HyTK基因转移联合ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的过度增生主要是由于高度增生活性的成纤维细胞的数量异常增多及细胞外基质合成增加所致．用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的转移,随后应用药物９－（１,３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ）可选择性地杀死增生细胞．采用组织块贴壁法在体外原代培养成功增生性瘢痕病人的成纤维细胞（ＦＢ）．重组逆转录病毒ＧＴＫ转染ＦＢ细胞后,用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＦＢ／ＧＴＫ）,经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入ＦＢ中,但不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＦＢ／ＧＴＫ及ＦＢ,光镜下观察不同时间后细胞形态变化及ＭＴＴ法检测细胞活性．结果表明,ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对ＦＢ／ＧＴＫ有显著的杀伤作用,且具有强有力的“旁观者效应”     

精胺和Mg~（2＋）对tRNA~（Ile）圆二向色谱的影响

由于精胺（ｓｐｅｒｍｉｎｅ）能特异地刺激哺乳动物ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的氨基酰化,本文用纯化的牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）观察了精胺和Ｍｇ（２＋）对ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱的影响。结果显示：Ｍｇ（２＋）可使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰向短波方向偏移２ｎｍ,波峰为２６３ｎｍ,峰值被增大约１０％,ΔθＭｇ（２＋）＝２．３×１０３ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;而精胺使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰减少４０％,Δθｓｐｅｒｍｉｎｅ＝１×１０（－４）ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ;精胺和Ｍｇ（２＋）对肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）－ＩｌｅＲＳ复合物或ＩｌｅＲＳ的ＣＤ光谱基本无影响。表明Ｍｇ（２＋）和精胺可影响牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的构象。实验同时以酵母ｔＲＮＡ（Ｐｈｅ）和Ｅ·ｃｏｌｉｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）作为对照。     

人工会成柞蚕杀菌肽D基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

以质粒pWR450为载体,克隆了人工合成的柞蚕杀菌肽D基因(122bp),构建的重组子pWR450-Cec转化大肠杆菌JM103、用限制性内切酶酶切鉴定。产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示可表达杀菌肽-β-gal融合蛋白。     

用“乒乓效应”提高包装细胞培养上清中逆转录病毒滴度的方法

逆转录病毒是基因治疗研究中最为主要的基因转移载体,目前批准的基因治疗试验方案中绝大多数采用逆转录病毒作为载体。逆转录病毒具有稳定、安全、高效的优点,但仍存在病毒滴度低的问题。目前多从质粒结构和病毒包装两方面来提高病毒滴度。 将HyTK基因替换逆转录病毒载体GlNa     

精胺对牛肝tRNA^lle氨基酰化的刺激作用

本实验用纯化的牛肝异亮氨酸ｔＲＮＡ（ｔＲＮＡ＾Ｉｌｅ）和异亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶,研究了精胺对Ｉｌｅ－ｔＲＮＡ复合物形成及ＩｌｅＲＳ活性的作用。结果表明：精胺能特异地促使牛肝ｔＲＮＡ＾Ｉｌｅ氨基酰化反应;对ＩｌｅＲＳ活性无影响;能明显地增加形成Ｉｌｅ－ｔＲＮＡ复合物反应的Ｖｍａｘ和ｔＲＮＡ＾Ｉｌｅ的Ｋｍ值。     

柞蚕杀菌肽D对宫颈癌细胞系和阴道毛滴虫生长的损伤作用

柞蚕等昆虫在某些理化因素诱导下,可产生杀菌肽。该物质不但具有广谱杀菌作用,且对某些原虫和癌细胞有抑制作用。为了把杀菌肽的应用引入临床,本文研究了柞蚕杀菌肽D对宫颈癌细胞(SiHa细胞)及阴道毛滴虫的影响,并探讨其机理。     

应用免疫组织化学技术检测非小细胞性肺癌的P53蛋白

正常P53蛋白半衰期短,用普通免疫组织化学方法检测不出。而突变后的P53蛋白主要通过与病毒蛋白结合使其稳定性增强,延长其半衰期,从而细胞内P53蛋白增多,使用普通免疫组织化学方法即可检出。Iggo等通过对P53蛋白和p53基因的检测分析,发现p53基因在肿瘤组织中的高表达可以预示p53基因产生了点突变,从而可以采用较简便的方法来对     

TK/GCV系统体外诱导成纤维细胞凋亡

 在体外培养并鉴定增生性瘢痕成纤维细胞（ Ｆ Ｂ）的基础上,采用重组逆转录病毒 Ｇ Ｔ Ｋ 介导并联合应用 ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ 对 Ｆ Ｂ细胞进行体外杀伤,以探究 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统体外杀伤成纤维细胞的机制．经光镜、电镜及凝胶电泳等实验发现,在 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 对瘢痕成纤维细胞的杀伤过程中存在明显的细胞凋亡现象．这提示 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统对体外培养的瘢痕成纤维细胞的杀伤作用部分是通过细胞凋亡途径实现的．     

TK基因/GCV对瘢痕组织成纤维细胞增生的体外抑制研究

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确有效的方法,主要问题是难以控制其复发。我们通过逆转录病毒载体GTK介导HSV-TK基因转移联合9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(更昔洛韦,ganciclovir,     

用T7 RNA聚合酶体外转录合成大鼠肝tRNAIle

采用PCR技术从rec-M13mp18中扩增出120 bp的大鼠肝tRNA^Ile合成基因片段,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板,利用T7 RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNA^Ile基因,生成不含修饰碱基的tRNA^Ile,并对体外转录反应条件进行了优化,回收的tRNA产量可达DNA模板量的40倍.