单宁酶的固定化及其在酯型儿茶素水解反应中的应用

采用自制的壳聚糖为载体对单宁酶（ＴＡ）固定化,ＴＡ与壳聚糖配比１：２．５,３０℃固定２ｈ,活力回收达２３．６％～３３．１％;偶联效率为８４．９％～８８．０％。固定化单宁酶（ＩＴＡ）的表观Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为２２．２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ的Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为１０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ和ＩＴＡ的最适反应温度分别为４０℃和５０℃;６０℃处理１５ｍｉｎ,残存活性分别为１３．６％和６０．３％。ＴＡ和ＩＴＡ的最适ｐＨ值分别为５．８和６．４;ＴＡ在ｐＨ４．８～７．８活力稳定,而ＩＴＡ活力稳定范围在ｐＨ４．８～６．８．ＩＴＡ作用于ＥＧＣＧ的半衰期为７８．７ｈ,ＥＧＣＧ水解率达９０．３％。对茶多酚提取物进行水解,其所含的酯型儿茶素ＥＧＣＧ和ＥＣＧ水解率分别为９６．４％和９６．８％,非酯型儿茶素ＥＧＣ和ＥＣ的含量显著增加。     

单宁酶的固定化及其在酯型儿茶素水解反应中的应用

采用自制的壳聚糖为载体对单宁酶（ＴＡ）固定化,ＴＡ与壳聚糖配比１：２．５,３０℃固定２ｈ,活力回收达２３．６％￣３３．１％;偶联效率为８４．９％￣８８．０％。固定化单宁酶（ＩＴＡ）的表观Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为２２．２×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ的Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为１０×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ和ＩＴＡ的最适反应温度分别为４０℃和５０℃;６０℃处理１５ｍｉｎ,残存活性分别为     

蔗糖酶和GOD的共固定化研究

本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明：与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和ＧＯＤ的响应滞迟期分别为３分钟和２分钟,４态响应时间增加６分钟和４分钟,Ｋｍ值增大,ｐＨ─活力曲线变宽,最适ｐＨ值分别增大０．７和０．６４,最适温度则降低７．３℃和１６℃。以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和ＧＯＤ,其蛋白质固定化率为９２．９％,分解葡萄糖的总速度为４４１．６ＩＵ,当蔗糖浓度在０．２％以内时其反应速度与蔗糖浓度呈正相关（ｒ＝０．９９６）,使用半衰期１６２３次,在４℃下保存１２０天活力残存为８３．７％。     

产菊糖酶克鲁维酶母Y-85的明胶固定化

克鲁维酵母Ｙ－８５的胞外菊糖酶占其总酶活的２８％,以１０％明胶包埋该酵母,酶活保留率为７３．９％。与游离细胞相比,固定化细胞菊糖酶的最适ＰＨ未改变,但当ＰＨ〈４和ＰＨ〉７时酶活稳定性更高;最适水解温度则升高了５℃,酶的热稳定性也有所提高。游离细胞的Ｋｍ值为９．３ｍｍｏｌ／Ｌ,固定化细胞则为１２．８ｍｍｏｌ／Ｌ。４℃贮存３０ｄ,固定化细胞酶活无损失,分批反应１０批次,固定化细胞酶活及机械强度保持良好     

疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

６－氨基已酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠（ＴＡ）衍生物上,得到ＣＴＡ和ＡＴＡ,天冬氨酸酶在ｐＨ５．５,０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液中,０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ存在下通过疏水吸附固定化在ＴＡ,ＣＴＡ和ＡＴＡ上。结果表明三种固定化酶活力回收均达９０％以上,同ＴＡ－天冬氨酸酶相比,ＣＴＡ－酶,ＡＴＡ－酶的最适ｐＨ,ｐＨ稳定性等均有所改变,其中ＡＴＡ－酶的热稳定性,使用稳定性增强     

人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究：Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯…

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率;５．７％,提纯１０７５倍。以＾３２Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ。该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ＾２＋等二价金属离子及Ｎａ３ＶＯ４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘     

链霉菌Z94-2碱性脂肪酶产生条件及酶学性质

在１５２ 株脂肪酶产生菌中,链霉菌Ｚ９４２ 产脂肪酶活力为５９６ｕ／ ｍＬ,其最适培养基（ｇ／Ｌ） 为：糊精１０ 、黄豆饼粉３０ 、尿素１０ 、Ｋ２ＨＰＯ４ ０－５ 、ＭｇＳＯ４ ０－５ 、ＮａＣｌ １ 和ＡＥＯ９ ０ ．５ ,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９ ．５ ～１０－０ ,在２６ ℃培养４８ｈ 。用ＰＶＡ 橄榄油乳化系统测定该酶的最适ｐＨ９ ．８ ,最适温度３７ ℃,在ｐＨ８－６ ～１０－２ 于５ ℃存放２４ ｈ ,酶活力不变。０－１４ｍｏｌ／Ｌ 的氯化钙有较大的激活作用。     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

假菠萝麻蛋白酶分离纯化及特性研究

从假菠萝麻叶汁中用乙醇分部沉淀法得到一种蛋白酶,对酪蛋白有强烈的水解活性,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析和ＳＰ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换柱层析等步骤纯化,可得到六角形结晶。结晶酶液经ＰＡＧＥ圆盘电泳,每条胶柱上只显示一条蛋白带,其活性在ｐＨ４。５－１０、５５℃范围内较稳定,最适ｐＨ８．５最适温度５０℃,Ｋｍ（酪蛋白）值为０．１８５％（Ｗ／Ｖ）。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ     

水稻巯基蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究

水稻的糠皮和胚经生理盐水浸取、离心后的上清液加热至８０℃处理１０ｍｉｎ,离心获得的上清液调ｐＨ至８．０,得到沉淀。沉淀溶解于０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ,经透析冷冻干燥得水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）粗品;粗品再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱线性离子梯度洗脱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ上均为单一蛋白带的ＣＰＩ样品。经上述步骤,ＣＰＩ可被纯化５８倍。经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量均为１２０００,Ｎ末端氨基酸为Ｐｒｏ,等电点５．６．水稻ＣＰＩ经１００℃处理１０ｍｉｎ后,其抑制活性无任何变化,在ｐＨ２．０～９．０之间,活性也不发生改变,但ｐＨ在９．０以上,其活性逐渐下降,水稻ＣＰＩ对木瓜蛋白酶是一种高亲和性的抑制剂,它对木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶有强抑制作用,对菠萝蛋白酶仅有弱抑制作用,但对胰蛋白酶则全无抑制作用;其抑制类型属竞争性抑制剂类型,Ｋ＿ｉ值约３．５×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比约为１：１。     

树脂载体固定S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

目的:筛选一种适合S-腺苷甲硫氨酸合成酶固定化的树脂载体,进行固定化工艺优化及固定化酶性质研究。方法:以固定化率和表观酶活回收率为指标,筛选固定化效果最佳的一种树脂,采用单因素实验对固定化条件进行优化。结果:阴离子交换树脂载体ESR-2表现出最优的固定化率(94.03%)和酶活回收率(47.45%);最佳固定化条件为加酶量4U/g、pH 8.0、15℃吸附10h,最佳条件下固定化酶表观酶活为2.1U/g,表观酶活回收率达51.6%。固定化酶的最适pH为8.5,最适温度为35℃,连续反应10批次后酶活剩余77.92%。结论:树脂载体ESR-2固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶酶活及稳定性较好,能够用于S-腺苷甲硫氨酸的工业化大规模生产。     

尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

 尼龙经CaCl_2和H_2O的甲醇溶液处理,稀HCl水解用戊二醛交联以制备固定化木瓜蛋白酶。在溶液酶浓度为1mg/mL pH7.5—8.0、4—15℃条件下固定3h,活力回收42.5％,相对活力46％,偶联效率52％,半衰期72天。溶液酶Km值和固定化酶K_m~(aPP)值(底物酪蛋白W/V,％)分别为0.28％和0.35％。溶液酶和固定化酶分别在pH6.5和pH8.0以下活力稳定;最适pH分别为7.0和8.0;在65℃处理30min活力分别为原有活力的89％和66％。当酪蛋白浓度为1.5％和2.5％以上活力分别受到抑制。固定化酶在6mol/L脲中连续浸洗5次共6h其活力稳定,仍有原活力的44.4％;用以处理啤酒浊度比对照下降了2-11倍;蛋白质含量下降了55％;冷藏(4℃)120天,无冷混浊发生;同时各项理化指标和风味不变。     

纳米磁性壳聚糖微球固定化酵母醇脱氢酶的研究

建立了以纳米级磁性壳聚糖微球(magnetic chitosan microspheres , M-CS)为载体固定化酵母醇脱氢酶(yeast alcohol dehydrogenase,YADH)的方法,优化了YADH的固定化条件,考察了固定化酶的性质。结果表明,M-CS 呈规则的圆球形,粒径在30nm 左右,具有较好的磁响应性。酵母醇脱氢酶固定化适宜条件为:50 mg 磁性壳聚糖微球,加入20mL 0.25 mg/mL 酵母醇脱氢酶(蛋白质含量)磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L ,pH 7.0) ,在4 ℃固定2h。M-CS 容易吸附酵母醇脱氢酶,但吸附的酶量受载体与酶的比例、溶液的离子浓度、溶液pH的影响明显,而温度对吸附的酶量的影响则相对较弱。相对于游离的酵母醇脱氢酶,固定化酶的最适温度略有升高,可明显改善其热稳定性、酸碱稳定性、操作稳定性和贮存稳定性。     

交联葡聚糖结合无花果蛋白酶的制备与性质

本文报道了将Sephadgx G-200与对β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)首先醚化制备对氨基苯砜乙基交联葡聚糖(ABSE-Sephadex G-200),然后经重氮化固定无花果蛋白酶。固定化酶的活力回收达69％。BANA对该酶固定化过程中的活性变化有保护作用。天然酶与固定化酶都具有良好的耐热性,在69°～70℃,80min固定化酶较天然酶稳定。 用苯甲酰-DL-精氨酰-β-荼胺(BANA)为底物,在半胱氨酸存在下,测定了两种形式酶的动力学性质。在pH7.7的磷酸盐缓冲系统中,37℃,天然无花果蛋白酶的K_m=0.32mol/L;在间歇振摇下固定化酶的表观K′m=1.02mmol/L。最适pH无明显改变,均为pH7.7。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,成二醛为交联剂将木瓜蛋白酶固定化。5％戊二醛在4-6℃下处理载体5h,加酶液(3.5mg/mL蛋白,pH7.2)固定12h,活力回收达32％,作用于酪蛋白的半衰期为36天,其表观K_m(酪蛋白)值为0.075％(W/V),溶液酶的K_m值为0.086％;最适pH7.0～7.5,溶液酶为7.0～8.5。固定化酶在pH8.5以下,溶液酶在9.0以下活力稳定。固定化酶在45℃以下,溶液酶在75℃以下稳定。用6mol/L脲洗脱固定化酶4次(5.5h)活力仍有54.5％。用固定化酶处理啤酒浊度比对照下降了1.5-3.7倍,蛋白质含量下降了44％,冷藏(4℃)120天无冷混浊现象发生并保持了啤酒原有风味和理化性状。     

辣根过氧化物酶在水相胶束中的动力学

研究了辣根过氧化物酶在三种表面活性剂（ＳＤＳ,ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及ＣＴＡＢ）的水相胶束中催化联苯胺聚合反应的动力学。结果表明水相胶束体系有利于反应的进行。辣根过氧化物酶在水相胶束体系中遵循米氏反应,Ｋ_ｍ在ＳＤＳ、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及ＣＴＡＢ三种体系中分别为３．０１４×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ、１．７２８×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ和５．６６４×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ。由于微环境的不同,ＨＲＰ在三种体系中表现出不同的最适反应温度和最适ｐＨ。     

精胺和Mg~（2＋）对tRNA~（Ile）圆二向色谱的影响

由于精胺（ｓｐｅｒｍｉｎｅ）能特异地刺激哺乳动物ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的氨基酰化,本文用纯化的牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）观察了精胺和Ｍｇ（２＋）对ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱的影响。结果显示：Ｍｇ（２＋）可使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰向短波方向偏移２ｎｍ,波峰为２６３ｎｍ,峰值被增大约１０％,ΔθＭｇ（２＋）＝２．３×１０３ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;而精胺使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰减少４０％,Δθｓｐｅｒｍｉｎｅ＝１×１０（－４）ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;精胺和Ｍｇ（２＋）对肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）－ＩｌｅＲＳ复合物或ＩｌｅＲＳ的ＣＤ光谱基本无影响。表明Ｍｇ（２＋）和精胺可影响牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的构象。实验同时以酵母ｔＲＮＡ（Ｐｈｅ）和Ｅ·ｃｏｌｉｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）作为对照。     

活性炭吸附固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶

目的：以活性炭为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶,考察固定化酶的性质。方法：对影响酶固定化的因素优化筛选,确定有显著影响的因素：pH、离子强度、酶量、固定化时间进行L934的正交实验,获得最佳固定化条件,并对固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性进行研究。结果：最佳固定化条件为：载体0.3g,酶量5mL,总反应体系为12mL,离子强度1mol/L,温度4℃,pH 7.0,固定化40h;最高固定化酶活性为135.9U/g湿载体。固定化酶性最适反应温度为55℃,最适pH为10,重复使用12次后没有活性损失。结论：活性炭吸附固定化青霉素G酰化酶的活性高,批次反应稳定,具有工业应用潜力。