双歧杆菌对草甘膦检测灵敏性的研究

本研究通过改进短双歧杆菌的培养条件,提高对草甘膦的检测灵敏性。首先,通过单因素试验研究作用时间、初始pH以及培养温度对短双歧杆菌检测灵敏性的影响。结果表明草甘膦作用时间、初始pH、培养温度分别为2 h、pH 8和51℃时短双歧杆菌对草甘膦的检测灵敏性最好。对作用时间、初始pH和培养温度设计三因素、三水平试验,通过响应面回归分析,得到最优培养条件:培养温度为51.04℃(根据实际试验条件,调整温度为51℃)、pH 7.92和作用时间为2.1 h,在此培养条件下,草甘膦对短双歧杆菌的有效抑制浓度从0.5μg/mL～1μg/mL降低到0.25μg/mL～0.5μg/mL。     

柱前衍生-RP-HPLC法测定青蒿中青蒿素的含量

采用柱前衍生-RP-HPLC法测定10个不同产地的青蒿药材中青蒿素的含量.采用Lichrospher 100 RP-18e(250 mm×4.6 mm,5μm,Merck KgaA,Germany)色谱柱,甲醇-0.01 mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH 5.8)(体积比62:38)为流动相;检测波长:260 nm;流速:0.5 mL/min;柱温:25℃.结果表明该法准确重现性好,可以为青蒿质量标准的制订提供科学依据.     

伊枯草菌素A发酵过程中游离氨基酸的HPLC分析

建立一种快速、高效测定游离氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法,并利用此方法分析检测iturin A发酵过程中游离氨基酸的动态变化。以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用Venusil-AA(4.6 mm×250 mm,5μm)氨基酸分析专用柱,并优化HPLC检测色谱条件。结果表明:梯度洗脱程序、流动相pH值、色谱柱温对分析时间、色谱峰分离及峰型具有重要影响。当最优色谱条件为:流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠缓冲溶液(pH6.4±0.1)-乙腈(66∶5),流动相B为乙腈-水(4∶1),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,色谱柱温40℃,梯度程序洗脱,35 min内可完全分离16种氨基酸,且各氨基酸在一定浓度范围内线性关系良好(R2均大于0.9986),加标回收率在83.84%-108.02%之间,RSD值均小于2.77%。该方法耗时短、操作简便、准确可靠,具有良好的精密度和稳定性。通过此方法研究分析伊枯草菌素A发酵过程中各游离氨基酸含量变化规律,发现其氨基酸浓度变化规律大致分为三类。     

柱前衍生化HPLC同时测定霍山石斛中13种游离氨基酸含量

为建立柱前衍生化HPLC同时测定霍山石斛中13种游离氨基酸的方法。采用Waters XBridge C_(18)色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm);流动相为0. 1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈∶水(4∶1),梯度洗脱;流速1. 0 mL/min,柱温35℃;检测波长254 nm。在该色谱条件下霍山石斛中13种游离氨基酸分离较好,平均加样回收率为92. 7%~104. 3%,RSD 2. 5%。该方法简便、准确、重现性好,适用于霍山石斛中13种游离氨基酸的同时测定。     

HPLC法测定宁夏枸杞中法荜枝苷的含量

本文采用高效液相色谱法,建立宁夏枸杞中法荜枝苷的含量测定方法。色谱条件:Diamonsil C8柱(150mm×4.6 mm,5μm);流动相为A:乙腈-水-醋酸(5∶94.5∶0.5),B:乙腈-水-醋酸(72∶27.5∶0.5),梯度洗脱。流速:1 mL/min;柱温:30℃;检测波长:346 nm。结果表明,在0.1～10μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.9998(n=8)。法荜枝苷的平均回收率为99.1%,RSD为1.55%。该方法准确可靠,可用于测定宁夏枸杞中法荜枝苷的含量,为宁夏枸杞开发利用提供理论依据。     

HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立

目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察.方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenex C18(250×4.60mm,51μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min,-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃.结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响.结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持.     

高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量

建立高效液相色谱法测定甜菊糖苷中甜菊醇的含量。色谱条件:色谱柱为Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);流速1.0 mL/min;检测波长213 nm;柱温30℃;进样量10μL。线性范围为1.046μg/mL~52.3μg/mL(r=0.9997),加标平均回收率为96.60%,RSD为0.51%(n=6)。本方法准确度高、精密度高、重复性好、简捷易操作,可以作为甜菊糖苷中甜菊醇含量的测定方法。     

黄花蒿中青蒿素含量的RP-HPLC法测定

建立黄花蒿中青蒿素的高效液相色谱测定方法,采用柱前衍生RP-HPLC法测定黄花蒿中青蒿素的含量,采用ZORBAXXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.01mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH5.8,体积比62∶38)为流动相;检测波长:260nm;流速:0.8mL/min;柱温:30℃。对广西、沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等不同产地的野生黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样品进行检测,结果表明不同地区青蒿素含量差异很大,同一地区不同采集时间黄花蒿样品的青蒿素含量也有差异。该法准确可靠、重现性好,能准确地反映青蒿素含量的检测。     

2种HPLC-柱后衍生化-荧光检测法测定远志中黄曲霉毒素的比较

对远志中测定黄曲霉毒素的2种柱后衍生化方法(碘衍生化和光化学衍生化)进行分析比较。样品经过免疫亲和柱净化，HPLC-柱后衍生化-荧光检测器检测；采用C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱，荧光检测。柱后衍生化系统：(1)碘衍生化法，以甲醇-乙腈-水(25∶20∶55)为流动相；衍生溶液为0.05%碘溶液，流速为0.3 m L·min^-1，衍生反应温度为70℃；(2)光化学衍生化法，以甲醇-乙腈-水(35∶15∶50)为流动相。碘衍生化方法中，黄曲霉毒素B₂、G₂在3.8～19 pg范围内线性关系良好，B₁在10.4～52 pg范围内线性关系良好，G₁在10.8～54 pg范围内线性关系良好；在光化学衍生化方法中，黄曲霉毒素B₂、G₂在1.9～45.6 pg范围内线性关系良好，B₁在5.2～124.8 pg范围内线性关系良好，G₁在5.4～129.6 pg范围...     

HPLC法测定九节菖蒲中琥珀酸含量

目的:建立九节菖蒲中琥珀酸含量的HPLC测定法.方法:采用Kromasil C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm);甲醇-0.02mol/L KH2PO4缓冲液(7∶93)(pH 2.5)为流动相;流速0.5 mL/min;柱温为30℃;检测波长为214nm.结果:琥珀酸在4～48μg范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为99.15％.九节菖蒲样品中的琥珀酸含量,以干燥品计为0.200％～0.318％.结论:该方法可行,重复性好,可用于九节菖蒲中琥珀酸含量的测定.     

PEG化重组尿酸氧化酶蛋白含量测定方法研究

目的:以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定2种聚乙二醇化重组尿酸氧化酶(PEG-rUOX)含量的方法。方法:以原型蛋白rUOX为对照品,利用凝胶色谱法测定PEG-rUOX中的蛋白含量,通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件:采用TSK Gel 5000PWxl(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以含0.15mol/L氯化钠的0.05 mol/L的Tris-HCl溶液(pH9.0)为流动相,流速0.5 mL/min,柱温为室温,检测波长280 nm。结果:在280 nm下,2种rUOX在200~1000μg/mL浓度范围内线性关系良好(r2分别为1和0.9999),其高、中、低平均回收率均较高,为98.33%~99.96%。结论:本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为PEG-rUOX的含量测定方法。     

L-抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学

对酶法合成L-抗坏血酸洛芬酯(芬维C酯)的反应动力学与热力学进行研究,确定了最有效的酶促反应环境。合成布洛芬维C酯的最优条件:转速200r/min,温度65℃,加酶量5%(以底物的质量分数计),底物浓度1mol/L,平衡所需时间66h,平衡时产物质量分数为19.07%;合成酮洛芬维C酯的最优条件:200r/min,60℃,加酶量7.5%,底物浓度600mmol/L,平衡时间132h,产物质量分数为10.63%;合成氟比洛芬维C酯的最优条件:200r/min,65℃,加酶量5%,底物浓度400mmol/L,平衡时间144h,产物质量分数为6.76%。对底物进行了比较,得到了各自的动力学与热力学参数。布洛芬米氏常数为0.101μmol/L,vmax=32.68μmol/(min.g),热力学平衡常数为0.166;酮洛芬的分别为0.144μmol/L,12.97μmol/(min.g),0.091;氟比洛芬的分别为0.185μmol/L,9.35μmol/(min.g),0.055。     

荧光定量PCR检测人巨细胞病毒的方法学建立

目的建立人巨细胞病毒（HCMV）的TaqMan MGB探针荧光定量PCR（FQ—PCR）检测方法。方法选取HCMV MIE exon4为PCR扩增靶序列,经TA克隆构建重组质粒作为定量标准品,经FQ—PCR反应条件的优化及方法学评价,再将其应用于临床检测。结果FQ—PCR最适循环参数为：95℃ 5 min;95℃ 20 s,60℃ 60 s（40 cycles）,20μl最适反应体系为：2．0mmol／L Mg^2＋、0．5μmol／L引物、1．5μmol／L探针、200μmol／L dNTP、2110×buffer、1．0 U Taq酶、2．0μl DNA模板。检测批内CV（变异系数）值为1．32％,批间CV值为1．96％;特异性较好;线性范围为10^2-10^8copies／μl。结论成功地建立了检测HCMV的FQ—PCR法,完全适用于临床检测。     

高效液相法测定盐酸乐卡地平片含量

使用高效液相色谱法测定乐卡地平片含量,流动相为乙腈-0.O1 mol/L乙酸铵溶液—三乙胺(650:350:1)(pH 6.0).结果显示盐酸乐卡地平在浓度为2.05～404.0μg/mL范围内具有良好的线性关系,盐酸乐卡地平片剂的平均标示量含量为100.3％,符合要求.研究表明HPLC色谱法对乐卡地平片剂进行含量测定...     

Determination of metformin hydrochloride using precolumn derivatization with acetaldehyde and capillary electrophoresis coupled with electrochemiluminescence

A novel method was developed using capillary electrophoresis (CE) coupled with tris(2,2′‐bipyridyl)ruthenium(II) electrogenerated chemiluminescence (ECL) for highly sensitive detection of metformin hydrochloride (MH) derivatizatized with acetaldehyde. The precolumn derivatization of MH with acetaldehyde was performed in phosphate buffer solution (0.3 mol/L, pH 7.5) at room temperature for 120 min. The effects of acetaldehyde concentration, buffer pH, electrokinetic voltage and injection time were investigated. Under optimized detection conditions, the MH ECL detection sensitivity was more than 120 times that without derivatization. The linear concentration range for MH was 0.001–15.00 μg/mL (with a correlation coefficient of 0.9992). The detection limit was 0.31 ng/mL with a signal:noise ratio of 3. The recoveries of MH in human urine were in the range 98.50–99.72%. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

用高效液相色谱定量分析分支链氨基酸

目的：周2,4-二硝基氟苯（DNFB）对分支链氨基酸衍生后,采用优化的高效液相色谱（HPLC）对其进行定量分析。方法：色谱柱为AgilentZORBAXEclipsAAA（4．6mm×150mm,5-Micron）,流动相为乙酸盐缓冲液（pH6．4）-乙腈,流速1．0mL／min,检测波长360nm。结果：用HPLC法测定分支链氨基酸的浓度为20-200mg／L时线性关系良好,3种分支链氨基酸的R。均在0．9997以上,平均回收率高,RSD≤0．56％（n=6）。结论：此方法快速、准确、重现性好,适合于对发酵液中分支链氨基酸的定量分析。     

白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡

目的：探讨白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及galectin-3在其中的作用。方法：以体外培养的人宫颈癌SiHa细胞为研究对象,实验分为对照组、白藜芦醇处理组及[白藜芦醇＋galectin-3（5、10、20μg/mL）]共5组,分别给予生理盐水、300μmol/L白藜芦醇及[300μmol/L白藜芦醇＋Galectin-3（5、10、20μg/mL）]处理。48小时后,分别收集各组细胞,采用MTT法检测细胞的增殖情况,Caspase-3活性试剂盒测定细胞的凋亡情况,Western Blot技术测定细胞内galectin-3的蛋白表达水平。结果：300μmol/L的白藜芦醇明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著增加其凋亡水平,同时减少了细胞内galectin-3的蛋白表达。在白藜芦醇处理的同时,给予5、10及20μg/mL的Galectin-3,随着Galectin-3蛋白浓度的增加,SiHa细胞的增殖抑制率逐渐降低,凋亡水平也逐渐下降,但是VEGF-R3受体的磷酸化水平却逐渐升高。结论：白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡。     

HPLC法测定葛花中鸢尾苷的含量

目的：测定8个产地葛花中鸢尾苷的含量,建立葛花中鸢尾苷含量测定的HPLC方法。方法：采用GRACEC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为0.8mL/min,紫外检测波长为265nm;柱温为室温。结果：鸢尾苷的峰面积（Y）与浓度（X）在11.8～236.4μg/mL范围内具有良好线性关系,Y=34920X-1156.5,r=0.9995（n=7）;平均加样回收率为103.66%,RSD〈2%（n=9）;测得8批不同产地的葛花药材中鸢尾苷含量在37.00～113.1mg/g。结论：建立了高效液相色谱法测定葛花中鸢尾苷含量的方法,该法准确、可靠,可用于葛花中主要成分鸢尾苷的含量测定;不同产地葛花中均检测到鸢尾苷,但其含量有一定区别。     

壳聚糖载体的改性及其用于固定化漆酶的研究

利用有机酸改性壳聚糖,并用交联法制备酸化的壳聚糖载体,然后用改性壳聚糖载体固定漆酶。甲酸、乙酸改性壳聚糖的最适条件:壳聚糖与甲酸、乙酸的质量摩尔比(g/mol)分别为100∶1、100∶1.5,戊二醛的质量分数为1%,缓冲溶液的pH分别是4.4、5.0,反应时间为3h;壳聚糖与酒石酸、草酸的质量摩尔比(g/mol)分别为100∶0.5、100∶2,戊二醛的质量分数为2%,缓冲溶液的pH分别是3.6、4.2,反应时间为4.5h。不同有机酸改性的壳聚糖用于漆酶的固定,其酶活都有不同程度的提高,尤其用酒石酸改性的壳聚糖载体效果最好,其酶活提高了57%。