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1.
用自制的氨基PEG化试剂rIL-2进行化学修饰,研究了试剂浓度,溶液pH,反应时间等与PEca-rIL-2产率及IL-2活性保持之间的关系,建立了一套获得稳定修饰度的PEG-rIL-2的方法。研究发现,反应时间跟修饰度关系不大;溶液pH对修饰度有一定的影响,中性pH以上反应都可进行;而试剂浓度直接决定修饰度的高低,过量越多,修饰度越高,而生物活性保留也越低;但低度修饰,对活性几乎没有影响,可保留活性在95%左右。 相似文献
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采用HPIEC应用CM交换柱分离纯化E.coli工程菌表达的rIL-2,与空气氧化复性相比较,又有1倍以上的变性rIL-2在色谱过程中得到复性,且溶液pH影响rIL-2的复性和纯化效果:pH7.0时rIL-2复性率高于pH8.0时,但纯度明显低于pH8.0时分离的rIL-2. 相似文献
3.
重组人白细胞介素—2在离子色谱分离时的复性 总被引:1,自引:0,他引:1
采用HPIEC应用CM交换柱分离纯化E.coli工程菌表达的rIL-2,与空气氧化复性相比较,又有1倍以上的变性rIL-2在色谱过程中得到复性,且溶液pH影响rIL-2的复性和纯化效果:pH7.0时rIL-2复性率高于pH8.0时,但纯度明显低于pH8.0时分离的rIL-2。 相似文献
4.
分别用氰脲酰氯法及N-羟基丁二酰亚胺活性酯法合成了蛋白质的氨基PEG化试剂mPEGcc和mPEG-GS,并研究了它们对蛋白质的修饰作用。在合成过程中,通过分析反应体系中微量水分的存在对mPEGcc合成效率的影响,及溶剂中小分子可活化杂质成分对mPEG-GS合成产物质量的影响,发现去水剂的存在,可使mPEGce产率提高7倍;二氧六环优于DMF,且二氧六环的预处理也很重要。同时,为了测定活化PEG修饰蛋白质的效能,首次以BSA为模型蛋白,建立起一种测定活化PEG修饰能力的方法,应用此方法能直观而又准确地比较各种方法活化的PEG对蛋白质的修饰能力,具有普遍的意义。 相似文献
5.
氨基PEG化试剂的合成及其修饰能力的测定 总被引:5,自引:0,他引:5
分别用氰脲酰氯法及N-羟基丁二酰亚胺活性酯法合成了蛋白质的氨基PEG化试剂mPEGcc和mPEG-GS,并研究了它们对蛋白质的修饰作用。在合成过程中,通过分析反应体系中微量水分的存在对mPEGcc合成效率的影响,及溶剂中小分子可活化杂质成分对mPEG-GS合成产物质量的影响,发现去水剂的存在,可使mPEGcc产率提高7倍;二氧六环优于DMF,且二氧六环的预处理也很重要。同时,为了测定活化PEG修饰 相似文献
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活性氧与蛋白多糖的作用及损伤的蛋白多糖对矿化过… 总被引:3,自引:0,他引:3
本文用凝胶色谱和琼脂糖-聚丙烯酰胺混俣凝胶电泳法比较地研究了活性氧和病区黄腐酸对氨基多糖和蛋白多糖作用,并用恒pH值法研究了完整和受损的PG对矿化的影响。结果表明:1,黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系对GAG无明显降解作用,只损伤PG的核心蛋白。2,Fe(Ⅱ)-EDTA-H2O2体系同进损伤PG和GAG,并与H2O2浓度和作用时间正相关。3,FA不能直接降解GAG和PG。4,PG能推延磷酸钙成核的诱导期, 相似文献
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紫云英细胞转化条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了紫云英(AstragalussinicusL.)细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)经含乙酰丁香酮的低pH/PO3-4 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞GUS瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌vir基因,促进了T-DNA 向植物细胞转移。在PEG介导的DNA 转移中,较高的pH 和Ca2+ 浓度能够提高细胞GUS活性。质粒DNA 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体-农杆菌共培养法,获得GUS和NPT Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株 相似文献
9.
菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质 总被引:3,自引:0,他引:3
利用硫酸铵分级沉淀,Sephedex G-50凝胶柱层析,FPLC Mono-Q和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了EPSP合成酶。该酶被纯化2961.6倍,比活性达到6219.4nmolmg^-1蛋白min^-1。该酶分子量经SDS-PAGE检测为51kD,等电点为pH5.7,酶促反应最适pH7.5,最适温度45℃。6.2μmol/L的除草剂草甘膦能抑制EPSP合成酶活性的50%。 相似文献
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表达的白细胞介素-2-绿脓杆菌外毒素(IL-2-PE)融合蛋白以包含体形式存在于宿主菌中,为分离纯化表达产物提供了方便,但因需进行复性,也增加了后处理的难度.我们采用4mol/L尿素、0.5%TritonX-100的1×PBS洗涤包含体两遍,再经SephacrylS-300分子筛及DEAE-SepharoseFF阴离子交换柱层析后,获得的融合蛋白纯度可达90%~95%。此外,我们从GSSG浓度、L-精氨酸浓度、复性蛋白质的起始浓度、复性液的pH值、复性温度及复性时间等参数入手,系统地研究了融合蛋白的复性条件,探索到了IL-2-ME40和IL-2-PE664Glu融合蛋白复性的最适条件。 相似文献
11.
PEG化蛋白质的分离纯化比较困难,本工作发现PEG化蛋白质仍能被硫酸铵盐析,据此可以简单地将IL-2及PEG化IL-2沉淀出来,而将有毒的活化PEG等副产物留在溶液中。此方法效果理想而又十分简便。文献中未见报道。此外,实验还发现,在PEG-IL-2与IL-2的混和液中加入一定量的PEG后,二者之间溶解度差别增大,当用SephacryⅠS-200柱分离时,先用含10%PEG,0.25mol/LNaCl的缓冲液平衡洗脱PEG-IL-2,再降低盐浓度洗下IL-2,即可使二者完全分开。过去要将IL-2与PEG-IL-2分离开非常困难,本工作解决了这个问题,这点亦未见文献报道。 相似文献
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蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解 总被引:3,自引:0,他引:3
赤子爱胜蚓(Eiseniafetida)体内的一种纤溶酶原激活剂(e-PA)能够降解人工合成底物N-乙酰-L-酪氨酸乙酯(ATEE),该降解反应的最适pH为8.5,而且在0.2mol/LNa2HPO4中的活性要强于在0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)中.分别测定了e-PA的大小亚基及全酶在0.2mol/LNa2HPO4与0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)两种体系中的Km和Kcat.结果表明,在0.2mol/LNa2HPO4中,全酶的ATEE活性远远高于大小亚基单独的ATEE活性,而在0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)中则没有这种现象.从蛋白质结构的角度对这一结果作了解释.用不同抑制剂和e-PA作用,结果表明,pepstatin,E-64和EDTA对e-PA的ATEE活性都有不同程度的抑制,这一点与e-PA的BAEE活性不同. 相似文献
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辣根过氧化物酶在一种新型有机介质中的催化反应 总被引:4,自引:0,他引:4
选择合适的酶反应介质体系,是酶应用于有机合成的一个重要环节。利用适宜分子量的聚乙二醇(PEG)可以将辣根过氧化物酶(HRP)分散在甲苯中,摸索了HRP在聚乙二醇(PEG)-甲苯互溶体系反应的适宜条件,即PEG/甲苯的比例、含水量、pH值、底物浓度等对酶活性影响,结果发现PEG含量越低,含水量越高,酶的活力越高;酶在此体系中的最适pH值为7.0,最适过氧化氢浓度为20mmol/L,愈创木酚的浓度为0 相似文献
14.
由E.coli表达的重组白细胞介素2(rIL-2)以包含体形式存在于工程菌胞浆中,经超声破碎等步骤处理提取包合体,用盐酸胍(GuHCl)将其溶解后经SephacrylS-200分子筛提纯,复性后再用单克隆抗体柱进行亲和层析纯化,结果可使rIL-2纯度达99%以上,平均比活性为1.0×107U/mg蛋白左右,产品不含SDS,残余鼠IgG含量测定符合生物制品规程要求。 相似文献
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过氧化心肌线粒体产生的脂类自由基及(—)—EGCG的抑制… 总被引:4,自引:0,他引:4
本文利用ESR技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂过氧化和脂类自由基,以及(-)-EGCG的抑制作用,结果表明:4-POBN能捕集lipoxygenase诱发心肌线粒体产生的自由基,得到6条线谱的脂类自由基和4条线谱捕集物,(-)-EGCG对该本系中使用的lipoxygenase活性无影响,对所产生有明显的消除作用,并呈量效关系,对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率 相似文献
16.
人血红细胞胞浆部分经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素(DE52)柱层析,磷酸纤维素柱层析(P11)得到部分纯化的PTPP,产率:5.7%,提纯1075倍。以(32) ̄P-Tyr-Poly(G_4:T)作底物,测得其表征Km约为0.5-0.8μmol/L,该酶的最适pH和最适温度分别为7.0-7.8及37-40℃。Zn ̄(2+)等二价金属离子及Na_3VO_4等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;EDTA、甘油及DTT、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用;而氟化物、酒石酸等对PTPP活性基本无影响。此外,某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对PTPP活性也都有不同程度的影响。特别是一些PKs及PPs在体外对PTPP活性也具有不同的作用。 相似文献
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蛋白质定点PEG化研究:97Cys-IFH-γ的巯基专—PEG修饰唐微,常远,徐 飞,郑仲承,刘新垣(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词人干扰素-γ;定点修饰;半胱氨酸目前进行的PEG化反应,多是针对蛋白质肽链上自由末端氨基进行的,由... 相似文献
18.
麻蝇幼虫肠道蛋白酶BGP的分离纯化及性质 总被引:1,自引:0,他引:1
棕尾别麻蝇幼虫肠液经SDS-PAGE后,X光片显影,呈现两条蛋白酶活性带.IEF后,两条蛋白酶活性带的等电点分别为pH7.7和6.8.麻蝇幼虫肠液经55%~75%硫酸铵沉淀,以及连续两次制备等电聚焦,分离纯化出等电点约为pH7.7,分子量约为35kD的蛋白酶BGP.该酶能分解酪蛋白和类胰蛋白酶专一底物Bz-Phe-Val-ArgNA,不能分解弹性蛋白酶专一底物elastin-CongoRed和类胰凝乳蛋白酶专一底物Suc(Ala)2Pro-PheNA.SBBI,Leupeptin和PMSF能强烈抑制其活性.专一底物和抑制剂的结果表明,BGP是一种类胰蛋白酶.其最适反应温度为50℃,最适作用pH为8.5.不耐高温,50℃保温30min活性急剧下降.Hg2+,Zn2+和Cu2+能抑制酶活性.Ca2+,Mg2+对酶无激活作用,EDTA无抑制作用. 相似文献
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本文利用ESR技术研究了心肌线粒体酶修饰下的脂质过氧化和脂类自由基,以及(-)-EGCG的抑制作用。结果表明:4-POBN能捕集lipoxygengse诱发心肌线粒体产生的自由基,得到6条线谱的脂类自由基和4条线谱捕集物,(-)-EGCG对该体系中使用的1ipoxyenase活性无影响,对所产生的自由基有明显的清除作用,并呈量效关系。对脂质过氧化的抑制作用,在本试验浓度范围内随浓度增加变化不大,最大抑制率约20%。 相似文献
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人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的研究:Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯… 总被引:1,自引:0,他引:1
人血红细胞胞浆部分经(NH4)2SO4沉淀,DEAE-纤维素(DE2)柱层析,磷酸纤维素柱层析(P11)得到部分纯化的PTPP,产率;5.7%,提纯1075倍。以^32P-Tyr-Poly(G4:T)作底物,测得其表征Km约为0.5-0.8μmol/L。该酶的最适pH和最适温度分别为7.0-7.8及37-40℃。Zn^2+等二价金属离子及Na3VO4等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;EDTA、甘 相似文献