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用甲睾酮片饲喂 2 ~ 4 龄赤点石斑鱼 (Epinephelus akaara) , 6 周后 90% 以上的雌鱼性逆转为功能性雄鱼 . 运用抑制性差减杂交技术 (SSH) ,结合 SMART cDNA 合成和 RACE-PCR 方法,从性反转雄鱼性腺中克隆到钙调蛋白基因 (ECaM). 该基因 cDNA 全长为 582 bp ,开放阅读框长 450 bp ,编码的蛋白质由 149 个氨基酸组成, 5 ′端非编码区 74 bp , 3 ′端非编码区 58 bp. 虚拟 RNA 印迹表明, ECaM 在性反转雄鱼性腺中表达,而在正常雌鱼性腺中表达微弱 . 各种组织的半定量 RT-PCR 显示, ECaM 在脑、心、肝、脾、肾都有转录,在精巢和下丘脑中表达水平较高,而在肌肉中表达甚弱 . 性反转不同时期性腺的半定量 RT-PCR 及蛋白质印迹表明,性逆转过程中性腺里 ECaM 的表达量逐渐增加 . 上述结果提示钙调蛋白可能在赤点石斑鱼性逆转过程中发挥着作用, ECaM 可能是促使石斑鱼由雌向雄转变的重要功能基因之一 . 相似文献
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一株Sanguibacter sp.C4产几丁质酶基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
Chi58是Sanguibacter sp.strain C4产生的一种胞外几丁质酶。通过chiA的特异性PCR引物探测到菌株C4中存在几丁质酶,并将扩增到的几丁质酶基因片段(chiA-F)克隆、测序后,提交GenBank数据库进行同源性搜索。对从GenBank中获得的高同源性序列进行比对,并根据保守区域设计2对PCR引物进行嵌套PCR,扩增出Chi58基因的开放阅读框(ORF)。测序结果表明该酶的ORF由1692个核苷酸组成,编码563个氨基酸,在N端有23个氨基酸的信号肽,其成熟蛋白的分子量应为58.544kDa。对其推导氨基酸的序列分析表明Chi58与沙雷氏菌的几丁质酶(如徂)有高度同源性(88.9%-99.6%),其结构主要包括信号肽序列、PKD结构域和18家族糖苷水解酶结构域。将该基因克隆到pET32a(+)载体构建重组质粒pChi58,转入大肠杆菌BL-21(DE3)进行融合表达。经IPTG诱导后,可见分子量约81.1kDa的融合蛋白的表达。 相似文献
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均匀设计法对产几丁质酶细菌C4发酵条件的优化 总被引:12,自引:3,他引:9
系统研究了碳源,氮源,起始pH值、培养基装量、培养温度和时间等因素对细菌C4产几丁质酶的影响。结果表明,碳、氮源分别以胶体几丁质、KNO和蛋白胨最好;在起始pH值7.6—8.5,培养基装量为三角瓶体积的12%,培养温度28℃,振荡培养(180r/min)5d时最有利于几丁质酶的产生。在此基础上通过均匀设计法优化了发酵培养基配方。优化后的培养基配方为:胶体几丁质1.5%,蛋白胨0.55%,KNO3 0.3%,MgSO4 0.09%,Tween80 0.005%。在该条件下,几丁质酶活力达2.68U/mL,比在原基础培养条件下的酶活力提高90.1%。 相似文献
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