消化道组织块黏液细胞的组织化学染色

目的：探索中华蟾蜍、黑斑蛙消化道组织块黏液细胞的组织化学染色。方法：利用阿辛蓝-过碘酸Schiff（AB-PAS）反应,对消化道组织块黏液细胞进行染色和观察。结果：对消化道壁较薄的组织块（食管、小肠、大肠）,采用3％乙酸3min、1％阿尔新蓝30min、3％乙酸3min、3％过碘酸氧化10min、Schiff反应20min染色,即可达到良好染色效果;对消化道壁较厚的组织块（胃）,则应采用3％乙酸9min、1％阿尔新蓝70min、3％乙酸9min、3％过碘酸氧化30min、Schiff反应60min染色,将能达到良好染色效果。结论：经过染色可将黏液细胞分为四个类型：Ⅰ型红色,PAS染色阳性,AB染色阴性;Ⅱ型蓝色,PAS染色阴性,AB染色阳性;Ⅲ型紫红色,PAS染色强阳性,AB染色弱阳性;Ⅳ型蓝紫色,PAS染色弱阳性,AB染色强阳性。     

辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的简易过碘酸钠法

辣根过氧化物酶(HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA)的方法多为过碘酸钠法。1982年薛采芳等采用过碘酸钠改良法获得满意效果。我们依照Wilson等报道的HRP标记     

介绍一种快速混合的苏木精染液

苏木精(Hematoxylin)系从豆科植物苏木(Caesa lpinia sappan)中用乙醚浸制提炼而成,是一种常用的优良核染料。在苏木精的结构式中(见图1、2),因无双键的醌式结构,无发色团,所以它本身不是染料而必须经氧化成为氧化苏木精时才能染色。这个过程称为“成熟”。使苏木精“成熟”的方法有二:一是在苏木精溶液中加入氧化剂如氧化汞,高锰酸钾,碘酸钠,重铬酸钾等,使苏木精脱氢成为醌,才呈发色团,这个过程较快;二是配制成苏木精原液并暴露于空气中3-6周,使其氧化,这个过程较慢。另外,由于苏木精对组织的亲合力很小,即使成熟后变为氧化苏     

过碘酸氧化的腺嘌呤核苷及其衍生物与苯肼纤维素作用的观察

过碘酸氧化磷位二羟基的性质会用于区分脱氧核糖核苷及核糖核苷,并用以确证核糖核苷键的立体构型。Khym及Cohn用过碘酸氧化核苷及核苷酸所形成相应的二醛与苯肼作用生成苯腙。本文探索了过碘酸氧化的腺嘌呤核苷及其衍生物与苯肼纤维素的作用情况,发现二者颇有差异。     

过碘酸钠氧化辣根过氧化物酶(HRP)中的若干问题及高效果的标记方法

本文研究了过碘酸钠氧化HRP的某些条件。戊二醛和磷酸盐对酶有一定的影响,而低浓度甲醛和醋酸盐缓冲液(HAcB)则无明显影响。氧化的最适pH在5.6左右。过碘酸钠氧化酶的适宜浓度在0.06～0.015M之间。氧化时间为10～30分钟,过长则影响结合物效价。讨论了加入乙二醇的必要性。醛化的HRP在pH9左右与抗体结合作用的适宜时间为16～24小时,过长则影响酶与抗体的活性,过短则结合不够完全。封闭结合物上多余醛基的KBH_4适宜量为0.1～0.2mg/mg酶。本法标记抗体、抗原和葡萄球菌A蛋白的效果均较好,方法简易,标记效果取决于酶是否能与抗体和抗原相结合,以及标记过程中酶和抗体活性是否受影响。     

肺孢子菌肺炎小鼠模型建立及免疫学评价

目的 构建肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia, PCP)小鼠模型并进行免疫学评价。方法 采用重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠气管滴注肺孢子菌构建PCP模型,通过实时荧光定量PCR及肺组织六胺银染色进行病原学鉴定,通过苏木素-伊红染色评估肺组织损伤程度,通过免疫荧光染色和流式细胞术进行免疫学评价。结果 模型组小鼠感染6周后,肺组织肺孢子菌rRNA拷贝数显著高于假手术组,六胺银染色可见肺孢子菌滋养体和包囊,肺组织肺泡壁增厚,肺间质增宽,大量Gr-1⁺中性粒细胞CD68⁺巨噬细胞浸润,中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)和巨噬细胞活化标志物一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)活化水平显著升高,肺内及肺泡灌洗液的中性粒细胞和单核细胞数量及比例显著高于对照组和假手术组。结论 采用SCID小鼠进行气管滴注肺孢子菌能构建稳定的PCP小鼠模型,该模型表现出与临床相似的免疫学特...     

碘酸钠诱导小鼠视网膜色素上皮变性模型的研究

目的:探讨股静脉注射不同剂量的碘酸钠后观察C57BL/6J小鼠视网膜色素上皮形态学及视网膜功能的变化。方法:选取30只6-8周龄C57BL/6J的雄性小鼠,随机分为正常对照组6只,实验1组(静脉注射碘酸钠10 mg/kg)6只,实验2组(静脉注射碘酸钠20 mg/kg)6只,实验3组(静脉注射碘酸钠35 mg/kg)6只,实验4组(静脉注射碘酸钠50 mg/kg);正常对照组注射同等剂量的生理盐水。实验组分别经股静脉注射碘酸钠10、20、35、50 mg/kg,于注射后1周行电生理检测,1周、2周行OCT检测。所有小鼠2周后摘除眼球制作冰冻切片以及RPE细胞平铺片进行HE染色、免疫荧光染色。结果:正常对照组小鼠视网膜各层排列整齐,各层之间分界清晰,外核层形态正常,RPE层细胞排列紧密。注射后1周,通过ERG可发现碘酸钠10 mg/kg组小鼠视锥细胞功能已出现损伤,但OCT显示视网膜形态正常;而20 mg/kg以及35 mg/kg小鼠除了视锥细胞功能出现损伤,视杆细胞的功能均降至对照组1/2;且视网膜外核层均出现异常高亮区,外层视网膜丧失分界清晰的结构。注射后2周,10 mg/kg组小鼠通过RPE细胞平铺片即可发现RPE细胞已出现轻微损伤。而20 mg/kg、35 mg/kg组小鼠通过OCT可发现外核层与对照组相比均明显变薄,视网膜出现退行性改变;且通过HE染色和RPE细胞平铺片以及冰冻切片,我们可以发现20 mg/kg、35 mg/kg小鼠外核层出现波浪状改变,单层RPE细胞的连续性被破坏,呈现剂量依赖性。结论:碘酸钠20 mg/kg组经静脉注射后,可以很好的模拟年龄相关性黄斑变性的发病过程,视网膜出现明显的形态和功能变化,为视网膜色素变性提供一个较好的小鼠动物模型。     

高碘酸-硝酸银染色法鉴定糖蛋白

对传统的糖蛋白染色方法(高碘酸-Schiff法)进行了改进。蛋白质的氧化采用高碘酸法,染色时采用硝酸银染色法。此方法灵敏度是高碘酸-Schiff法的100倍,而且比高碘酸-Schiff法节省16~18h。     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

一种半氧化苏木素染液的配制方法

一种半氧化苏木素染液的配制方法梁化印郭瑞峰（解放军第二五二医院病理科保定０７１０００）苏木素染液配制方法较多,传统方法有自然氧化和加氧化剂的人工氧化两种。其目的都是将无染色能力的苏木素氧化后,在媒染剂的作用下产生有较强染色能力的三氧化苏木红。但自然氧...     

内耳整块染色石蜡包埋制片法

内耳制片常用的是火棉胶——石蜡双重包埋H-E片染法。此法制片步骤较多,不易掌握。我采用Bouin氏固定液固定,H-E整块染色、石蜡包埋法制片,操作简便,易于成功,内耳的基本结构(前庭膜、盖膜、毛细胞都完好无损,如取材适当,可在同一切片同时显示壶腹嵴。染色液的配制: 1.苏木精染液的配制: 苏木精 25毫克硫酸铝钾 1.25克碘酸钠5毫克蒸馏水 75毫升由于以上药品称量很小,故需称的较准确。配出来的液体若呈现混浊,则是因为以上药品(主要是碘酸钠)称得不准造成的,这种混浊染色液不能用。 2.复制伊红染色液的配制: 将伊红(Y或B均可)0.5克溶于3毫升蒸馏水中,溶解后将冰醋酸—滴—滴加于其中,边滴边搅动,     

人胚胎干细胞传代培养及细胞化学染色特性

目的 体外建立人胚胎干细胞传代培养方法,研究人胚胎干细胞细胞化学染色特性.方法 以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层传代培养人胚胎干细胞,检测人胚胎干细胞、自发分化克隆及拟胚体的细胞化学染色特性.结果 人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上传30代以上其形态保持不变;人胚胎十细胞碱性磷酸酶、过碘酸-雪夫反应、α-醋酸萘酚酯酶染色阳性,自发分化克隆细胞阳性程度明显减弱;人胚胎干细胞形成的拟胚体碱性磷酸酶染色弱阳性,过碘酸-雪夫反应、α-醋酸萘酚酯酶染色阳性.结论 小鼠胚胎成纤维细胞能支持人胚胎干细胞传代培养,细胞化学染色结果能初步鉴别人胚胎干细胞未分化特性.     

湖北恒河猴体内恰氏内阿米巴的形态学观察

调查武汉动物园的恒河猴,发现自然感染恰氏内阿米巴(EntamoebachattoniSwellen-grebel,1914),采用生理盐水直接涂片法、卢戈氏碘液染色及铁苏木素染色封片,对滋养体和胞囊进行观察,并对滋养体、体核、包囊、囊核作了显微测量。恰氏内阿米巴滋养体大小为11—17μm,平均13.70±0.37μm(X±Sx),核为2.89±0.02μm,包囊为10.30±0.09μm和囊核2.83±0.03μm。双核型包囊少于1%,含有包涵体的包囊占50%,恒河猴自然感染恰氏内阿米巴为国内首次发现。     

玉米黄素转化为虾青素的工艺参数研究

本文通过氧化剂氧化玉米黄素得到虾青素,并对实验中的主要影响因素进行了筛选和优化。实验结果表明,以三氯甲烷做溶剂,溴酸钠为氧化剂,三氯甲烷/玉米黄素(v/m)为40,溴酸钠/玉米黄素为6,温度为30℃,pH为9.5,反应时间为12 h时,产物含量最高,达69%,产率为74%。通过液-质联用、核磁共振氢谱以及红外光谱确定了最终产物。     

用过碘酸氧化试验鉴定单抗抗糖表位特性

过碘酸在酸性条件下能氧化糖蛋白中糖的连羟基而不改变多肽链结构。将这一特性与ELISA或免疫印迹试验结合起来建立了检测单抗是否抗糖表位的方法。     

实验性铬酸钠中毒大鼠肾溶菌酶变化的研究

通过免疫组化和图像分析对实验性铬酸钠中毒大鼠肾溶菌酶变化进行了研究。结果显示：铬中毒后,近曲小管上皮细胞中溶菌酶变化最为明显。一次气管内注入０．００８ｍｇ／ｋｇ铬酸钠２天后,近曲小管上皮细胞中溶菌酶含量即较对照组升高,并随着剂量的加大而进一步升高。一次注入０．９８ｍｇ／ｋｇ铬酸钠后第２天即较对照组升高,二周内持续升高,第１４天达高峰,随后随着肾损伤的修复逐渐降低。结果说明：溶菌酶可作为近曲小管上皮细胞损伤的一个早期敏感指标来研究铬等重金属的肾毒性作用。     

黄石爬(鱼兆)外周血液指标特征的观察

黄石爬(鱼兆)(Euchiloglanis kishinouyei)属于较为原始的高原鱼类。通过生化分析仪测定红细胞数及血红蛋白含量,Wright′s染色及细胞化学方法,即过碘酸雪夫(PAS)、酚氧化酶(PO)、苏丹黑B(SBB)和过氧化物(POX)染色,观察其外周血细胞的显微结构及细胞化学特征。黄石爬(鱼兆)的红细胞数为(0.55±0.06)×1012个/L,血红蛋白含量为(73.00±5.57)g/L;血细胞中红细胞占98.03%,且其细胞体积较大,白细胞中血栓细胞占比例最多,为37.06%,异嗜性粒细胞最少,为9.64%,异嗜性粒细胞分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。细胞化学染色显示,红细胞均呈阴性,白细胞存在染色特性差异,其中白细胞过碘酸雪夫(PAS)染色均为阳性,过氧化物(POX)染色除Ⅰ型和Ⅲ型异嗜性粒细胞外均为阴性。     

黄石爬鮡外周血液指标特征的观察

黄石爬鮡（Euchiloglanis kishinouyei）属于较为原始的高原鱼类。通过生化分析仪测定红细胞数及血红蛋白含量,Wright’s染色及细胞化学方法,即过碘酸雪夫（PAS）、酚氧化酶（PO）、苏丹黑B（SBB）和过氧化物（POX）染色,观察其外周血细胞的显微结构及细胞化学特征。黄石爬鮡的红细胞数为（0.55 ± 0.06）×1012 个/L,血红蛋白含量为（73.00 ± 5.57） g/L;血细胞中红细胞占98.03%,且其细胞体积较大,白细胞中血栓细胞占比例最多,为37.06%,异嗜性粒细胞最少,为9.64%,异嗜性粒细胞分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。细胞化学染色显示,红细胞均呈阴性,白细胞存在染色特性差异,其中白细胞过碘酸雪夫（PAS）染色均为阳性,过氧化物（POX）染色除I型和III型异嗜性粒细胞外均为阴性。     

介绍AgNORs的退染及复染技术

介绍ＡｇＮＯＲｓ的退染及复染技术朱建伟（山东省中医药研究所病理科济南,２５００１４）ＡｇＮＯＲｓ嗜银染色是临床及实验病理学特别是肿瘤病理学方面常用的染色方法。但有时因种种原因造成染色效果不理想,影响观察,如背景着色过深以及银染液沉渣等,需要进行重染。...     

心肌闰盘横纹切片制作改良法

心肌闰盘(intercalated disk)为心肌组织内同步兴奋的特化结构.心肌细胞末端互相连接成网,闰盘分布在细胞间连接处,在HE染色标本中呈深红色,需仔细辨认才行.而心肌闰盘及横纹是心肌结构中必须要观察的一部份,常规方法显示其结构,如Retterr氏法、Hemalinin氏法以及碘酸钠-苏木精心肌闰盘整块染色法,但步骤繁琐,染色不够稳定,常消耗大量的药品和人力.经我们改进整块组织染色切片,比其单片染色的更加清晰可辨,且易于批量制作教学切片.简介如下.