长非编码RNA SNAI3-AS1调控人软骨细胞C28/I2增殖能力及退变的机制研究

摘要 目的：为了探究长非编码RNA SNAI3-AS1（LncRNA SNAI3-AS1,即SNAI3-AS1）在骨性关节炎（osteoarthritis,OA）进展中的作用与机制。方法：通过全转录组测序筛选出在OA中差异表达的lncRNA SNAI3-AS1,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测SNAI3-AS1在软骨细胞退变模型中的表达情况。在软骨细胞C28/I2中分别转染SNAI3-AS1特异性siRNA或真核过表达质粒,分别敲低或过表达SNAI3-AS1,通过MTT、平板克隆形成和EdU掺入实验检测细胞增殖活力,Western Blot检测炎症和细胞外基质蛋白的表达情况。通过生物信息学网站预测SNAI3-AS1相互作用的miRNA和下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因和RIP实验进行验证。结果：相较于正常软骨细胞, SNAI3-AS1的表达水平在OA中显著下调。敲低正常软骨细胞中SNAI3-AS1的表达后,软骨细胞的增殖能力减弱并促进了软骨细胞的退变,而在OA模型的软骨细胞中过表达SNAI3-AS1后,软骨细胞的增殖活力加强并抑制了软骨细胞的退变。在机制上,SNAI3-AS1可充当竞争性内源性RNA（ceRNA）,经海绵吸附miR-2278间接上调PRELP,发挥促进软骨细胞增殖和抑制其退变的作用。结论：LncRNA SNAI3-AS1通过LncRNA SNAI3-AS1/ miR-2278/PRELP轴参与骨性关节炎的发生发展过程。     

实验性铬酸钠中毒大鼠肝Ⅳ型胶原变化的研究

用抗Ⅳ型胶原单克隆抗体免疫组化法、病理组织学及图象分析对实验性铬酸钠中毒大鼠肝进行了研究。一次气管内注入0.04 mg/kg Na_2CrO_42天后肝组织即出现病理改变和Ⅳ型胶原免疫组化阳性产物增加。一次注入0.98 mg/kg Na_2CrO_4后第2～28天Ⅳ型胶原免疫组化阳性产物均较对照组增加。增加的程度与肝病变程度一致,且随着肝组织的修复而下降。结果说明铬染毒所致的Ⅳ型胶原的改变与肝的病理改变密切相关。     

Bmi1过表达通过促进增殖、抑制凋亡纠正活性维生素D缺乏引起的骨量降低

摘要 目的：探索B淋巴瘤Mo-MLV插入区1（B cell-specific MLV integration site-1, Bmi-1）过表达能否通过促进增殖、抑制凋亡改善1,25-二羟基维生素D (1,25-dihydroxy vitamin d,1,25(OH) ₂D)缺乏引起的小鼠骨质骨量丢失。方法：取8月龄Bmi-1 ^Tg 、Bmi1 ^Tg 1α(OH)ase^+/-与 1α(OH)ase^+/-小鼠以及同窝野生型（wild type, WT）小鼠椎骨组织,通过流式细胞术及TUNEL染色检测间充质干细胞周期变化及凋亡水平,通过PCNA染色及免疫组织化学染色检测小鼠椎骨组织中Bcl-2、Caspase-3等指标的变化,通过Western blot检测小鼠椎骨中Caspase-3、CDK4、CDK6、OPN、OCN等蛋白表达量的差异,通过ALP染色检查成骨细胞骨形成水平。结果：在骨髓间充质干细胞中过表达Bmi1可以通过促进增殖,抑制凋亡、增加成骨细胞骨形成来纠正1α(OH)ase^+/-小鼠的骨量降低。结论：Bmi1是1,25(OH) ₂D的关键下游靶点,在防止1,25(OH) ₂D缺乏引起的骨丢失方面起着至关重要的作用。     

经冠脉转染肝细胞生长因子促进猪梗死后心衰模型干细胞动员的研究

观察经冠脉转染腺病毒(adenovirus, Ad₅-)携带人肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)对猪心梗后心衰模型中干细胞动员的作用. 12只苏中幼猪, 随机分成转染Ad₅-HGF组(治疗组)和转染未携带肝细胞生长因子的腺病毒载体组(mock-vector对照组), 每组6只. 结扎前降支制成心肌梗死模型, 手术后四周行冠脉造影时给药, 同时行门控心肌灌注显像评价心肌灌注及心功能情况; 给药三周时, 再次行门控心肌灌注显像, 然后处死动物取心脏组织, 酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测肝细胞生长因子蛋白表达; 免疫组化检测基因转染后梗死心肌中干细胞的动员情况. 经冠脉转染Ad₅-HGF后心肌高度表达人HGF蛋白; 治疗组心肌组织中CD117⁺细胞数明显多于对照组, 并且同时表达 c-Met; 治疗组心肌血流灌注及左室射血分数(LVEF)较对照组明显改善. 经冠脉转染 Ad₅-HGF 能使心肌高度表达 HGF 蛋白; HGF 能增加动员至缺血区的CD117⁺干细胞, 并且该类细胞表达c-Met; HGF改善心功能及心肌灌注的作用不仅仅是血管新生, 可能还涉及到对干细胞的动员召集作用.     

长非编码RNA SNHG18对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响

目的:探究长非编码RNA SNHG18对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测人胃癌组织及癌旁组织和胃癌细胞系中lncRNA SNHG18的表达;采用MTT和克隆形成试验观察转染SNHG18过表达质粒后胃癌细胞BGC823增殖活力的变化;通过流式细胞术检测lncRNA SNHG18对胃癌细胞BGC823凋亡的影响。结果:相较于癌旁组织和胃正常粘膜上皮细胞系GSE-1,胃癌组织及胃癌细胞系中SNHG18的表达水平显著降低(P0.05);胃癌细胞过表达SNHG18增殖活力以及克隆形成的能力均显著降低(P0.05),而细胞凋亡率明显升高(P0.05)。结论:胃癌组织中长非编码RNA SNHG18呈低表达,可促进胃癌细胞增殖并抑制其凋亡,可能在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。     

实验性铬酸钠中毒大鼠肾溶菌酶变化的研究

通过免疫组化和图像分析对实验性铬酸钠中毒大鼠肾溶菌酶变化进行了研究。结果显示：铬中毒后,近曲小管上皮细胞中溶菌酶变化最为明显。一次气管内注入０．００８ｍｇ／ｋｇ铬酸钠２天后,近曲小管上皮细胞中溶菌酶含量即较对照组升高,并随着剂量的加大而进一步升高。一次注入０．９８ｍｇ／ｋｇ铬酸钠后第２天即较对照组升高,二周内持续升高,第１４天达高峰,随后随着肾损伤的修复逐渐降低。结果说明：溶菌酶可作为近曲小管上皮细胞损伤的一个早期敏感指标来研究铬等重金属的肾毒性作用。     

Chk2在Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用和机制研究

摘要 目的：探究细胞周期检测点激酶2（cell-cycle checkpoint kinase 2，Chk2）在B淋巴瘤Mo-MLV插入区1（B cell-specific MLV integration site-1，Bmi1）缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用及可能的机制。方法：取5周龄WT、Bmi1^-/-、Chk2^-/-、Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏，采用HE染色观察肾脏结构变化，采用免疫荧光和Masson染色观察肾脏纤维化情况，采用衰老相关β半乳糖苷酶（Senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）染色观察肾脏衰老情况，采用免疫组化染色和western blot观察肾脏超氧化物歧化酶1（Superoxide Dismutase 1，SOD1）、超氧化物歧化酶2（Superoxide Dismutase 2，SOD2）表达水平和定位。从5周龄WT、Bmi1^-/-、Chk2^-/-、Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏皮质中提取和分离原代肾小管上皮细胞，采用免疫荧光和western blot检测其SOD1、SOD2表达水平。结果：与WT小鼠肾脏组织相比，Bmi1^-/-小鼠肾脏组织表现为体积变小、肾脏皮质厚度减少、肾小球数量减少，β-gal活性增加，SOD1和SOD2水平降低；与Bmi1^-/-小鼠肾脏相比，Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏体积增大、肾脏皮质厚度增加，肾小球数量增多，β-gal活性降低，SOD1和SOD2水平增加。与WT小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比，Bmi1^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中SOD1和SOD2水平；与Bmi1^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比，Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中抗氧化指标SOD1和SOD2增加。结论：Chk2通过抑制肾小管上皮细胞的抗氧化能力促进Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化。     

活性维生素D缺乏诱发与衰老相关的特发性肺纤维化

摘要 目的：研究活性维生素D缺乏致小鼠肺纤维化的作用与机制。方法：取7周龄同窝野生型（Wild Type, WT）小鼠,维生素D缺乏（1α(OH)ase^-/-）小鼠置于肺功能检测仪器中,对其吸气时间,最大吸气流速、呼出50%气量时对应的呼气流速、潮气量、分钟通气量,呼吸频率等指标进行分析。培养小鼠原代肺成纤维细胞,按基因型分为对照组、活性维生素D缺乏组,之后分组检测细胞SA-β-gal阳性率。另外取小鼠肺组织样本多聚甲醛固定后脱水浸蜡以制作石蜡组织切片, 对各组切片进行HE、Masson染色以观察肺的组织学形态的变化,使用免疫组织化学观察肺组织中的衰老相关蛋白（p16、p53）的表达量差异。结果：相较于同窝WT小鼠,1α(OH)ase^-/-小鼠通气功能显著减弱,肺成纤维细胞衰老程度和肺组织纤维化程度均有不同程度增加,且免疫组化结果显示肺组织中与衰老相关的p53及p16阳性的细胞也显著增加。结论：活性维生素D的缺乏能够诱发与衰老相关的特发性肺纤维化,可能的机制是通过激活p53/p16信号引发肺成纤维细胞提前衰老,继而引起肺组织异常纤维化。