单宁酶的固定化及其在酯型儿茶素水解反应中的应用

采用自制的壳聚糖为载体对单宁酶（ＴＡ）固定化,ＴＡ与壳聚糖配比１：２．５,３０℃固定２ｈ,活力回收达２３．６％～３３．１％;偶联效率为８４．９％～８８．０％。固定化单宁酶（ＩＴＡ）的表观Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为２２．２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ的Ｋｍ值（以没食子酸丙酯为底物）为１０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,ＴＡ和ＩＴＡ的最适反应温度分别为４０℃和５０℃;６０℃处理１５ｍｉｎ,残存活性分别为１３．６％和６０．３％。ＴＡ和ＩＴＡ的最适ｐＨ值分别为５．８和６．４;ＴＡ在ｐＨ４．８～７．８活力稳定,而ＩＴＡ活力稳定范围在ｐＨ４．８～６．８．ＩＴＡ作用于ＥＧＣＧ的半衰期为７８．７ｈ,ＥＧＣＧ水解率达９０．３％。对茶多酚提取物进行水解,其所含的酯型儿茶素ＥＧＣＧ和ＥＣＧ水解率分别为９６．４％和９６．８％,非酯型儿茶素ＥＧＣ和ＥＣ的含量显著增加。     

无花果蛋白酶在阴离子交换树脂上的固定化

无花果蛋白酶通过８％戊二醛活化载体,共价结合到聚苯乙烯阴离子交换树脂ＧＭ２０１上,固定化作用在ｐＨ７．７,酶浓度０．８ｍｇ／ｇ树脂,４℃下进行６ｈ。得到的固定化酶表观Ｋ_ｍ值（酪蛋白,１．１１×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）小于溶液酶Ｋ_ｍ值（１．９６×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）;固定化酶活性在ｐＨ６～８保持稳定,溶液酶最适ｐＨ为７．２;固定化酶最适温度由溶液酶的５０～６０℃移至３７℃;固定化酶２５℃保持７ｄ,重复水解酪蛋白７次后,保留８３．３％活性。固定化酶对酪蛋白水解度达４７．５％,对大豆球蛋白达１１．６％。     

缓激肽对大鼠背根神经节分离神经元ATP激活电流的调制作用

在新鲜分离大鼠背根神经节（ＤＲＧ）的５６个细胞标本上,应用全细胞膜片箝技术进行记录。胞外加缓激肽（ＢＫ,１０＾－６￣１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）引坊的ＤＲＧ细胞膜反应结果如下：（１）７１．４％的细胞为内向电流,其电流反应的幅值具有明显的浓度信赖性;（２）１２．５％的细胞为外向电流;（３）１６．１％的细胞未引起可检测的膜反应,单独给予ＡＴＰ（１０＾－６￣１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）在大多数受栓细胞（５４／５６）     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

酶放大镧系元素发光法测定碱性碱酸酶

报告了应用酶放大镧系元素发光法测定碱性酸酶的方法。应用５－氟水扬酸磷酯作为酶底物,并对方法学中的多种因素进行了最佳化。用甲基硅油（Ｉ）改进了信／噪比的稳定性。方法的灵敏为４Ｕ／Ｌ。精密度为１０％,精密度为１０％的浓度范围是２．００￣３．００×１０＾２Ｕ／Ｌ。测量值的相对误差〈１０％,测定了血清中的碱性磷酸酶浓度,回收率为９３％￣９５％。     

粘红酵母产L—苯丙氨酸解氨酶的条件和酶法合成茶丙氨酸的研究

研究了粘红酵母中Ｌ－苯丙氨酸解氨酶的产酶条件及用此酶把反式肉桂酸转化成苯丙氨酸的条件。结果表明,在下列培养基及培养条件下ＰＡＬ的活力较高,酵母膏１０．０蛋白胨１０．０,ＮａＣ１５．０,ＫＨ２ＰＯ４０．５,苯内氨酸０．５,（ｎｈ４）２ＳＯ４１．０,葡萄糖５．０,ｐＨ６．０－６．５,培养温度为３０℃。转化过程中,（ＮＨ＾＋４）对初速度的影响符合米氏方程,其Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为１６．８５ｍｏｌ／Ｌ和５．     

细胞内外钙离子浓度对鲎腹神经感光器光适应的影响

用细胞内记录的方法研究了由微弱持续光刺激（６×１０＾６￣９×１０＾６光子／ｃｍ＾２,１０ｓ引起鲎（Ｌｉｍｌｕｓ ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓ）腹神经光器膜电流的变化－－光碰击。结果表明,在生理盐水（１０ｍｍｏｌ／ＬＣａ＾２＋）中光碰击的平均面积为（３９．５±１．７６）ｐＣ,微弱光适应（记录前２．５ｓ加１次光闪,９×１０＾９光子／ｃｍ＾２）使得光碰击的面积下降至（１０．５±２．２９）ｐＣ（ｎ＝４）。在低钙溶     

疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

６－氨基已酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠（ＴＡ）衍生物上,得到ＣＴＡ和ＡＴＡ,天冬氨酸酶在ｐＨ５．５,０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液中,０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ存在下通过疏水吸附固定化在ＴＡ,ＣＴＡ和ＡＴＡ上。结果表明三种固定化酶活力回收均达９０％以上,同ＴＡ－天冬氨酸酶相比,ＣＴＡ－酶,ＡＴＡ－酶的最适ｐＨ,ｐＨ稳定性等均有所改变,其中ＡＴＡ－酶的热稳定性,使用稳定性增强     

尾加压素增加血管平滑肌细胞粘着斑激酶的含量和活力

在体外培养的血管平滑肌细胞上,采用蛋白印迹杂交免疫沉淀的方法,研究尾加压素Ⅱ（ＵⅡ）与粘着斑激酶（ＦＡＫ）介导的信号传导之间的关系。结果表明,ＵⅡ在１０＾－８、１０＾－７和１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的深度时,可分别使ＦＡＫ活力增加２．２、３．０４和０．７３倍。加入ＵⅡ在（１０＾０７ｍｏｌ／Ｌ）５ｍｉｎ后,ＦＡＫ活力增加９５％,但与对照组相比无显著性差异（Ｐ〉０．０５０,刺激１０ｍｉｎ后,ＦＡＫ活力升高３     

人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究：Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯…

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率;５．７％,提纯１０７５倍。以＾３２Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ。该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ＾２＋等二价金属离子及Ｎａ３ＶＯ４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

2—酮—L—古龙酸还原酶分离纯化及其理化,酶学性质的研究

从发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ２９８０混和菌株的无细胞抽提液中分离到了２－酮－Ｌ－古龙酸还原酶（ＫＧＲ）,测得其分子量为９０ｋＤａ。动力学性质研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对２－酮－Ｌ－古龙酸作用的Ｋｍ值为３．４２×１０＾－３ｍｏｌ,最适作用ｐＨ为６．５,最适作用温度为３０℃。２－酮－Ｌ－古龙酸还原     

高血压大鼠红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATP酶对Ca^2＋反应的变...

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃｕ＾２＋Ｍｇ＾２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ＾２＋浓度为１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０＾－７ｍｏｌｇ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;Ｃａ＾２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶     

丹皮酚对心肌细胞自律性和延迟后除极的影响

目的与方法：采用常规玻璃微电极技术研究丹皮酚对离体心肌细胞自律性（ＡＭ）、延迟后除极（ＤＡＤ） 及触发活动（ＴＡ）的影响。结果：１．８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ丹皮酚灌流组,肾上腺素（Ａｄｒ）的阈浓度空白对照组为（１．２８±０．５７）μｍｏｌ／Ｌ,药后为（１．５６±０．５３）μｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝９,Ｐ＞０．０５）;用（１．８×１０－ ３） ｍｏｌ／Ｌ丹皮酚（Ｐａｅ）灌流组,Ａｄｒ 浓度由空白对照组的（１．２２ ±０．６２）μｍｏｌ／Ｌ升高到（６．２２±２．１１）μｍｏｌ／Ｌ（ｎ＝９,Ｐ＜０．０１）。１．８×１０－３ｍｏｌ／Ｌ的Ｐａｅ 能明显抑制哇巴因（Ｏｕａ）诱发的ＤＡＤ的幅值,当基本刺激周长为５００,４００,３００ 和２００ ｍｓ 时,其ＤＡＤ幅值从（５．５±２．０）ｍＶ,（７．３±２．１）ｍＶ,（８．０ ±２．４）ｍＶ和（９．２±１．９）ｍＶ减小到（３．０±１．１）ｍＶ、（３．６±１．７）ｍＶ,（４．３±２．０） ｍＶ和（５．９ ±１．６） ｍＶ,Ｐ＜０．０１。当基本刺激周长为２００ ｍｓ时,ＴＡ 数目由５．５±１．０ 降至０．７±０．３（Ｐ＜０．０１）。结论：丹皮酚能抑制心肌细胞ＡＭ、ＤＡＤ及ＴＡ,具有抗心律失常作用     

阿片肽对人早期胎盘基质金属蛋白酶-2和-9的调节作用

采用胎盘绒毛组织体外孵育模型,观察了胎盘阿片肽对人早期胎盘滋养层组织基质金属蛋白酶－２和－９活力的调节。结果表明,β－内啡肽（１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ）和强啡肽（１０＾－１０ｍｏｌ／Ｌ）可以显著地抑制体外孵育的人早期胎盘滋养层组织中这两种金属蛋白酶的活力,且其抑制效应 洛酮（１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ）所阻 断;甲硫氨酸脑啡肽在１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时显著提高二种基质金属２蛋白酶的活力,而在１０＾－８￣１０＾     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对K~＋刺激的小麦根质膜ATP酶活性、K~＋吸收、外渗及再分配的影响

１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ毒素加入小麦根质膜制剂中可促进Ｋ＋刺激的ＡＴＰ酶活力,１０－６ｍｏｌ／Ｌ开始呈抑制效应,抑制程度随ＤＯＮ浓度加大而提高。根尖（５ｃｍ）离体根段于０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ中,１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ能促进根段Ｋ＋吸收,１０－６ｍｏｌ／Ｌ以上浓度则Ｋ＋吸收呈抑制,１０－２ｍｏｌ／Ｌ浓度下根段的净吸收为负值,表明组织中Ｋ＋大量外渗。根段置蒸馏水中６ｈ,４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＯＮ即导致振段Ｋ＋渗漏。用ＤＯＮ处理整株小麦根,浓度在０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ以上可促进Ｋ＋从植株其它部位向根运输,而浓度在８ｍｍｏｌ／Ｌ时即抑制Ｋ＋向根富集,且根内Ｋ＋明显渗漏。     

玉米花粉低分子量ATP酶部分性质研究

对纯化的玉米花粉低分子量ＡＴＰ酶－３８ｋＤ蛋白的部分理化及药理学性质进行了研究。该酶与植物细胞中现已发现的马达蛋白（动蛋白及ｄ６ｎａｍｉｎ）存在较大差异。紫外吸收光谱在２７８ｎｍ处有最大吸收。圆二色谱分析表明该蛋白呈现典型球蛋白特征。最适ｐＨ为８．０，对ＡＴＰ的Ｋｍ为８×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为３．５μｍｏｌＰｉ每ｍｉｎ每ｍｇ蛋白质。对ＮＴＰ底物专一性为ＣＴＰ〉ＡＴＰ≥ＧＴＰ〉ＩＴＰ〉ＵＴ     

单宁酶活力测定方法的研究

在紫外光区２７０ｎｍ处,没食子酸丙酯在０μｍｏｌ／Ｌ－１００μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内与其吸光值成正比,利用此原理,建立了方便、灵敏、准确的单宁酶活力测定方法。     

P物质对大鼠DRG神经元胞体膜的作用

本文在大鼠ＤＲＧ神经元标本上应用细胞内记录,以确定ＳＰ对ＤＲＧ细胞的膜反应及其可能的离子机制。实验所测ＤＲＧ细胞静息膜电位为－５８．９±８．２ｍＶ（Ｘ±ＳＥ,ｎ＝８１）。传导速度：Ａ_（α／β）细胞为２０．４±４．８ｍ／ｓ（Ｘ±ＳＥ）,范围１４．１－２８．７ｍ／ｓ（４７／６０）;Ａδ及Ｃ类细胞为９．８±５．２ｍ／ｓ,范围１．２－１３．７ｍ／ｓ（１３／６０）。浴槽滴加ＳＰ（１０￣（－７）－３×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）在大多数细胞可引起明显的膜去极化反应（５６／６０）。少数细胞对ＳＰ无反应（４／６０）。在ＳＰ去极化期间膜电导值有所增加,从平均值２．７２×１０￣（－８）ｍｈｏ增加２４．６％（ｎ＝３）。所测逆转电位值在＋４０－＋５０ｍＶ之间（ｎ＝３）。浊流平衡液（ＢＳＳ）中ＮａＣｌ以氯化胆碱置代,或用含ＴＴＸ（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）的ＢＳＳ灌流,可使ＳＰ－去极化幅值大大减小但不能完全消除。而高（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）和低（０ｍｍｏｌ／Ｌ）Ｃａ￣（２＋）的ＢＳＳ灌流时,使ＳＰ－去极化幅值相应的增加和降低。用含１０￣（－４）ｍｏｌ／ＬＣｄ￣（２＋）及１０￣（－２）ｍｏｌ／ＬＴＥＡ的ＢＳＳ灌流,均使ＳＰ－去极化明显减小。