重组人白细胞介素2复性条件的研究

由E.coli表达的重组白细胞介素2(rIL—2)以包涵体形式存在于工程菌胞浆中。用变性剂将包涵体溶解后得到的还原态rIL—2没有生物活性,必须对其进行复性才能最终得到有用的产品。本实验研究了以盐酸胍(GUHCl)为变性剂条件下,变性剂浓度、复性剂、pH值以及温度和时间等对rIL—2复性的影响。     

大肠杆菌发酵重组人白细胞介素—2的高密度表达

利用美国NBS公司BibFloⅢ型发酵罐,采用连续流加的方法培养能表达IL-2的E．coli,结果细菌温重达100g／L发酵液,IL－2活性达1．52×1010U／L发酵液。     

Ser^125突变型重组人白介素2的纯化研究

对E．Coli表达的Ser125突变型白细胞介素2的纯化方式进行了研究。依次经包含体提取、SephacrylS200凝胶柱层析、复性、RP－HPLC、SephacrylS100凝胶柱层析,实验最终获得电泳纯度为一条带的、比活约为2.0×107IU／mg的rIL－2。结果表明采用建立的提地方法可稳定地获得较高纯度及比活性的突变型rIL－2。     

一种高纯度,无SDS的重组人白细胞介素2制备方法

由Ｅ．ｃｏｌｉ表达的重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）以包含体形式存在于工程菌胞浆中,经超声破碎等步骤处理提取包合体,用盐酸胍（ＧｕＨＣｌ）将其溶解后经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００分子筛提纯,复性后再用单克隆抗体柱进行亲和层析纯化,结果可使ｒＩＬ－２纯度达９９％以上,平均比活性为１．０×１０７Ｕ／ｍｇ蛋白左右,产品不含ＳＤＳ,残余鼠ＩｇＧ含量测定符合生物制品规程要求。     

一种新剂型基因工程干扰素稳定性的研究

目前国内市场上的干扰素多数为含有人血白蛋白的冻干制剂 ,为消除人血白蛋白带来的血源性感染 ,并方便临床用药 ,我们根据基因工程药物的特点 ,将冻干基因工程干扰素改造成干扰素注射液 ,选择合适的缓冲系统和非人血白蛋白稳定剂 ,在 4℃和 3 7℃下的稳定性进行了研究 ,确定了一种稳定的新型干扰素注射液。     

中国人红细胞生成素cDNA克隆与高效表达

以中国人正常胎肝为原料提取总RNA,逆转录合成cDNA与pCR3载体相连接,构建成pE／C表达质粒。序列鉴定结果表明,cDNA序列与国内外已报导的相比,除第2个密码子的第3个碱基系引物设计所致差异外,其余部分完全相同。利用脂质转染法将质粒转入中国白鼠卵巢细胞,获得能高效稳定表达重组人红细胞生成素的工程细胞。     

大肠杆菌发酵重组人干扰素—α2a的高密度,高表达

利用NBS公司的BioFloⅢ发酵罐,采用培养基流加的方式培养表达人干扰素的E．coli工程菌,结果湿菌重达128g／L,干扰素活性达98×1010U／L发酵液。