一例乙型肝炎患者体内不同HBV克隆的序列差异

采用ＰＣＲ扩增、噬菌体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例乙型肝炎患者体内ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ编码区和部分前Ｓ２区进行序列分析。结果发现同一患者体内获得的不同ＨＢＶＤＮＡ克隆间存在个别碱基的差异,而这种差异并非方法学本身产生的。由此得出的结论是,这种碱基“突变”反映了乙型肝炎患者体内ＨＢＶ基因组实际存在的多态性。     

多肽噬菌体展示

噬菌体展示技术已被广泛地应用于生物学研究的各个方面.利用它可融合表达多肽、蛋白质结构域和蛋白质.尤其是多肽噬菌体展示,已被作为一种便利的研究工具去发现和研究那些与受体、酶、凝集素、抗体、核酸以及其他生物分子亲和的多肽配基和酶的底物专一性,该技术在药物的发现,疫苗的设计等医学领域也有着潜在的应用价值.     

从噬菌体文库中筛选潜在的GMCSF的拮抗剂(英文)

以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ） 为筛选文库的靶分子, 通过高效筛选（Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇ, ＨＴＳ） 方法来筛选多种多肽噬菌体文库, 在一个以噬菌体主要蛋白质为载体的多肽噬菌体文库中筛选到了一些与ＧＭＣＳＦ结合的多肽, 并通过了ＥＬＩＳＡ和微淘选（ｍｉｃｒｏｐａｎｎｉｎｇ） 实验的证实。这些多肽先导化合物经过进一步的优化, 可能成为ＧＭＣＳＦ细胞因子的拮抗剂     

抑制肿瘤生长活性的内皮生长抑制剂EDI-8t

对内源性的内皮生长抑制剂的序列来源分析后,用RT-PCR方法从人脐带中获得了417bp的cDNA,并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9,然后转化毕赤酵母GS115获得重组表达菌株。表达菌株通过甲醇诱导表达后,将发酵液通过分离纯化获得重组蛋白纯品,命名为EDI-8t。体外实验结果表明,这个胶原蛋白VIII来源的rhEDI-8t蛋白能特异性地抑制牛主动脉内皮细胞的增殖和迁移,并能引起内皮细胞的凋亡。动物体内实验结果表明,rhEDI-8t蛋白样品可有效抑制裸鼠皮下肝癌肿瘤的生长,抑制效果和参照品endostatin相同。但在小鼠黑色素瘤肺转移模型中,rhEDI-8t显示了高于参照品的抑癌效果。     

乙型肝炎病毒的表面抗原126位Ilie→Ser变异株

乙型肝炎病毒的表面抗原１２６位Ｉｌｉｅ→Ｓｅｒ变异株房德兴,甘人宝,李载平（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）段恕诚（上海医科大学附属儿科医院,２０００３２）关键词乙型肝炎病毒,Ｓ基因,表面抗原,变异株乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）为嗜肝ＤＮＡ病毒...     

超活性胰高血糖素的分泌表达

通过多肽化学合成方法 ,人们对胰高血糖素的结构与功能关系有了比较深刻的了解 ,其中最引人注目的成就之一是发现 [Lys17,18,Glu2 1] 胰高血糖素具有比天然胰高血糖素更高的生物活性 ,称之为超活性胰高血糖素(superactiveglucagon ,下称SA glucagon)。为了通过基因工程途径获得SA glucagon ,用PCR方法从以前构建的胰高血糖素表达载体pAGluT得到SA glucagon的基因 (SAG) ,构建了含PL 启动子 ,phoA信号肽和SAG的分泌表达载体pBLSG7。pBLSG7转化到大肠杆菌BL2 1中 ,进行SAG的分泌表达 ,在摇瓶条件下 ,该菌种能分泌表达SA glucagon达 3.6 5mg/L(A60 0 =1) ,占上清液中蛋白质的 19.5 % ,并进一步研究了诱导温度和菌株对表达的影响。     

胰高血糖素在大肠杆菌中的分泌表达

报道了用基因工程方法构建含phoA(碱性磷酸酯酶)启动子、phoA信号肽与胰高血糖素基因的表达载体pAGluT.实验证明,转化了pAGluT的大肠杆菌(E.coli YK537)可高水平地分泌表达胰高血糖素,其表达量为80 mg/L.phoA表达系统分泌表达的胰高血糖素的物化性质与天然胰高血糖素相同,并具有相同的生物活性.这一结果不仅为基因工程生产胰高血糖素打下基础,亦为研制胰高血糖素的拮抗剂以及其他多肽的基因工程研究提供了新的思路.     

氨离子浓度对重组毕赤酵母的生长和血管生长抑制素表达的影响

本研究采用流加补料培养方式培养重组巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）,表达血管生长抑制素（Angiostatin）。整个培养过程分为甘油为碳源的生长阶段和以甲醇为碳源的诱导阶段。全过程用氨水调节pH时,诱导阶段菌体生长受到抑制,蛋白的最大表达量为9.08mg/L。进行不同氨离子浓度的摇瓶培养,证实在以甲醇为碳源时,氨离子浓度对菌体的生长有明显的影响。高密度培养中改用2mol/L的KOH溶液调节pH,诱导阶段菌体有缓慢的生长,蛋白最大表达量增为20mg/L。     

盐类对二苯胺法脱氧核糖核酸定量测定的干扰作用

(1)DNA二苯胺反应受碱、盐类和高浓度的某些強酸的干扰,干扰作用都随浓度之增大而加強,但不同物貭的浓度-干扰曲綫不同,对显色产物的吸收光譜影响也不同。(2)卤化物中氯化物如NaCl、KCl、NH_4Cl、MgCl_2、MnCl_2以及HCl在最終浓度为0.1N时即可使显色值(600mμ)下降15%左右。NaF在0.25N以下对显色并无干扰。NaBr在0.05N,NaI在0.002N即可使显色值下降50%左右。卤化物对显色产物吸收光譜的影响除600mμ高峯下降之外还有520mμ新吸收高峯的出現。(3)一般鈉盐如Na_2SO_4、NaAc、NaOH、NaH_2PO_4、Na_2HPO_4、Na_3PO_4、柠檬酸鈉、三氯乙酸鈉皆对显色有显著干扰。但磷酸、柠檬酸、三氯乙酸则皆无干扰作用。这些鈉盐对显色产物吸收光譜的影响除600mμ高峯的下降外,还有480mμ新高峯的出現。(4)其它金属盐类如NH_4Ac、Mg(Ac)_2、(NH_4)_2SO_4、MgSO_4、ZnSO_4、MnSO_4也有不同程度的干扰作用。銨盐、鎂盐的作用都稍強于相应的鈉盐,对吸收光譜的影响則与一般鈉盐相类似。(5)強酸如H_2SO_4和HClO_4在高浓度时也有干扰作用,而NaHSO_4、NaClO_4反无干扰作用,它們对吸收光譜的影响都是只有600mμ吸收高峯的下降,并无新的高峯出現。(6)除卤化物以外的一般盐类和碱的干扰作用,在浓度不超过1N的情况下,都可以用适当提高二苯胺試剂中硫酸含量的方法定量的予以消除。反应产物吸收光譜的形状也可完全恢复。用这种改进的試剂对DNA显色值的大小,对显色后的稳定性以及反应的特异性都影响不大,实际可用。上述高浓度強酸的干扰作用則可用先加碱中和的方法予以消除。(7)HClO_4可完全代替二苯胺試剂中的H2SO_4,DNA的显色值不变,HClO_4也同样有消除卤化物以外一般盐类以及碱对显色的干扰作用。(8)上述盐类、碱以及高浓度的强酸的干扰作用是应用二苯胺反应进行有关DNA定量中必須考虑的因素。     

两种新的抗癌分子

癌症是目前世界上最难征服的疾病之一。最近发现的血管生长抑素（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）和内皮生长抑素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）为人类征服癌症提供了希望。１９９４年,哈佛医学院的Ｆｏｌｋ－ｍａｎ实验室在Ｃｅｌ杂志上报道了一种新的能够抑制血管生长的因子——Ａ...