齐口裂腹鱼血细胞的发生

为了探讨齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)血细胞发生发育的模式,采用Wright’s、碘酸雪夫氏(PAS)和苏丹黑B(SBB)染色方法对齐口裂腹鱼的头肾、中肾、脾和肝组织印片进行染色,了解其发生的具体组织和发育的一般过程。结果表明:齐口裂腹鱼血细胞可分为红细胞系、淋巴细胞系、单核细胞系、粒细胞系和其他细胞,且这些细胞系的发育均经过3个阶段,即原始阶段、幼稚阶段、成熟阶段。通过观察和统计不同阶段各种血细胞的形态、大小、比例及染色特征,发现原始阶段的血细胞体积较大,其中原始单核细胞最大,大小为(18.90±1.59)μm×(16.32±0.70)μm,在4种组织中原始阶段的红细胞和单核细胞在头肾中所占比例最大,分别为0.64%和0.59%,原粒细胞和原淋巴细胞分别在中肾和脾中比例最大,在肝中少量存在,此外在各组织印片中均发现血栓细胞的存在,在肝中发现巨噬细胞。因此头肾、中肾和脾是齐口裂腹鱼的主要造血组织,少量细胞在肝中产生。粒细胞发育过程中,除原始粒细胞PAS染色阴性外,其他阶段均呈阳性,且阳性随不断成熟逐渐增强;单核细胞从原单核细胞到成熟的单核细胞,PAS阳性逐渐增强;而SBB染色发现,粒细胞、淋巴细胞及单核细胞均呈阳性,未成熟的细胞染色程度不一致,成熟的细胞阳性染色最为强烈。在红细胞系发育过程中经历了细胞由大变小再变大的过程,而粒细胞和淋巴细胞发育过程仅出现由大变小的过程,在红细胞的发育过程中还出现了染色质固缩和血红蛋白增加。     

SPARC基因过表达对SKM-1细胞凋亡的影响

构建SPARc基因过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）-u／胞系SKM-1细胞,探讨SPARc基因过表达对!＆MDS细胞系SKM一1细胞凋亡的影响。XpcD—NA．SPARC为引物,PCR扩增SPARc基因;将靶基因克隆入慢病毒载体pGC—GV,构建含有删Rc基因的重组慢病毒载体pGC—GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体pGC-GV-5黝尺C砗专染人MDs细胞系SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测sKM-1细胞中SPARCmRNA表达,Westernblot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定小剂量阿糖胞苷（30ng／mL）对实验组增殖抑制的影响,AnnexinV检测．洲尺c基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示,构建含有SPARc基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为（64．25±1．42）％;转染后,SPARCmRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高,加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。由此说明,作者成功构建了携带．＆SPARc基因的慢病毒载体,转染．NSKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因,SPARC过表达可抑制细胞增殖,且联合小剂量阿糖胞苷（30ng／mL）更有效地抑制SKM-1细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

对马铃薯具促生抗病作用的砖红镰刀菌及其遗传转化体系构建

本研究从药用植物马比木Nothapodytes pittosporoides的花瓣中分离获得了1株真菌,经形态学与ITS分子共同鉴定为砖红镰刀菌Fusarium lateritium。使用该菌处理马铃薯后发现,显著增强了马铃薯对晚疫病菌的耐受性,处理组植株感染率为37.5%,相较对照组87.5%的感染率显著降低;植株生长测定发现,处理组的马铃薯生物量、株高、根系生物量和主根数相较于对照组分别提高了1.25、1.19、2.3、1.47倍,表明该真菌对马铃薯还具有促生作用。为探究砖红镰刀菌促生抗病的分子机理,检测了植物生长素合成和免疫防御相关基因的表达模式,结果表明处理组植株生长素合成相关基因（StYUC5）显著上调,而免疫相关激素茉莉酸和水杨酸合成相关基因（StPI-I、StPAL和StPR1A）也不同程度上调。由此推测,砖红镰刀菌通过调控植物激素相关基因的表达介导马铃薯的促生和抗病。为了进一步探究砖红镰刀菌对马铃薯促生抗病的分子基础,构建了其遗传转化体系,并进行了优化,获得了GFP标记菌株。     

添加物对D-核糖生物合成的影响

采用枯草杆菌Ｄ２０１转酮醇酶缺陷型突变株,研究菌种生长与Ｄ－核糖合成优化工艺。在培养剂中添加山梨醇、ＫＨ２ＰＯ４和芳香族氨基酸,发现对菌的生长有刺激作用,特别是山梨醇,它可缩短延迟期,促进菌的生长。此外,用葡萄糖酸钙部分代替葡萄糖能增加Ｄ－核糖的产量,用葡萄糖和葡萄糖酸的混合碳源合碳源发酵,Ｄ－核糖产量可达到５２ｇ／ｌ。     

一株10-羟基喜树碱转化内生菌的筛选及鉴定

目的:利用从喜树中分离的内生真菌将喜树碱转化为10-羟基喜树碱。方法:采用摇瓶发酵进行生物转化,并利用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)方法进行转化结果分析。通过内生真菌ITS区扩增,测序及系统进化分析等方法对菌种进行鉴定。结果:得到1株能将喜树碱转化为10-羟基喜树碱的菌株,结果显示该菌种为青霉菌属,转化率为7.37%。结论:微生物转化可作为化合物结构修饰以及得到目标化合物的重要手段。     

一株内生砖红镰刀菌促进烟草生长和增强青枯病抗性

课题组前期报道了一株对马铃薯具有促生防病作用的内生砖红镰刀菌Fusarium lateritium (FL617)。为拓展该菌株的应用范围,本研究以同为茄科作物的烟草为研究对象,探究了砖红镰刀菌对其生长和抗病的影响。结果表明,与对照组相比,处理组叶表面积、主根数、叶片数、叶绿素a和叶绿素b含量分别提高了5.0、3.9、1.4、1.3和1.3倍;该结果表明砖红镰刀菌对烟草具有促生作用。生测结果表明,砖红镰刀菌增强了烟草对青枯病的抗病性,其青枯病病情指数下降约30%。植物激素合成相关基因表达模式分析,发现处理组植物激素合成相关基因表达显著上调(1.6-39.9倍);用青枯病菌Ralstonia solanacearum感染寄主植物后分析其水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)和R基因信号相关基因的转录模式,发现与对照组相比,处理组SA、JA相关基因均显著上调(1.2-8.3倍),仅有一个R基因显著下调(50%)。进一步用GFP标记的菌株进行荧光定殖观察,发现植物根系周围簇生着带有绿色荧光信号的真菌菌丝,表明砖红镰刀菌可以定殖于烟草根系。综上所述,推测砖红镰刀菌F. lateritium能够通过定殖于烟草根系介导植物激素、免疫防御相关基因的表达从而影响植株的生长发育和抗病性。     

Hyper-CVAD/MA治疗复发或难治性弥漫大B 细胞淋巴瘤的临床研究

目的:探讨Hyper-CVAD/MA方案治疗复发或难治弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)的疗效及安全性。方法:观察26例经系统化疗后复发或难治的DLBCL患者接受Hyper-CVAD/MA方案化疗,21-28天为1周期,连续2个周期评价疗效及安全性,分析生存情况。结果:全组26例患者中,总有效率为46.15%,其中完全缓解(complete remission,CR)3例(11.54%),部分缓解(partial remission,PR)9例(34.61%),全组患者中位生存时间为10(2-25)个月,1年和2年总生存率分别为28.57%、14.29%。不良反应主要表现为III-IV度骨髓抑制及继发的肺部感染,其他包括胃肠道反应、口腔炎、肝功能异常等。结论:Hyper-CVAD/MA治疗复发难治DLBCL有一定的疗效,且患者可耐受,可作为二线方案的一个选择。     

低分子量透明质酸片段通过toll样受体4信号途径激活枯否细胞

高分子量透明质酸（high-molecular-weight hyaluronic acid，HMW-HA）是重要的肝脏基质，分子量高达2×10^6Da以上，可被活性氧分子（reactive oxygen species，ROS）等降解成低分子量透明质酸片段（hyaluronic acid fragments，HA fragments），后者能被toll样受体4（toll-like receptor4，TLR4）识别并激活免疫细胞诱发炎症反应。基于枯否细胞表达TLR4，推测HA fragments通过激活枯否细胞TLR4信号系统而启动肝脏缺血再灌注损伤。从TLR4基因突变型（C3H／HeJ，TLR4^Mut/Mut）及野生型（C3H／HeN，TLR4^＋/＋）小鼠分离肝脏枯否细胞常规培养，用酶降解及色谱柱分离方法制备HA fragments，观察HMW-HA及HA fragments激活枯否细胞的差异，检测培养上清肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化；枯否细胞p38MAPK信号通路的活化；用特异性p38MAPK阻断剂—SB-203580，阻断p38MAPK活化后，观察培养上清中肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化。结果显示HA fragments可以促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子，不能诱导TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。而HMW-HA既不能促进TLR4^＋/＋枯否细胞也不能促进TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。采用多黏菌素中和脂多糖后，HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力不变，这一过程伴随p38MAPK信号通路的活化。当运用p38MAPK信号通路的特异性阻断剂SB-203580，抑制p38MAPK活性时，HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力显著下降。因此与基质组成成分HMW-HA不同，HA fragments可以通过TLR4激活枯否细胞，促进其分泌促炎因子诱发炎症反应，这一过程依赖于p38MAPK的激活。     

大剂量rHuEPO治疗肾性贫血的临床研究

目的:探讨应用大剂量重组人促红细胞生成素(rnuEPO)治疗肾性贫血的效果及机制.方法:对38例处于慢性肾脏病(CKD)3～5期的贫血患者给予佳林豪1.2万IU皮下注射,每周1次,连续12周,同时补充铁剂、叶酸和维生素B12;骨髓穿刺进行铁染色和显微图像分析,比较治疗前后血清铁蛋白(SF)、血清铁(SI)及铁粒幼细胞计数,对总红系所占百分数(E(与SI、SF、红细胞压积(Hct)行相关分析,治疗前后取血检测红细胞压积(HCT)、RBC、血红蛋白(Hb).结果:治疗过程中大部分患者在EPO注射12周后HCT、RBC、Hb均比用药前有显著增高,骨髓红系增生较治疗前明显活跃,各类幼红细胞比率及E(总红系所占百分数)均显著升高,其中以晚幼红增生最为明显,SI、SF及铁粒幼细胞计数均明显降低,治疗前后骨髓△E%与血△RBC%、△HCT%呈高度正相关,△E%与△SF%、铁粒幼细胞计数变化率呈中度负相关,△E%与△SI%两者呈低度负相关.结论:大剂量重组人促红细胞生成素治疗肾性贫血效果显著.     

无陪护护理模式推广分析

总结了无陪护护理的实施情况,分析了该模式可能带来的负面效应和面临的挑战,针对人力资源数量和结构的不适应、护理队伍积极性不够、医院护理支持系统不完备、尚无合理的无陪护护理收费机制等问题,从宏观和微观层面提出相关建议。