伤口愈合肽HPLC分析方法的研究

目的：研究高效液相色谱法（HPLC）分析伤口愈合肽的方法。方法：HPLC测定用Kromasil-C18色谱柱（250mm＊4.6mm,5滋m）,拟确定的色谱条件为：二元线性梯度洗脱,流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B：0.1%三氟乙酸50%乙腈,流速为1ml/min,检测波长为215nm。结果：线性梯度洗脱条件：起始流动相为A70%：B30%,洗脱最终流动相为A30%：B70%;伤口愈合肽浓度在0.1-0.3mg/ml内,其标准曲线的相关系数为R2=0.9998,回归方程为：y=237.19x-0.3249;日内、日间相对标准偏差都不大于2%;重复性的相对标准偏差都小于药典规定的2.0%。结论：该方法稳定性、重复性良好,符合伤口愈合肽新药研究的实验检测要求。     

RP-HPLC法检测CN_(10)蛋白的PEG化修饰率及含量

目的建立一种简单有效的测定CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,用于PEG化修饰工艺中的质量控制。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以TSKgel Octadecyl-4PW作为色谱分离柱,以含0.12%三氟乙酸(TFA)、5%乙腈的水溶液作为A相溶液,以含0.1%TFA的乙腈作为B相溶液,在50℃柱温条件采用分段线性洗脱的方式分离蛋白,并考察CN10蛋白以及PEG化修饰后CN10蛋白的量效关系,根据外标法检测CN10和CN10-PEG的蛋白含量,根据PEG化修饰前后CN10蛋白量效关系的变化推断CN10蛋白的PEG化修饰率。结果 PEG化修饰前后的CN10蛋白经TSKgel Octadecyl-4PW色谱柱层析均能达基线分离,当用214 nm波长检测时,CN10蛋白浓度以及PEG修饰后的CN10蛋白均与其对应峰面积呈现良好的线性关系(r2=0.999 58;r2=0.999 67)。结论建立了一种简单快速的检测CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,此方法具有较高的准确性及专属性,可用于CN10的PEG化修饰工艺的监测。     

反相高效液相色谱法检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度

目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相色谱系统,以含0.1%三氟乙酸水溶液-异丙醇(98∶2)为流动相A,以含0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,体积流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为65℃,进样体积为10μL,采用面积归一法检测CRM197蛋白纯度,并对方法的适用性、专属性、重复性、中间精密度、线性、灵敏度和耐用性指标进行考察。用建立的方法检测CRM197蛋白酸处理供试品溶液、碱处理供试品溶液及3批原液的纯度。结果 建立的方法系统适用性良好;专属性验证表明空白溶液在目标峰积分范围内无干扰峰,热处理CRM197蛋白目标峰与其他杂质峰分离度>1.5;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为...     

PEG化重组人白细胞介素-6制品游离PEG测定方法的研究

为了建立PEG化学修饰的重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)的部分质量控制方法,参照2005年版《中华人民共和国药典》三部附录III B高效液相色谱法,以RP-HPLC方法分离PEG-rhIL-6原液中的不同成分,用蒸发光散射监测器检测游离PEG,用外标法测定计算样品中残留PEG的含量。PEG修饰rhIL-6结构稳定;制品中的游离PEG含量符合要求。RP-HPLC法检测游离PEG结果可靠。     

脂肪酸酰化修饰胰岛素的纯化

目的：脂肪酸酰化修饰的胰岛素类似物是常见的获得长效胰岛素的手段,但因其反应位点的偏差易产生多种传统纯化工艺较难以分离的杂质。本文探索以聚苯乙烯类有机聚合物填料为固定相纯化脂肪酸酰化修饰的胰岛素方法。方法：经过填料对比,有机溶剂浓度和pH选择后,再经过一系列正交试验优化,HPLC方法检验纯度和含量,质谱分析定性终产品,从而确定最佳条件。结果：经过对不同厂家不同型号的聚苯乙烯类有机聚合物填料的比较,填料选定采用纳微UniPs30．300为最佳,其目的蛋白吸附量比为6．32mg／ml,洗脱率为95．27％。在一系列的梯度实验中证实采用30-50％异丙醇浓度最佳。之后的pH对比得出。pH在4．0以下才能分离得到纯度在95％以上的产品。在以上一系列的单因素实验基础上,最后经过正交实验优化证实最佳的洗脱方案为采用A相为合25mM硫酸铵的0．1M磷酸盐缓冲液,pH3．0;B相为异丙醇流动相,洗脱梯度为30-50％B的10CV洗脱,流速60cm/h。放大验证可以得到纯度大于97．5％,回收率70％以上的结果。结论：此方法具有分离效果好,成本低,易于放大的优点。     

高效液相色谱法测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸和三氟醋酸的含量

目的:测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸及三氟乙酸的残留量。方法:采用反相高效液相色谱法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Kromasil(250mm×4.6mm,10μm),200色谱柱;pH3.0磷酸盐缓冲液及甲醇为流动相,进行梯度洗脱;检测波长:210nm;柱温为25℃;流速:0.8ml/min;进样体积:40μl。结果:该方法中醋酸和三氟乙酸的分离度符合要求;醋酸的检测限0.1μg;三氟乙酸的检测限0.1μg;样品中未检出三氟醋酸。醋酸含量为5.7%。结论:该方法快速,准确,专属性强,精密度高,对多抗原肽MAP4原料药的质量控制有一定的意义。     

免疫八肽的纯化工艺研究

目的:研究免疫八肽的纯化工艺.方法:以水-乙腈为二元梯度洗脱流动相,以0.1%三氟乙酸(TFA)为离子对,用RP-HPLC(反相高效液相色谱)对合成产物进行分析,探索主峰出峰时间和杂肽分离度,优化程序后将程序放大并制备纯化,用RP-HPLC分析纯肤产物并与标准品对照其色谱保留值,结果一致,结果:此程序下收集的纯肽产物是目标八肽,并且收集的3段肽液纯度全部大于95%,产率高,纯度高.结论:建立了适于大规膜生产免疫八肽(AT-N)的纯化工艺.     

HPLC测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量

灵芝药品大多以灵芝子实体水提物为原料,为快速准确测定灵芝子实体水提物及相关产品中三萜的含量,建立了具有较好分离效果的HPLC分析测定方法.通过优化色谱柱和洗脱条件,优选出Agilent Zorbax SB-Aq C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-乙酸水溶液(0.01％)为流动相梯度洗脱,流速为...     

反相高效液相色谱法分离肝源性磷脂酰胆碱分子种

建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离肝源性磷脂酰胆碱(PC)分子种的有效方法。考察了流动相中有机溶剂的种类、配比及流速对分离肝源性PC的影响。研究发现,在以甲醇为主的流动相中加入正己烷和醋酸铵有利于肝源性PC分子种的分离;甲醇-乙腈-水梯度洗脱不适于分离肝源性PC分子种。结果表明,采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),以甲醇-正己烷-0.05 mol/L醋酸铵-甘油(84∶6∶8∶0.6,体积比)为流动相,在流速1.0 mL/min、检测波长206 nm、柱温35℃的条件下,实现了肝源性PC各组分的分离。所建立的方法灵敏,重复性高,为进一步采用液质联用技术研究肝源性PC不同分子种的结构奠定基础。     

高速逆流色谱法分离凤尾草中的芹菜素和木犀草素

建立了高速逆流色谱分离纯化芹菜素和木犀草素的方法。两相溶剂系统为氯仿-甲醇-水（4：3：2）,上相为固定相,下相为流动相进行洗脱。从100mg粗提物中一步分离得到17．0mg芹菜素和22．5mg木犀草素,经高效液相色谱分析,纯度分别为92％和96％。其化学结构由1H和13CNMR鉴定。     

反相高效液相色谱法测定不同产地紫苏子和白苏子中乌索酸和齐墩果酸

建立反相高效液相色谱（RP—HPLC）法测定了紫苏子和白苏子中乌索酸和齐墩果酸的含量。色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4．6mm,5um）,光电二极管阵列检测（PAD）,流动相甲醇一水体积比为87：13,检测波长210nm,流速0．8mL／min,柱温28℃。乌索酸在10～400ug／mL,齐墩果酸在5～200ug／mL内呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为100．6％和98．7％,相对标准偏差（RSD）分别为1．6％和1．2％。     

用高效液相色谱定量分析分支链氨基酸

目的：周2,4-二硝基氟苯（DNFB）对分支链氨基酸衍生后,采用优化的高效液相色谱（HPLC）对其进行定量分析。方法：色谱柱为AgilentZORBAXEclipsAAA（4．6mm×150mm,5-Micron）,流动相为乙酸盐缓冲液（pH6．4）-乙腈,流速1．0mL／min,检测波长360nm。结果：用HPLC法测定分支链氨基酸的浓度为20-200mg／L时线性关系良好,3种分支链氨基酸的R。均在0．9997以上,平均回收率高,RSD≤0．56％（n=6）。结论：此方法快速、准确、重现性好,适合于对发酵液中分支链氨基酸的定量分析。     

HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量

目的:建立前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的HPLC测定方法。方法:以C18(4.6 mm×15 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流速1 mL/min,测定波长270 nm。结果:线性范围在0.40～4.00μg(r=0.9999),平均回收率为99.79%,RSD=2.5%(n=6)。结论:本方法简便可行,重现性好,结果可靠,可以用来测定淫羊藿苷的含量,控制前列舒乐颗粒的质量。     

RP-HPLC法测定酸枣仁汤中芒果苷的含量

目的：建立测定酸枣仁汤中芒果苷含量的反高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱：WatersC18（250nm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速：1.0ml/min,检测波长：257nm。结果：芒果苷在0.316μg-1.264μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999）,平均加样回收率为97.64%,RSD为0.36%。结论：本方法简便、准确、可靠、重复性好,可作为酸枣仁汤中芒果苷的含量测定方法。     

神经刺激仪经肌间沟定位臂丛神经分支行臂丛麻醉效果分析

目的：比较神经刺激仪经肌间沟定位臂丛神经分支行肌间沟臂丛神经阻滞麻醉的效果及安全性。方法：选择拟行肌间沟臂丛神经阻滞的上肢手术的患者80例,ASAI或II级,随机均分为A组和B组,每组40例患者。两组均给予1％的利多卡因＋0．375％耐乐品20mL。记录完成操作所需时间、感觉神经阻滞起效时间、感觉神经阻滞完善时间、运动神经阻滞起效时间、运动神经阻滞完善时间;评价手术区域麻醉效果（优、良、差、失败）;观察并记录并发症。结果：A组完成操作所需时间（5．01±1．40）min,明显长于B组（2．83＋O．87）min（P〈0．01）。A组感觉阻滞起效时间（4．48±1．36）min,明显短于B组（7．0±2．06）min（P〈0．01）;A组运动阻滞起效时间（4．88＋±1．18）min,明显短于B组（7．0±1．67）min（P〈0．01）。A组感觉阻滞完善时间（11．73±3．62）短于B组（13．33±3．02）min（P=0．033）。A组运动阻滞完善时间（11．18±2．73）短于B组（12．41±2．48）min（P=0．038）;麻醉效果优等率A组为87．5％,B组为67．5％,差异有统计学意义x^2=4．588,P=0．032;优良率A组为97．5％,B组为90．0％,差异无统计学意义x2=1．920,P=0．166;A组、B组均未出现严重麻醉并发症。结论：A组行肌间沟臂丛神经阻滞比B组阻滞操作时间长,但神经阻滞麻醉效果好,神经阻滞完善率高。     

RP-HPLC法测定重组人生长激素注射液中间甲酚含量

目的：建立测定重组人生长激素注射液中间甲酚含量的方法。方法：采用RP-HPLC法,色谱柱为ShiseidoC4（250mmx4.6mm,5um）,流动相为0.05MTris-HCL（pH7.5）-正丙醇（71：29）,流速0.5ml/min,检测波长为317nm,柱温为40℃。结果：间甲酚在0.2mg-0.8mg/ml（r=0.9996,n=5）浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,最低检出线为0.1ng,平均回收率为100.5%（n=9）。结论：本方法准确,重现性好,可为重组人生长激素注射液质量评价提供较为可靠的分析方法。     

新型柱前衍生试剂分析草甘膦的高效液相色谱研究

以2,5-二甲氧基苯磺酰氯(DMOSC)为柱前衍生化试剂,建立了柱前衍生草甘膦的紫外检测反相高效液相色谱法,并优化了衍生化条件,得最佳条件:衍生温度35℃,时间15 min,pH 10.0,草甘膦与DMOSC的摩尔比为1∶6。HPLC分析条件:采用Kromasil C18柱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长220 nm,流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.02 mol/L、pH 5.5),三者的体积比为15∶5∶80。结果表明:草甘膦质量浓度在5~100μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.996 2,检测限为0.067μg/mL。实验表明该方法反应条件温和,灵敏度高,衍生产物稳定。     

RP-HPLC法测定酸枣仁汤中甘草苷的含量

目的：建立测定酸枣仁汤中甘草苷含量的反相高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱：WatersC18（250nm×4．6mm,5wm）;流动相：乙腈一0．1％磷酸水溶液,梯度洗脱;流速：1．0ml／min,检测波长：276nm。结果：芒果苷在0．093μg·0．744μg范围内与峰面积线性关系良好（r==0．9999）,平均加样回收率为98．04％,RSD为0．41％。结论：本方法简便、准确、可靠、重复性好,可作为酸枣仁汤中甘草苷的含量测定方法。     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂热贮稳定性研究

采用高效液相色谱法分析甲维盐微乳剂,以甲醇＋0．2％三乙胺溶液＋乙腈（V：V：V=30：30：40）为流动相,采用XterraRP184．6150mm色谱柱,检测波长245nm,测得54±2℃条件下14d分解率为3．42％。室内毒力测定热贮前后1％甲维盐微乳剂Lc50分别为0．499mg／L和0．524mg／L,热贮分解率为4．78％,与高效液相色谱测定结果基本一致。