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尽管大多数动物实验的结果表明通过饮水或饲料补充精氨酸对一些肿瘤的形成、生长及转移均有显著的抑制作用,但也有少数几篇相反结果的报道。我们采用小鼠腹腔注射的方法,观察了不同剂量(0.1、0.05、0.025克/每天)精氨酸对S180瘤生长的影响,结果发现精氨酸对S180瘤的生长具有显著的促进作用,尤其是0.05克/每天剂量组,文中就其可能机制进行了讨论。 相似文献
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为了获得具有高催化活性且抗反馈抑制的大肠杆菌分支酸变位酶 预苯酸脱水酶 (chorismatemutase prephenatedehydrataseCM PDT) [EC5 .4 .99.5 EC4 .2 .1.5 1],通过相关菌种CM PDT氨基酸序列同源比较 ,寻找高度保守位点 .用定点突变及PCR法构建突变酶M1(缺失 30 4T、30 5G、Q30 6K)、M2 (缺失W 338)、M3(缺失 30 1~ 386位氨基酸 )、M32 9(E32 9A)和M374 (C374A) ,野生型及各突变型基因与pET2 8a(+ )载体连接后 ,表达融合蛋白 .在非变性条件下 ,由TALON金属螯合亲和层析柱纯化野生型和突变体的酶蛋白 .酶活性测定表明 ,突变体M3的PDT活性下降为野生型活性的 2 9% ,但保持了CM活性 .突变体M374保持了CM ,PDT两种酶的活性 ,突变体M1、M2、M32 9的CM ,PDT活性有一定程度的提高 .酶抗反馈抑制作用检测表明 ,突变体M3、M374解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 ,M1、M2、M32 9部分解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 .与含野生型pheA基因的E .coliBL2 1菌株相比 ,含突变基因的E .coliBL2 1菌株对 10mmol L的苯丙氨酸代谢类似物具有强的抗反馈抑制作用 ,其中M1,M2 ,M3对 2 0mmol L的类似物具有抗反馈抑制作用 相似文献
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构巢曲霉奎尼酸脱氢酶基因qutB在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:3,自引:1,他引:2
从莽草酸途径合成奎尼酸(QA),奎尼酸脱氢酶(QDHase)是必须的,大肠杆菌基因组不含有该酶的编码基因,在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)中存在qutB基因编码此酶。以构巢曲染色体DNA为模板,采用PCR扩增得到qutB基因,在大肠杆菌中进行了克隆表达。结果表明,该基因在λ噬菌体的PRPL串联启动子驱动下实现了QDHase的表达。SDS-PAGE显示,重组菌热诱导后出大小约36000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的19.81%。经酶活性测定,表达产物具有生物学活性,与对照菌株相比,其酶活性提高了27.8倍,为进一步奎尼酸生物合成研究了奠定了基础。 相似文献
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色氨酸的生理生化作用及其应用 总被引:23,自引:2,他引:21
主要介绍了色氨酸在人体内的生理作用、代谢途径及其在医学和工业领域的应用。 相似文献
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随着抗癌药物制剂、氨基酸输液制剂及甜味二肽生产的飞速发展,对原料氨基酸的需求量日益增长。传统的发酵工业越来越不能满足需求,势必被以基因工程为基础的新兴发酵工业所代替。通过建立大肠杆菌及棒状杆菌的高效载体受体系统,运用DNA重组、定向突变等手段,对代谢途径及关键酶进行了深入系统的研究,为代谢工程注入了新的活力,为获得高产、优质且易于自动化生产的菌株打下了基础 相似文献
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奎尼酸是一种具有极高价值的精细化工产品和医药中间体,在医药、食品、化工等行业均有广泛的应用价值。奎尼酸广泛存在于多种植物中,其咖啡酰类衍生物在抗病毒、治疗心血管疾病等研究中得到越来越多的关注和应用。目前获得奎尼酸的方法主要有4种,即植物提取法、化学合成法、酶工程法和微生物发酵法。随着分子生物学的不断发展,结合现代生物技术,应用基因工程方法,必将成为获得奎尼酸的重要途径。本文综述奎尼酸的分布、生物合成及其应用。 相似文献
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大肠杆菌trpBA基因编码的色氨酸合成酶(tryptophan synthetase, TSase)是色氨酸合成的关键酶; serA基因编码的磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate-dehydrogenase, PGDH)为L-丝氨酸合成(色氨酸合成的底物)的关键酶。为了通过基因工程手段来增加色氨酸的产量, 在利用高效的原核表达载体pET22b(+)分别对trpBA和serA基因克隆表达的基础上, 采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的serA和trpBA基因, 将两基因串联于pET22b(+)载体上, 共构建了4种方式的串联质粒, 实现了2种蛋白酶在大肠杆菌中的共表达。聚丙烯酰胺电泳分析显示, ABA-Ⅰ重组菌株在37 kD (PGDH)、29 kD(色氨酸合成酶的α亚基)、44 kD(β亚基)处均有明显的蛋白表达带。4种串联表达质粒重组菌的TSase酶活性, 分别比含空载体菌相应酶的活性提高2~4倍, PGDH酶活性分别提高约2.1~3.6倍。经摇瓶发酵实验表明酶活性较高的ABA-I菌株色氨酸合成量亦最高, 约为对照菌株的20.2倍。 相似文献
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人视黄醇结合蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其活性测定 总被引:4,自引:0,他引:4
视黄醇结合蛋白 (retinol- binding protein,RBP)是体内结合、转运维生素 A的重要载体蛋白 ,对生长、繁殖、视觉及维持上皮细胞分化状态至关重要 ,不但是临床营养支持蛋白质营养评价的最灵敏指标 ,而且可作为慢性肾病、严重肝病、甲亢等相关疾病的辅助诊断指标 .同时 ,RBP可作为疏水小分子结合蛋白家族构效关系研究的模型 ,具有重要的理论与应用研究价值 .我们已克隆出了它的 c D-NA[1 ] ,本文报道了人 RBP在大肠杆菌中的高效表达及其产物的初步纯化和活性测定 .1 材料与方法1 .1 材料含目的片段的克隆质粒 p GEM- RBP为本室构建 … 相似文献