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1.
蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解   总被引:3,自引:0,他引:3  
赤子爱胜蚓(Eiseniafetida)体内的一种纤溶酶原激活剂(e-PA)能够降解人工合成底物N-乙酰-L-酪氨酸乙酯(ATEE),该降解反应的最适pH为8.5,而且在0.2mol/LNa2HPO4中的活性要强于在0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)中.分别测定了e-PA的大小亚基及全酶在0.2mol/LNa2HPO4与0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)两种体系中的Km和Kcat.结果表明,在0.2mol/LNa2HPO4中,全酶的ATEE活性远远高于大小亚基单独的ATEE活性,而在0.05mol/LTris-HCl(pH8.5)中则没有这种现象.从蛋白质结构的角度对这一结果作了解释.用不同抑制剂和e-PA作用,结果表明,pepstatin,E-64和EDTA对e-PA的ATEE活性都有不同程度的抑制,这一点与e-PA的BAEE活性不同.  相似文献   
2.
蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的分离纯化   总被引:22,自引:3,他引:19  
为获得一种高效,低廉的溶栓药物,从赤子爱胜蚓(Eiseniafaetida)体内分离纯化出一种可体外激活纤溶酶原从而间接降解纤维蛋白的酶(e-PA).纯化过程包括:粗品的盐析,离子交换层析,凝胶过滤层析及疏水相互作用层析.该组份是由二个亚基通过疏水相互作用维系在一起的.通过凝胶过滤层析,可测得全酶的分子量为45000;SDS电泳显示大、小亚基的分子量分别是26000与18000;而质谱法测得的大、小亚基的分子量分别为24556.7与15546.6.对大小亚基进行了氨基酸组成分析,结果显示大亚基不含Lys而小亚基不含Cys.测定了大亚基N端25个氨基酸序列:VIGGTNASPGEIPWQLSQQRQSGSW.并与部分已知蛋白质序列进行了比较.e-PA在纤维蛋白平板上表现有三种不同的纤溶活性  相似文献   
3.
蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究   总被引:15,自引:0,他引:15  
从赤子爱胜蚓(Eiseniafaetida)中纯化出的一种纤溶酶原激活剂(e-PA)在纤维蛋白平板上可表现出三种活性,分别记为:CFPg,uCFPg和uCF.为更好了解各种活性与e-PA的纤溶能力的关系,考察了在SDS和不同抑制剂存在下各种活性的变化.结果表明,SDS可以增强CFPg活性且使得e-PA变得对一些抑制剂更敏感;leupeptin,chymostatin,pepstatin,apro-tinin,phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)和dithiothreitol(DTT)对uCF没有影响;pep-statin能增强CFPg和uCFPg活性,E-64(一种巯基抑制剂)能增强uCFPg和uCF活性.这些现象说明不能简单将e-PA归结为丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶.此外又以纤溶酶原为底物,分析了e-PA在体外降解天然蛋白质的肽键特异性,结果表明:e-PA可以切割碱性氨基酸,小的中性氨基酸及Met的羧基端,同时e-PA确能将纤溶酶原切割为纤溶酶;这一结论为e-PA有可能成为新型溶栓药物提供了生化基础.  相似文献   
4.
导向性纤溶酶原激活剂的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
溶栓疗法是血栓治疗中的一种重要措施.研制具有高选择性的导向性纤溶酶原激活剂有着重大的理论意义和实用价值.采用血栓特异的单克隆抗体及其片段来介导溶栓剂已展示出较好的应用前景.双功能抗体以及同时具有抗栓,抗凝活性的小肽正逐渐拓宽人们有关导向分子研制的视野.所有这一切都将随着分子生物学技术的不断完善而付诸实现.  相似文献   
5.
蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解   总被引:2,自引:0,他引:2  
以苯甲酰-L-精氨酸乙酯(benzoyl-L-arginineethylester,BAEE)为底物,研究了蚯蚓体内纤溶酶原激活剂(plasminogenactivatorfromEiseniafetida,e-PA)的酶学性质.酶促反应的最适pH为8.4,e-PA降解BAEE的Km为1.24±0.16×10-5mol/L,Kcat为13.80±4.02s-1.测定了构成e-PA的大,小亚基分别降解BAEE的Km和Kcat.结果表明,大亚基的Km与全酶的Km相差不多,但比小亚基小约10倍,即对底物的亲和力比小亚基强约一个数量级.大小亚基的Kcat比较接近,分别是全酶的1/6和1/3.研究了8种抑制剂对e-PA降解BAEE活性的影响,其中pepstatin和E-64(一种巯基抑制剂)对酶促反应有激活作用,TPCK,TL-CK,PMSF,chymostatin和leupeptin对其有不同程度的抑制作用,EDTA对e-PA的活性没有影响.对e-PA的BAEE活性和e-PA的纤溶活性之间作了比较.  相似文献   
6.
蚯蚓纤溶酶原激活剂(e-PA)具有多种底物特异性.对构成其的小亚基的活性中心的研究有利于阐述e-PA的结构与功能的关系.利用胰蛋白酶的特异性抑制剂TLCK(N-α-p-tosyl-L-lysinechloromethylketone)对小亚基进行抑制活性的研究,结果表明TLCK对酶促反应的抑制曲线与可逆抑制曲线相似,但在抑制剂存在下的最大反应速度与抑制剂不存在时的最大反应速度不同.结合小亚基在TLCK存在下的CD光谱变化,证明了小亚基分子表面存在两个活性位点,这两个活性位点对TLCK的敏感性不同,从而造成TLCK抑制行为的异常.推测不同的活性结构对应于不同的底物特异性.  相似文献   
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