Prohibitin 1 的上调参与肝癌细胞的增殖和迁移

尽管已知prohibitin 1（PHB）与肿瘤有关,但很少有关于PHB在肝癌中的作用的报道．前期的糖蛋白质组学研究显示,PHB在高转移肝癌细胞株MHCC97-H细胞中被上调,且它可以被麦胚凝集素WGA所吸附．在本研究中,通过Western blotting和逆转录PCR实验证实,PHB在MHCC97．H细胞中的表达被上调约2倍．当PHB在MHCC97-H细胞中被过表达时,细胞增殖被抑制35％,细胞迁移率提高约2倍．本研究结果表明,PHB在MHCC97-H细胞中被上调,而且这种上调与肝癌细胞的增殖和迁移有关．     

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ过表达对人肝癌细胞粘着斑复合物介导的信号转导作用

为了探讨过表达N 乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ (GnT Ⅴ )后 772 1细胞侵袭、迁移等行为改变的机制 ,检测了GnT Ⅴ 772 1及pcDNA3 772 1两组细胞中与恶性表型密切相关的粘着斑激酶 (focalad hesionkinase ,FAK)、PTEN蛋白、蛋白激酶B(PKB)等重要信号分子的表达水平 ,同时测定了 2组细胞非贴壁依赖生长的能力 .利用Western印迹方法检测FAK、PTEN、PKB的表达或磷酸化水平 .利用poly hema使细胞非贴壁生长 ,2组细胞悬浮无血清培养 2 0h ,采用流式细胞仪方法检测细胞的失巢凋亡 (anoikis) .研究发现 ,转染GnT Ⅴ后的肝癌细胞的FAK表达无明显变化 ,FAK的酪氨酸磷酸化水平增高 70 %;而PTEN的表达下降了 4 9%;PKB的磷酸化增加 2 0 0 %;pcDNA3 772 1细胞已有明显凋亡 ,而转染GnT Ⅴ的 772 1细胞未发生凋亡 .结果提示 ,转染GnT Ⅴ后的肝癌细胞迁移力增强 ,可能与其FAK的磷酸化程度升高 ,激酶活力增强有关 ;而能逃逸失巢凋亡是因为PTEN的表达下降 ,PTEN蛋白的磷酸酶活性降低 ,细胞Akt PKB磷酸化水平保持在较高水平 .     

粘中着斑激酶在TNF—α和环己亚胺协同诱导人肝癌细胞SMMC—7721凋亡中的作用

探讨了粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）在TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721细胞凋亡中的作用,利用转染FAK反义质粒来特异性降低SMMC－7721细胞的FAK含量,用Western杂交的方法来检测蛋白激酶B（PKB）的蛋白含量,以及用流式细胞仪的方法来检测细胞的凋亡。研究发现TNF－α本身并不能诱导SMMC－7721细胞发生凋亡,而只有当用环己亚胺和TNF－α协同处理时才发生凋亡。在TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡过程中,PKB蛋白含量的降低,提示PKB的蛋白水平与凋亡的发生密切相关。当用FAK反义质粒降低SMMC－7721细胞的FAK含量（约降低了60％）后,细胞对TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡的敏感性在用低剂量TNF－α处理的情况下增加,而在高剂量TNF－α和处理的情况下降低,相应地,在低剂量TNF-α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的PKB含量低;而在高剂量TNF－α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的要高。结果提示,FAK对TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721凋亡的过程有一双相作用,并且该过程可能与PKB有关。     

P13K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路调节肝癌细胞增殖的机制．用LY294002特异性阻断P13K信号通路后,人肝癌细胞（SMMC-7721）的增殖明显被抑制．RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达．在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复．放线菌酮（Chx）处理实验表明,阻断P13K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加．进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的rnRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性．但在SMMC-7721中分别转染P13K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达．这些结果表明,P13K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节．     

视黄酸和亚硒酸钠对肝癌细胞某些表型逆转的加和作用

 人肝癌细胞株SMMC-7721经1μmol/L视黄酸和或2.5μmol/L亚硒酸钠处理后,膜上纤维连接蛋白沉着量逐日上升,且较相应天数的对照组细胞增加,而甲胎蛋白分泌量和~3H-TdR参入率被明显抑制。视黄酸和亚硒酸钠同时处理的联合组作用强度接近于两者单独使用时作用强度的加和。对以上结果和视黄酸及亚硒酸钠使肝癌细胞接触抑制恢复及表型逆转的关系作了讨论。     

大鼠丙酮酸激酶同工酶催化性质的比较研究

利用DEAE纤维素柱层析分离大鼠组织匀浆105,000g上清中的丙酮酸激酶(PyK)同工酶,发现肝和肾中存在L及K两型PyK,肝中以L型为主,而肾中以K型较多,L:K的平均活性比值分别为6.07及0.248。但骨胳肌中只有M型。用聚丙烯酰胺凝胶板电泳也可获得相似的同工酶谱。用硫酸铵沉淀结合层析又从大鼠红细胞中提取了R型PyK,与上述三型一起,进行了催化性质的比较研究。结果如下: 1.K型对热极不稳定,而M型对热最为稳定。2.L型和K型可利用GDP代替ADP作为底物,但GDP作为底物时的酶活性远小于ADP作底物时的活性。M型利用GDP的能力很小,而R型几乎可忽略不计。3.某些氨基酸可抑制PyK,K型PyK对氨基酸的抑制最为敏感,可使其抑制的氨基酸最多,而M型最不敏感,在测定的12种氨基酸中仅受苯丙氨酸抑制,L型与R型介于上述两型之间,可使它们抑制的氨基酸种类相似。4.氨基酸对PyK的抑制作用与它们代谢途径中成糖或成酮的关系尚不明确,而与其结构有密切关系。能抑制PyK的氨基酸主要是非极性氨基酸,如丙、正丁、脯、苯丙氨酸等,当这四种氨基酸的侧链羟化成相应的丝氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸或酪氨酸后,其抑制作用明显减弱或消失。5.小侧链的脂肪族氨基酸(如半胱、丙、正丁)对L型PyK的抑制作用强于大侧链的芳香族氨基酸(苯丙、酪);但对K型PyK的抑制却弱于大侧链芳香族氨基酸。并且L型对小侧链氨基酸的敏感性大于K型,而对大侧链氨基酸的敏感小于K型。6.丙氨酸对L、R、K三型PyK的抑制作用与其α-氨基和直链结构有密切关系,其中α-氨基尤为重要。7.果糖-1,6-二磷酸(FDP)能激活R及K型PyK,当底物PEP处于低浓度时,尚可激活L型。FDP还能逆转各种氨基酸对四型PyK同工酶的抑制作用,其中对R及K型的逆转效果较大。FDP对各种氨基酸抑制的逆转效应并不相同。8.丝氨酸可显著激活K型PyK,也可逆转氨基酸对K型PyK的抑制作用,其逆转效率仍因氨基酸而异,但其激活作用与FDP不能相加。对上述结果作了讨论,认为这些PyK同工酶催化性质的差异可有助于鉴定未知样品中的同工酶类型。还提出一个PyK同工酶上有两类氨基酸结合点的假说。     

人胚肺成纤维细胞株纤连蛋白结构域N—糖链结构研究

本文应用明胶、肝素亲和层析二步法首先纯化了人胚肺成纤维细胞培养液的纤连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为一条带,然后用胰糜蛋白酶消化纯化的Ｆｎ所获得的酶解液,经分离分别得到明胶结合片段和肝素结合片段,再应用凝集素－ＨＲＰ染色的Ｗｅｓｔｅｒｎ转移电泳法研究糖链结构,结果证实：１．Ｆｎ中明胶结合片段（４４ｋｄ）中含有二天线和多天线复杂型糖链,并接有平分型ＧｌｃＮＡｃ糖基、核     

磷脂转运蛋白的结构及其生物学意义

磷脂转运蛋白的结构及其生物学意义朱全胜,查锡良（上海医科大学生化教研室,上海２０００３２）关键词磷脂转运蛋白,磷脂,细胞膜细胞膜由磷脂双层组成,双分子层中的磷脂分子时刻处在变化之中,不仅表现为磷脂分子从合成部位持续流向细胞膜及膜脂反向流到细胞内,而且...     

胆碱摄取及磷酯酰胆碱合成的调节研究

本文研究了多种氨基酸、乙醇胺和甲基醇胺对细胞摄取胆碱和合成磷脂酰胆碱的影响,发现多种氨基酸非竞争性抑制细胞摄取胆碱。含胆碱代谢物的分析显示胆碱转变成ＣＤＰ－胆碱,随之形成ＰＣ均不受氨基酸影响。乙醇胺竞争性的抑制胆碱摄取,且存在剂量依赖关系。乙醇胺能明显抑制胆碱激酶活,但细胞内胆碱和磷酸胆碱的代谢池并不改变,提示乙醇胺不影响胆碱转变成磷酸胆碱,根据ＣＤＰ－胆碱和ＰＣ的比放射性分布,乙醇胺也不影响ＰＣ