）约为２．０×１０（－７）ｍｏｌ／Ｌ;皮层匀浆离心团粒（Ｐ２＇）的重悬液含川楝素结合位点约２．７×１０（－１２）ｍｏｌ／ｍｇ蛋白质;该结合位点的Ｈｉｌｌ系数为０．９７。研究还显示,Ｐ２＇重悬液经蔗糖密度梯度超离心得到的突触体组分是川楝素结合位点的富集亚细胞组分,其比结合活性是Ｐ２＇重悬液的２至３倍。     

蝮蛇突触前毒素的结晶及其物化性质的鉴定

江苏和浙江省一带所产的蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒,按前文所描述方法,分离出二个主要神经毒组分。经生理学鉴定其中一个具有选择性地阻断神经肌肉接头突触前传递过程的作用。用等电聚焦板电泳从该组分制备出经聚丙烯酰胺圆盘电泳鉴定为一均一条纹的突触前毒素,定名为蝮蛇神经毒素(agkistrodotoxin),蝮蛇神经毒素对小白鼠(腹腔注射)的最小致死量为每公斤体重55微克,在90℃下保温20分钟毒性不变,用中性连续或碱性不连续SDS 圆盘电泳测定的分子量为13,400,不含亚基,用等电聚焦圆盘电泳测得等电点为6.9,在12℃对34%饱和硫酸铵(pH7.0)透析可得长方形晶体。关于蝮蛇神经毒素的其他生理特性,以及蝮蛇毒中其他神经毒素的纯化和鉴定将在另文发表。     

蝮蛇突触前毒素的结晶及其物化性质的鉴定

江苏和浙江省一带所产的蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒,按前文所描述方法,分离出二个主要神经毒组分。经生理学鉴定其中一个具有选择性地阻断神经肌肉接头突触前传递过程的作用。用等电聚焦板电泳从该组分制备出经聚丙烯酰胺圆盘电泳鉴定为一均一条纹的突触前毒素,定名为蝮蛇神经毒素(agkistrodotoxin),蝮蛇神经毒素对小白鼠(腹腔注射)的最小致死量为每公斤体重55微克,在90℃下保温20分钟毒性不变,用中性连续或碱性不连续SDS圆盘电泳测定的分子量为13,400,不含亚基,用等电聚焦圆盘电泳测得等电点为6.9,在12℃对34%饱和硫酸铵(pH7.0)透析可得长方形晶体。关于蝮蛇神经毒素的其他生理特性,以及蝮蛇毒中其他神经毒素的纯化和鉴定将在另文发表。     

β—Agkistrodotoxin的聚全与异构体观察

中国泊浙产短尾蝮蛇突触前神经毒素经制备电泳被进一步纯化,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,观察到天然β１－ＡｇＴｘ以及经电泳纯化获得的碱溶β１－ＡｇＴｘ－ＯＨ成分在电科谱上出现的聚合谱带,然而这些聚合谱带的含量似并不随时程的延长而明显地增强,另经双向分析发现,无论是天然的β１－ＡｇＴｘ或经电泳经获得的碱溶β－ＡｇＴｘ－ＯＨ成分均含有三个具有不同等电点及不同含一比例的异构体谱带,天然β１－ＡｇＴｘ－ＯＨ成分     

黑斑双鳍电鳐(Narcine maculata)电器官ACh受体的分离、纯化及其某些特性的研究

我们用超速离心、非离子去垢剂Tritonx—100增溶提取、亲和层析等方法从产于南中国海的黑斑双鳍电鳐(Narcine maculata)的电器官分离、纯化了ACh受体蛋白。这种电鳐的电器官每克湿组织含有与眼镜蛇神经毒素(cobro—toxin)的结合位点可达到～3 nmol。纯化后的受体蛋白,与眼镜蛇神经毒素结合的比活力约10—12 nmol/mg蛋白。受体蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现两个主要条带,其表观分子量分别为38,000和53,000。ACh受体与~(125)I标记的眼镜蛇神经毒素结合的复合物在1％Triton X—100存在下用凝胶过滤法测其表观分子量约390,000。等电聚焦测得该复合物的等电点约5.6—5.7。根据超离心分析,纯化的受体蛋白的沉降系数为9S。     

胆囊收缩素对IL－1β损伤的胰岛β细胞功能的保护作用及其机制分析

本实验在分离培养的新生大鼠胰岛上,观察了胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）对白细胞介素－１β（ＩＬ—１β）损伤的胰岛β细胞功能的影响。并就其机制进行初步分析。结果表明：（１）ＩＬ—１β（５,１０,２０Ｕ／ｍｌ）能抑制葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌,其抑制作用具有量效关系,抑制率分别为５３．４％,６０．５％和７０．７％。（２）ＣＣＫ－８对ＩＬ－１损伤的胰岛β细胞的功能具有保护作用。预防性地给予ＣＣＫ－８（１０￣（－１０）,１０￣（－９）,１０￣（－８）,１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ）能防止ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用。治疗性地给予ＣＣＫ－８也能恢复胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的能力。（３）ＣＣＫ　Ａ型受体阻断剂Ｌ３６４７１８（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＣＣＫ－８的保护作用,表明这一作用可能是通过ＣＣＫ受体实现的。（４）ＩＬ－１β抑制胰岛素分泌的同时,能升高胰岛组织内ｃＧＭＰ水平,而ＣＣＫ－８能阻止ＩＬ－１引起的ｃＧＭＰ水平的升高。     

小麦叶绿体中细胞分裂素结合蛋白的特性

小麦叶绿体中的ＣＴＫ结合蛋白属热敏感蛋白,它与６－ＢＡ结合的最适温度约为２５℃;最适ｐＨ为８左右;在其蛋白分子上存在两类ＣＴＫ结合位点,高亲和力位点与６－ＢＡ结合的Ｋα值为１．１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,低亲和力位点的Ｋα值为９×１０－７ｍｏｌ／Ｌ;激动素、玉米素对６－ＢＡ的结合只有部分抑制作用,而ＡＢＡ、ＧＡ３、ＩＡＡ及腺嘌呤则无竞争作用。ＣＴＫ结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。     

一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８．等电聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分,其ｐＩ为９．１,Ｍｒ为７１００．毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性,已获得该毒素的两种晶型的大单晶,并测定其空间群为Ｐ２＿１２＿１２＿１,晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７,ｂ＝２６．６,ｃ＝５２．０,ＢｍＫＭＩ８－Ｂ：ａ＝３６．６４Ａ,ｂ＝３７．３１,ｃ＝３７．９５,已收集了ＢｍＫＭＩ８－Ｂ分辨率为１．７４的Ｘ射线单晶衍射数据。     

突触后细胞电活动促进突触发育的条件

突触在发育过程中体现出极大的可塑性,突触的简单形式：神经肌肉接点（Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒｊｕｎｃｔｉｏｎ,ＮＭＪ）在发育中的自发电活动的规率性变化常用来代征其突触塑造发育的程度．利用膜片钳技术对爪蟾胚胎ＮＭＪ突触后肌肉细胞进行全细胞电流钳制,并施予高频阈上电刺激可诱发ＮＭＪ处自发电活动的增强。深入的研究表明这种增强来自反复的去极化过程而不是单纯的膜电位升高;这种增强只有在施予电刺激的数目,频率,幅度到达一定程度才能诱发;Ｃｄ２＋胞外灌流实验提示Ｃａ２＋在肌细胞内的激增与这种增强有关。     

蝮蛇神经毒素引起的神经肌肉接头超微结构变化

当小鼠接受6—8微克(皮下注射、超最小致死量)的蝮蛇神经毒素后,一般经1—2小时便因呼吸麻痹而死亡。在中毒早期,即出现呼吸困难症状时所取出的样品中,神经肌肉接头超微结构均正常,但在中毒晚期,即呼吸即将停止之前所取出的样品中,接头前部分发生明显变化,主要是突触泡显著减少,甚至完全被排空,线粒体肿胀、破裂、变性和减少。但神经末梢轴突膜平滑匀整,未见Ω型凹陷的形成,突触裂隙和突触后皱褶亦未见变化。这些结果提示,蝮蛇神经毒素也可能和太攀蛇毒素等相似,通过影响突触泡再循环过程,以阻遏神经肌肉间的传递。文中还讨论了蝮蛇神经毒素与其它蛇毒突触前毒素对接头超微结构作用的异同。     

［B3－Lys］－胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用１２５Ｔ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和１２５Ⅰ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜（ＨＰＭ）胰岛素受体结合特性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＥＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分别为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体中高亲和位点和低亲和位点结合的亲和常数分别为１．７２×１０９和２．２７×１０６Ｌ／ｍｏｌ,而猪胰岛素分别为１．２６×１０９和１．４７×１０６／ｍｏｌ。促脂肪细胞合成脂肪实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素也同样具有比天然猪胰岛素更高的离体生物活力,ＥＣ（５０）分别为０．１７５和０．３０１ｎｍｏｌ／Ｌ。可见［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素的受体结合能力和高体生物活力都为猪胰岛素的１．７倍。     

八肽胆囊收缩素对吗啡抑制大鼠离体空肠电与收缩活动的对抗作用

本研究探讨了八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）对抗吗啡对大鼠离体空肠电与收缩活动的作用。结果表明,吗啡能抑制ＡＣｈ对空肠峰波发放和收缩的加强作用;ＣＣＫ－８可对抗吗啡的作用;在此基础上,ＣＣＫ－Ａ受体拮抗剂ｄｅｖａｚｅｐｉｄｅ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）能完全翻转ＣＣＫ－８的抗吗啡作用,但是ＣＣＫ－Ｂ受体拮抗剂Ｌ－３６５,２６０在１０ｎｍｏｌ／Ｌ时可部分翻转、在３０ｎｍｏｌ／Ｌ时能完全翻转ＣＣＫ－８的作用。上述     

一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析,从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８。等电聚聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分,其ＰＩ为９．１,Ｍｒ为７１００,毒性测试结果表明,该组分对小白鼠有较强的毒性,对昆虫也有一定的毒性。已获得该毒素的两种晶全型的大单晶,并测定其空间群为Ｐ２１２１２１,晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７Ａ,ｂ＝２６．６Ａ,ｃ＝５２     

[^3H]Cortisol及[^3H]Dexamethasone在大鼠肝细胞膜上的特异结合位点

本研究应用［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ和［３Ｈ］ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＤＥＸ）两种配基,观察到大鼠肝细胞膜上存在一类糖皮质激素（ＧＣ）特异结合位点。这些位点与ＧＣ的结合具有饱和性、高亲和力及低容量。其平衡解离常数（Ｋｄ）分别为１２．８４±６．５８ｎｍｏｌ／Ｌ和４０．２７±２３．４４ｎｍｏｌ／Ｌ;最大结合容量（Ｂｍａｘ）分别为２．５７±１．８４ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白质与０．６４±０．１８ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白质（ｃｏｒｔｉｓｏｌ,ｎ＝４;ＤＥＸ,ｎ＝３;±ＳＥ）。动力学实验数据所得的Ｋｄ值与Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析所得的Ｋｄ值结果基本一致。［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ和［３Ｈ］ＤＥＸ饱和结合实验数据用Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析,均显示为直线。Ｈｉｌｌ系数则分别为０．９８８０和０．９９９０．竞争抑制实验结果表明,ｃｏｒｔｉｓｏｌ对［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ的结合位点有高度特异性竞争,比其它几种类固醇（强的松、黄体酮、ＲＵ４８６、ＤＥＸ）的竞争力至少强４０倍以上．用放射自显影技术进行研究,也提供了［３Ｈ］ｃｏｒｔｉｓｏｌ特异结合银粒位于大鼠肝细胞膜上的依据。     

海洋甲藻Pyrocistis elegans电激发光的研究

利用培养的海洋甲藻Ｐｙｒｏｃｉｓｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ（Ｐ．ｅｌｅｇａｎｓ）作为模型,研究外电场对细胞发光强度－时间曲线的影响。实验结果表明,细胞在外电场作用下所产生的发光（电激发光）行为与细胞本身有关,电激发光是一种延迟发光,其松驰过程不遵从指数衰减规律而表现出双曲线的规律。从物理学的角度讨论了细胞电激发光的相干性及外电场对生命系统和非生命系统的作用的区别,前者更重要的是信息作用,从而提示了研究外电场对细胞作用以及细胞与环境和细胞与细胞间通讯的新方法。     

番茄叶片胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶的部分性质研究

用从系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶为材料,研究了该酶的部分性质。以ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ）或ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）为底物,该酶的最适ｐＨ在４．８—５．０ 之间,最适温度在４４—４７℃之间。对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的热变性作用表现为两相变性曲线,Ｋｍ 值分别为０．３６ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ为底物）和０．６７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ （ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ 为底物）,Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（ＧｌｃＮＡｃ）和Ｎ－乙酰氨基半乳糖（ＧａｌＮＡｃ）是酶活性的竞争性抑制剂,Ａｇ＋ 和Ｈｇ２＋ 是酶活性的强抑制剂,金属离子Ｆｅ２＋ 、Ｆｅ３＋ 和Ｃｕ２＋ 也抑制酶活性。     

糖链结构不同的纤连蛋白与HT1080细胞结合研究

人血浆纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）与人胎盘纤连蛋白两者在肽链结构上基本相同,但人血浆Ｆｎ的Ｎ－糖链结构为二天线结构,而人胎盘Ｆｎ不仅Ｎ－糖链的数量增加,同时还含有多天线结构,分别用~（１２５）Ｉ标记这两种具有不同糖链结构的Ｆｎ,观察两者与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合的亲和性,结果发现,在４℃,人血浆Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１２９ｎｇ／１０~５细胞,解离常数为２．８３×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ,人胎盘Ｆｎ与ＨＴ１０８０细胞的饱和结合为１３３ｎｇ／１０~６细胞,解离常数为２．６４×１０~（－８）ｍｏｌ／Ｌ．因而,人血浆Ｆｎ与人胎盘Ｆｎ上Ｎ－糖链的不同并未影响其与受体的结合．