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1.
抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
将抗真菌蛋白Rs-AFP1和Rs-AFP2全长cDNA插入表达质粒pET-22b/NcoI+SacI位点,构建成融合蛋白表达载体pRAF1和pRAF2.将不含信号肽编码序列的Rs-AFP1和Rs-AFP2cDNA分别插入pET-22b/Ncol+Sacl和pET-22b/Ndel+SacI位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体pRAF3、pRAF4和非融合蛋白表达载体pRAF5和pRAF6.将构建的上述各种表达载体转化E.coliBL21,挑菌落培养,IPTG诱导,使Rs-AFPs基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,pRAF3和pRAF4表达产物的抑菌活性较明显. 相似文献
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用浸泡法得到了(E160A)天花粉蛋白(trichosanthin, TCS),(E160D)TCS与Ade 和(E160A)TCS与FMP复合物的晶体.在Mar Research 面探测器系统上分别收集了0.20 nm ,0.19nm 和0.205 nm 分辨率的X 射线衍射数据,数据处理用Mar Scale 程序系统完成.用同晶差值Fourier法解析了(E160A)TCS-Ade,(E160D)TCS-Ade 和(E160A)TCS-FMP的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序,修正结果,晶体学R因子分别为0.166,0.176,0.179.键长和键角的RMS偏差分别为0.0010 nm 和2.503°,0.0013 nm 和2.665°,0.0012 nm 和2.676°.在这三个结构中均未见到Glu189侧链方向的改变.Ade 或FMP仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行.这一结果表明:TCS中的Glu160分别突变成Ala 和Asp,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应,但是活性降低了一些.可见Glu160对TCS与AMP的作用是重要的,但不是必要的. 相似文献
3.
本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP~PPi交换活力的最适pH分别为pH8.3和pH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别为2.6mmol/L、14.0μmol/L和5.0μmol/L:Vmax为7630单位/毫克;koat为9S-1。ATP~PPi交换活力对ATP和Arg的Km分别为8.3mmol/L和99μmol/L;Vmax为16320单位/毫克;kcat为18S-1。 相似文献
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大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的变种ArgRS306KR的纯化… 总被引:1,自引:1,他引:0
本文从含ArgRS306KR基因args306KR的pUC18重组质粒的大肠杆菌TG1转化子中经DEAE-Sephacel和Blue-Sepharose两步柱层析,得到电泳一条带的ArgRS306KR。纯酶的比活为2790单位/毫克。该酶氨酰化和ATP-PPi交换活力的最适PH分别为PH8.3和PH7.5。氨酰化活力对ATP、Arg和tRNA的Km分别2.6mmol/L、14.0μmol/L和5. 相似文献
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粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素—3融合蛋白的表达研究 总被引:1,自引:1,他引:0
利用PCR扩增得到粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段,将其分别克隆pGEM-T构建成GM-CSF/IL-3融合蛋白基因,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对72RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu,经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴 相似文献
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人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从诱导的人胚肺细胞HFL株中提取总RNA.经RT-PCR反应获取了人GM-CSFcDNA,DNA序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用PCR改造了人GM-CSF的cDNA5’端核苷酸序列,并将改造的人GM-CSF基因插入含T7启动子的质粒pET-11d构建成表达质粒pETC-5,将此质粒转化大肠杆菌株BL21(DE3)得到表达菌株BLEC4。表达菌株用0.5mol/LIPTG诱导2小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。SDS—PAGE电泳图谱扫描结果表明,rhGM-CSF产量占菌体总蛋白量的16%。ELISA和TF-1细胞培养测定表明,初步纯化和复性的rhGM-CSF具有天然的hGM-CSF生物活性。 相似文献
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我们以往的工作证实成年自发高血压大鼠(SHR与SHRsp)肠系膜动脉由乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张(EDR)减弱。为进一步探讨EDR减弱的机制,本文观察了一氧化氮(NO)合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)及EDRF灭活剂还原型血红蛋白(RHb)对卒中易感型自发高血压大鼠(SHRsp)与常压对照(WKY)大鼠肠系膜动脉ACh内皮依赖性舒张(EDR)的影响。发现L-NNA(10(-3)mol/L)可使SHRsp弱于WKY的AChEDR(10(-8)-10(-5)mol/L)的差异消失,RHb(10(-5)mol/L)则仅在10(-7)-10(-8)mol/LACh时使SHR(sp)肠系膜动脉EDR弱于WKY的差异消失。将WKY在加入L-NNA后的与加入RHb后的ACh(10(-8)-10(-5)mol/L)EDR进行比较,无显著差异。而将SHRsp在L-NNA后的与RHb后的ACh(10(-8)-10(-6)mol/L)EDR进行比较,则有显著差异。并且,SHRsp的有内皮肠系膜动脉条对RHb的敏感性与WKY接近,对L-NNA的敏感性则低于WKY。表明高血压时肠系膜动脉内皮依赖性舒张减弱中,EDRF机制与 相似文献
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利用突变的绿化荧光蛋白基因为标记构建新型克隆载体 总被引:1,自引:0,他引:1
将三位点替换突变的绿色荧光蛋白(GFP-S65T、V68L、S72A)基因插入到pBluescript SK(+)的XbaⅠ和SacⅠ之间,构建为新型的克隆载体pGreenLD。此质粒载体在E.coli中表达后使菌落在日光下呈现黄绿色,而在长波紫外光照射下呈现亮绿荧光,当外源DNA片段插入该载体的多克隆位点使gfp基因表达受阻时,转化的E.coli菌落为白色。因此可以用E.coli菌落黄绿色/绿色 相似文献
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蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建,表达及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过PCR定点突变的技术,将蛇毒蛋白Echistatin基因的C端进行了突变(Ala48→Arg48→,Thr49→Val49),模拟纤维蛋白N端的四肽(Gly-Pro-Arg-Val),以期增加Ecs(Echistatin)的活性,突变的基因重组到表达质粒pJC264上,经IPTG诱导,以CheY-Ecs融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的15 ̄20%,Sephadex G-75初步纯化 相似文献
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植物抗寒剂CR-4在湖南水稻生产中的应用效果段传嘉(湖南省水稻研究所,长沙410125)APPLICATIONEFFECFSOFTHECOLD-RESISTERCR-4INRICECULTUREOFHUNANPROVINCE¥Duanchuan-ji... 相似文献
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池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定 总被引:3,自引:0,他引:3
池塘养殖环境中底质-水界面营养盐扩散通量的现场测定FIELDDETERMINATIONOFDIFFUSIONFLUXOFNUTRIENTSFROMSEDIMENT-WATERINTERFACEOFCULTUREPOND¥SunYao(YellowSe... 相似文献
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植物抗寒剂CR-4在玉米上的应用效果初报韦绍力(广西忻城县古蓬种子站,546206)APRELIMINARYRESULTSOFTHECOLD-RESISTERCR-4APPLIEDTOMALZECULTURE¥WeiShao-li(GupengSee... 相似文献
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植物抗寒剂的不同使用方式在早稻和晚稻上的应用效果李志高(湖北省洪湖市农科所,433200)THEEFFECTSoFTHECOLD-RESISTERAPPLIEDINEARLY-RICEANDLATE-RICECULTUREWITHDIFFERENTM... 相似文献
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苹果短枝型品种叶片脱落酸含量的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
苹果短枝型品种叶片脱落酸含量的研究牛自勉,房耀仁(山西省农科院果树所,太谷030800)(北京林业大学,北京100083)STDDYONTHEABSCISICACIDINLEAFOFSPUR-TYPEVARIETYOFAPPLE¥NiuZi-mian... 相似文献
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木兰亚纲的分子系统学研究进展:(一)叶绿体rbcL基因序列的分支分析 总被引:1,自引:0,他引:1
木兰亚纲的分子系统学研究进展(一)叶绿体rbcL基因序列的分支分析王艇,苏应娟,C.R.Parks(中山大学生物系,广州510275)(美国北卡罗来纳大学生物系)PROGRESSINMOLECULARSYSTEMATICSOFTHEMAGNOLIID... 相似文献
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可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体(shTNFR55)在变铅青链霉菌中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从 He La 细胞中提取总 R N A,采用反转录 P C R 技术,从该总 R N A 中扩增了约 530 bp 的sh T N F R55 基因的 c D N A,并克隆至质粒 p U C m el中酪蛋白酶 m el Cl 分泌信号肽编码序列的下游,构建成含融合基因 m el/ T N F R 的重组质粒 p U C m el/ T N F R.把融合基因 m el/ T N F R 插入链霉菌表达质粒 p I J459 的多克隆位点,使之位于 erm 强启动子的下游,得到重组表达质粒 p I J459 m el/s T N F R.经 Southern 杂交证明重组质粒 p I J459 m el/s T N F R 插入了 s T N F R55 基因片段.对重组菌株 Streptom yces lividans(p I J459 m el/s T N F R)的发酵液进行 S D S P A G E、受体配基杂交( Ligand blot)分析、对 T N F 敏感的 L929 细胞的细胞毒性中和试验表明,可溶性肿瘤坏死因子受体 s T N F R55 在链霉菌中得到了分泌表达,表达产物具有生物学活性.表达产物的分子量约在 26~28 k D 之间. 相似文献