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植物联合固氮菌分子生态学的研究方法和应用 总被引:1,自引:0,他引:1
联合固氮菌定殖于植物根际或体内 ,它们与植物联合没有像根瘤菌和豆科植物共生形成根瘤那样形成特化的结构。由于二者的联合缺少明显的表型变化 ,以致研究这种植物和微生物间相互作用的工作进展缓慢。最近 ,免疫学技术、寡核苷酸探针杂交技术和监测标记 /报告基因等分子生物学技术在这一领域中得到了广泛的应用 ,不起才有了许多细致的联合固氮菌分子生态学研究。如研究与植物联合的固氮菌在何处表达固氮功能时 ,就应用了抗固氮酶铁蛋白抗体专一识别铁蛋白、寡核苷酸探针与nifH基因 (编码固氮酶铁蛋白 )的mRNA杂交或nifH启动子与… 相似文献
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绿色荧光蛋白的发光机制 总被引:1,自引:0,他引:1
从多管水母(Aequoreavictoria)中分离纯化的绿色荧光蛋白(GFP)是由238个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量约27kD,1992年其cDNA被克隆[1]。1994年重组野生型GFP(WtGFP)在异源细胞中表达[2]。野生型GFP被紫外光和蓝光激发后能发出绿色荧光,最大荧光吸收/激发峰在395nm,在475nm有一个肩峰,荧光发射峰为508nm。GFP的结构和光致荧光非常稳定,而且因GFP生色团的形成是自催化的,检测GFP的光致荧光不需要外加底物和辅因子,便于活体观察[2]。如今… 相似文献
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0.1MNaNO3 可使棕色固氮菌诱导出硝酸还原酶,其粗提物的比活性为21.9 NO2 毫微克分子/分钟·毫克蛋白。在诱导硝酸还原酶过程中,诱导的粗提物中固氮酶活性比未诱导的下降更迅速。实验结果表明这是由于在诱导过程中固氮酶铁蛋白失活,而与钼铁蛋白无关。应用相同的方法对缺乏Fe.Mo辅因子的棕色固氮菌突变种Uw45进行诱导,结果出现硝酸还原酶活性,证明硝酸还原酶和固氮酶钼铁蛋白不共享相同的含钼亚基。 相似文献
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nifH—gfp表达载体的构建及其在Enterobacter gergoviae 57—7中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
采用PCR技术,从GFPmut2中扩增得到三位点突变的报告基因gfpS65T、V68L、S72A片段,并将它和肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae(Schroeeter)Trevisan)M5a1的固氮酶结构基因nifH的启动子和其起始密码子相融合,获得nifH-gfp表达载体pMGFP2;再在pMGFP2上插入卡那霉素抗性基因,获得可在日勾维肠杆菌(Enterobacter 相似文献
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本文研究了在好气条件下,在以谷氨酸为氮源的液体培养基中,固氮螺菌(Azospirllumbrasilense)Yu62固氮酶形成的条件及溶氧压对固氮酶活性的影响。厌氧使整体细胞固氮酶迅速失活;而见氧后固氮酶又重新恢复活性。Western blotting实验证实,这种可逆失活的分子基础,是由于固氮酶铁蛋白-亚基被修饰和去修饰。呼吸抑制剂KCN对固氮酶活性的抑制,亦是由于固氮酶铁蛋白被修饰。因此推论细胞内的能量状态可能是启动固氮酶活化酶系统的重要信号。谷氨酰胺合成酶的抑制剂MSX不能去除厌氧和KCN引起的抑制作用。结果表明:固氮酶活性的NH+4和厌氧关闭可能通过不同的机制起作用。 相似文献
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固氮螺菌中固氮酶活性的厌氧关闭与细胞内ATP/ADP比值的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
李久蒂 《Acta Botanica Sinica》1992,34(4):245-250
本文研究了巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)“玉-62”在以谷氨酸为氮源的好气液体培养条件下固氮酶活性厌氧关闭的机制。ATP 合成的解偶联剂 CCCP 使固氮酶迅速失活,Western blotting 实验证明这种失活的分子基础是固氮酶铁蛋白—亚基被修饰。用萤光素-萤光素酶法测定表明厌氧处理使细胞内 ATP/ADP 比值迅速下降,固氮酶活性亦迅速被抑制,重新供氧后细胞内 ATP/ADP 比值很快恢复到原水平,固氮酶活性亦迅速上升。CCCP处理亦使细胞内 ATP/ADP 比值迅速下降。低电位电子受体 Metronidazole 制固氮活性,但固氮酶铁蛋白不被修饰,细胞内 ATP/ADP 比值略上升。实验证明,细胞内 ATP/ADP 比值的变化是启动固氮酶铁蛋白修饰系统的信号分子。 相似文献
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从新疆鄯善砍儿乡砂地生长的玉米根际分离到一株联合固氮菌K19-1,经鉴定为植生克雷伯氏菌。K19-1在40℃,于无氮培养基上生长良好,并具有乙炔还原及^15N2还原能力。nifHpromoter:lacZ融合子在K19-1中的表达在40℃不受阻抑。NH4^+不抑制K19-1的固氮酶活性,但阻抑nifHpromoter:lacZ融合子在K19-1中表达。K19-1在厌氧条件下具有固氮活性,在氧浓度增 相似文献
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