大鼠附睾蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

背景与目的：提取犬鼠附睾液蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离附睾蛋白组的方法。方法：分离提取犬鼠附睾液蛋白。样品利用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8．5—4．0之间的组份进行二维反相离压液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成PI／UV图谱。结果：成功提取了附睾液蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了大鼠头体尾部附睾液蛋白的二维PI／UV图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8．5—4．0区间的20个组份,并将每个组份进行二维色谱分离后转换为PI/UV图谱。结论：为进一步全面研究附睾蛋白功能和体液差异蛋白质组研究打下了基础。     

安捷伦科技公司推出针对生物治疗药物开发的创新型色谱柱

<正>安捷伦科技公司近期推出一款用于分离单克隆抗体的AdvanceB io RP-mA b反相色谱柱,可适用于生物研究和药物开发工作。AdvanceB io RP-mA b色谱柱采用安捷伦Poroshell技术,使完整mA b的分析实现快速与高分离度。该款色谱柱使用表面多孔性微粒填充,粒径为3.5μm,孔径大小为450,可耐压至600 bar。安捷伦还提供了3种     

肠道病毒71型感染前后宿主细胞蛋白质组的二维液相色谱分离和比较

以肠道病毒71型及其宿主细胞为研究主体,建立了一种二维液相色谱分离和分析比较病毒感染前后细胞蛋白表达谱的方法。该方法以高效液相色谱(HPLC)为技术平台,对细胞裂解物先后进行一维色谱聚焦分离和二维反相色谱分离。利用ProteoVue软件将二维色谱数据转换成模拟胶图,再利用DeltaVue软件对感染前后的宿主蛋白表达谱进行比较和分析,找出差异蛋白。二维液相色谱分离法能够根据蛋白的等电点和疏水性建立精确的细胞蛋白表达图谱,每0．2个pH为一个收集区段,在pH8．5～3．9的范围内可见蛋白条带约1200条。该方法良好的重现性、自动化以及结果分析的简易化,使之在细胞表达谱差异显示中的应用潜力巨大,并且为研究病毒与宿主相互作用提供了新的方法和思路。     

阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体的电荷异质性

目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWCX-10"弱阳离子交换柱,利用盐梯度洗脱的方法依次洗脱出m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体及碱性电荷变异体;对方法的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性进行验证。结果阳离子交换高效液相色谱分析重组人源化抗CD52 m Ab各电荷变异体的保留时间在14~21 min之间,其中酸性电荷变异体的保留时间在14~17 min,中性电荷变异体的保留时间在17~18 min,碱性电荷变异体的保留时间在18~21 min之间。专属性验证显示空白辅料对照色谱图在样品出峰位置无干扰。线性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体相关系数R2均0.99。准确性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体回收率分别为99.3%~99.9%、99.8%~100.4%和99.3%~99.7%。仪器重复性、样品重复性和中间精密度验证中,各电荷变异体的RSD均5%。耐用性验证中,流动相p H在8.0±0.1、流动相中盐浓度为100 mmol/L±5 mmol/L、柱温在(30±2)℃变化时各电荷变异体的RSD均5%。结论阳离子交换高效液相色谱可以有效分离重组人源化抗CD52 m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体,且该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性。     

生物色谱分离技术在生物技术产业化中的作用

色谱分离技术是生物产品的分离纯化的核心技术。目前,95％以上的生物制品、75％以上的天然产物和80％以上的海洋药物是通过色谱分离技术完成的．该技术决定着生物制品和中药现代化产品的生产成本。因此．色谱分离技术就成了生物技术产业化和中药现代中的关键和核心技术．多年的实践也证明这是我国通过开放市场换不来的技术。     

柱串联法在凝胶过渡色谱中的应用一例

凝胶过滤色谱因其操作方法简单、重复性强等特点在大分子的分离化中被广泛使用,特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。将Superdex75凝胶柱与SephacrylS-100凝胶柱串联在一起进行凝胶过滤,分离一种用普通凝胶过滤色谱难以分离的样品,成功地将分辨率（Rs）由0．71提高到1．70,得到了基线分离。     

藏绵羊β-乳球蛋白的基因克隆及多态性检测

目的：对藏绵羊β-乳球蛋白（β-Lg）基因序列进行克隆和多态性分析,为藏绵羊资源的利用提供依据。方法：提取基因组DNA,采用PCR方法克隆β-Lg部分基因序列;分别利用PCR-RFLP和高效液相色谱法检测β-Lg基因和蛋白多态性。结果：藏绵羊β-Lg与普通绵羊类似,存在A、B两种遗传变异体,A变异体的基因频率为0.818（n=22）;HPLC能很好地分离β-Lg的A、B两种遗传变异体,A的表型频率分别为0.700;β-Lg为杂合型的藏绵羊中,大多数个体乳中的A变异体表达量低于B变异体。结论：藏绵羊β-Lg基因与普通绵羊存在一些差异,有两种变异体,并且其在乳中的相对表达量不同。     

SDS-蛋白复合物的性质及其液相色谱分离研究

利用一些常用的蛋白质液相色谱的分离方法,首次系统地研完了SDS-蛋白复合物的性质及其液相色谱分离规律,并对有关的原理进行了探讨。该项研究为膜蛋白及基因工程产生的包涵体蛋白的研究提供了重要的参数。     

槲寄生蛋白抗癌活性研究及新成分鉴定

目的评价槲寄生蛋白的抗癌活性,鉴定其中的新成分。方法以H22肝癌移植瘤为模型,评价槲寄生蛋白对肿瘤生长的抑制作用。采用CMSepharoseF．F．弱阳离子交换色谱,分离出一种低含量的槲寄生蛋白。基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其分子量。蛋白电泳后转印PVDF膜,采用Edman降解,测定该成分A,B两链的N端序列。结果槲寄生蛋白对H22的抑制率达80．2％,其中的CMO为未见报道的新成分。结论槲寄生总蛋白主要含有3种成分,且具有显著的抗癌活性。     

视黄醇结合蛋白的分离纯化

在变性条件下,应用Sephacryl-100凝胶过滤和Source-30Q阴离子交换两步分离,实现了分离纯化性质不稳定、易于降解的视黄醇结合蛋白(RBP)之目的。最后经过分步缓慢复性,获得具有生物活性的RBP,为其单克隆抗体制备及最终应用于临床营养评价和相关疾病的诊断创造了条件。     

沃特世推出适用于蛋白类生物治疗药物分析的体积排阻色谱(SEC)柱

<正>沃特世公司近日推出了全新的体积排阻色谱(SEC)柱,可用于蛋白的分析表征。XBridge Protein BEH SEC色谱柱可与Waters Alliance HPLC、Waters ACQUITY UPLC H-Class系统以及其它HPLC/UHPLC仪器联用,能够为按照尺寸大小进行的蛋白类生物治疗药物分离提供最大的样品通量和最高的分离度。XBridge Protein     

甲型肝炎病毒结构蛋白的分离纯化及鉴定

利用高效持续带毒增殖的细胞株传代增殖获取甲型肝炎病毒（ Ｈ Ａ Ｖ） 。采用不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心分离高度纯化的 Ｈ Ａ Ｖ 颗粒。温和病毒裂解液裂解病毒后,运用高效液相色谱分离出三种蛋白, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 证实所分离蛋白为 Ｈ Ａ Ｖ 三种主要结构蛋白 Ｖ Ｐ１ 、 Ｖ Ｐ２ 和 Ｖ Ｐ３ ,蛋白含量较高     

SIgA分泌片分离、纯化研究

为研究SIgA分泌片（Secretory component,SC)分离,纯化及鉴定方法,以SC存在游离和结合两种形式,本研究应用凝胶过滤和盐析法直接从初乳中分离纯化游离SC,并进行鉴定。分离纯化获得蛋白溶液12.4ml,蛋白含量0.85mg/ml,免疫双扩仅与抗SC多克隆抗体（PcAb)反应,分子量约75kD,免疫印迹实验与抗SC单克隆抗体（McAb)和PcAb特异反应,表明纯化蛋白为SC。该SC的分离纯化和鉴定处于不断完善之中,其方法的改进有利于获得更纯的SC,值得粘膜免疫研究者借鉴。     

重组风疹病毒抗原的分离纯化

为了制备临床诊断用的风疹病毒抗原,建立了亲合色谱分离纯化的方法.风疹抗原以可溶性形式在大肠杆菌工程菌中获得高效表达,用GST亲合色谱在不变性的条件下直接从细菌裂解液中分离纯化.纯化的目的蛋白电泳为单一条带,EUISA试验表明,重组抗原与风疹病毒IgM阳性血清能特异反应,而与IgM阴性血清不反应,表明重组蛋白具有良好的抗原性,能满足临床检验要求.     

纳豆中抗氧化肽的分离纯化与活性研究

从发酵的纳豆中提取具有抗氧化活性的多肽,通过分子筛层析和反相高效液相色谱对纳豆上清液进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定.结果表明:纳豆发酵后的蛋白(多肽)混合物经Sephadex G-50凝胶色谱进行分离纯化后得到3个组分(F1、F2和F3),其中组分F3的抗氧化活性最强,总还原力达到(8.4±0.6)mm...     

牛免疫缺陷病毒（BIV）92044毒株的分离及鉴定

从一头标号为９２０４４４的进口奶牛分离外周血淋巴细胞,将此淋巴细胞与正常胎牛肺细胞进行共培养。一个月后共培养物出现合胸体。此外电镜观察可见病毒的出芽过程。免疫染色显示,此培养物可与牛免疫缺陷病毒外膜蛋白的单克隆抗体特异性结合。     

乳抗氧化肽的分离纯化与结构鉴定

本文检测了不同分子量范围的WPI(乳清分离蛋白)酶解物的抗氧化活性,结果表明各个组分显示出不同的抗氧化活性,其中分子量小于5 kDa的组分最强。采用凝胶过滤色谱对分子量小于5 kDa的WPI酶解物进行分离,抗氧化活性强的组分继续采用RP-HPLC进行纯化。通过MALDI-TOF-MS与氨基酸组成分析鉴定该活性肽为His-Ile-Arg。     

家兔肝脏LRP蛋白的分离纯化与鉴定

利用家兔LRP蛋白聚集形成蛋白复合物的性质,首先通过两次蔗糖密度梯度离心从家兔肝脏中分离得到LRP粗提液,再利用分子大小差异,使用Sephacryl-1000分子筛层析纯化,SDS-PAGE银染结果显示最终得到了单一电泳条带的家兔LRP蛋白.最后使用LRP单克隆抗体的Western blotting鉴定结果正确.     

褐变蚕蛹分离蛋白脱色与改性研究

研究了褐变蚕蛹分离蛋白脱色方法及其酸酐、硫酸锆改性。用酸性乙酸酐法处理蚕蛹分离蛋白质 ,可获得白色脱色物 ,其最佳条件是 ,蚕蛹分离蛋白∶乙酸酐∶H2 O2 =1∶1.2 5∶1.5、温度≥ 80℃、时间≥ 30min。过氧乙酸的作用可能是使参与褐变的赖氨酸ε 氨基重新游离并断开胱氨酸之间的二硫键。乙酸酐或顺丁烯二酸酐修饰赖氨酸ε 氨基的最适条件是 :脱色蛋白∶乙酸酐 (或顺丁烯二酸酐 ) =1∶0 .3(或 0 4 )、pH 9.0～ 9.5、温度≤ 4 5℃、时间 6 0min。硫酸锆修饰氨基和羧基的最适条件是 :脱色蛋白∶硫酸锆 =1∶0 .0 4、pH≤ 3.0、温度≥ 80℃、时间 10min。脱色蛋白经过乙酸酐或顺丁烯二酸酐、硫酸锆修饰 ,其白色可稳定 ,在pH 2～ 12及 80℃条件下均不变色。在碱性条件下 ,H2 O2 可部分氧化蚕蛹分离蛋白褐色 ,获得乳黄色脱色物 ,其最适条件是 ,蚕蛹蛋白∶H2 O2 =1∶1.5、pH 9.0～ 9.5、温度≥ 80℃、时间≥30min。蚕蛹蛋白褐变的原因可能主要是其赖氨酸ε 氨基与氨基葡萄糖在碱性加热条件下发生Marl laid反应所致。此外 ,蛋白质中游离α 氨基、谷氨酸γ 羧基及天门冬氨酸β 羧基可能也参与了褐变反应     

天麻多肽的分离纯化研究

目的：研究生物多肽对生物机体的生命活动有益或生理作用。方法：对天麻（Gastrodiae elata B1．）初提液两次超滤（3kDa和1kDa超滤膜）,凝胶过滤和快速蛋白液相色谱（FPLC）分离纯化,以及反相高效液相色谱（RP-HPLC）对目标肽进行分析检测。结果：由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析肽液,得到各肽组分的相对分子质量分布范围。FPLC和RP-HPLC分析第二峰结果表明,此多肽组分分别只由一种肽组成。结论：此多肽相对分子质量在2500Da左右,具有很好的亲水性。