革兰阴性杆菌内毒素诱导肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-163A3凋亡作用的研究

目的：研究革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌以及革兰阴性杆菌（GNB）的内毒素对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-163A3的杀伤作用与诱导细胞凋亡作用。方法：利用美国B-D公司生产的FACS-Cal-ibur流式细胞仪检测与革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阴性杆菌内毒素共育后的肿瘤细胞凋亡。结果：革兰阳性球菌产生凋亡不明显,革兰阴性杆菌、标准细菌的内毒素分别共育后的肿瘤细胞在G0/G1峰前,均产生一个典型的凋亡峰-AP峰。结论：革兰阴性杆菌的内毒素是对肿瘤细胞的诱导凋亡作用的主要成分。     

端粒酶RNA反义基因对肝癌细胞的影响

用RT-PCR的方法钓取端粒酶RNA基因的cDNA,并将其反向插入到逆转录病毒载体pLNCX上,构建hTR基因的反义表达质粒。将质粒经脂质体介导转染人肝癌SMMG-7721细胞中表达。结果表明hTR反义基因的表达有效地封闭或抑制肝癌细胞的端粒酶活性,抑制细胞的生长和增殖,延长细胞的倍增时间并促进细胞凋亡。     

降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法

为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩增 .分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的 6个单克隆质粒DNA进行序列分析 ,并通过GenBank BLAST数据库进行序列的同源性比较 ,以Northern杂交予以来源确认 .自 72 0余条扩增条带中共选出 2 8条差异条带 .序列分析及同源性比较表明 ,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段 ;而随机选择的 6个TA克隆质粒DNA中 ,有 4个为同一已知基因片段 ,一个为另一已知基因片段 ,一个为一可能的新基因片段 .同源性比较表明 ,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的 6个片段不具同源性 .结果表明 ,mRNA差异显示条带可能由 1条以上分子量相似的片段构成 ,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,是导致出现假阳性片段的原因之一 .将PCR产物进行TA克隆 ,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,可能是解决此问题的一种较好方法 .     

葡萄球菌中毒性休克毒素的分离纯化及其体外抗肝癌活性分析

采用固体膜进行TSST-1的产毒培养,然后从金葡菌产毒产物中经CM纤维素离子交换层析、SephadexG-75、Sephacryl S-200三步纯化,成功地获得了纯度为95.3％的毒素,SDS-PAGE呈现单一条带,与其对应抗血清有免疫学特异反应,不含核酸、糖和其它肠毒素等物质。与同类方法相比,该方法步骤少、快速、简便。对其体外抗肝癌活性进行了分析,首次证明即使TSST-1的浓度为10^-8g/L仍然对人肝癌细胞有显著抑制作用。     

端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL—7404人肝癌细胞端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导

Telomerase activity was detected in all of four human hepatoma cells but absent in normal liver tissue. Telomerase activity of BEL-7404 human hepatoma cells was inhibited effectively by antisense oligonucleotide to telomerase RNA component at final concentration of 1 mumol/L, whereas sense and missense oligonucleotides have no effects on its activity. The inhibition of telomerase activity was weakened, as the concentration of antisense oligonucleotide decreased. Treating BEL-7404 human hepatoma cells 96 hours continuously by the antisense oligomers at final concentration of 5 mumol/L, the morphology of treated cells changed and apoptosis percent of the cells increased markedly.     

粘中着斑激酶在TNF—α和环己亚胺协同诱导人肝癌细胞SMMC—7721凋亡中的作用

探讨了粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）在TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721细胞凋亡中的作用,利用转染FAK反义质粒来特异性降低SMMC－7721细胞的FAK含量,用Western杂交的方法来检测蛋白激酶B（PKB）的蛋白含量,以及用流式细胞仪的方法来检测细胞的凋亡。研究发现TNF－α本身并不能诱导SMMC－7721细胞发生凋亡,而只有当用环己亚胺和TNF－α协同处理时才发生凋亡。在TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡过程中,PKB蛋白含量的降低,提示PKB的蛋白水平与凋亡的发生密切相关。当用FAK反义质粒降低SMMC－7721细胞的FAK含量（约降低了60％）后,细胞对TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡的敏感性在用低剂量TNF－α处理的情况下增加,而在高剂量TNF－α和处理的情况下降低,相应地,在低剂量TNF-α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的PKB含量低;而在高剂量TNF－α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的要高。结果提示,FAK对TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721凋亡的过程有一双相作用,并且该过程可能与PKB有关。     

影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素研究

探讨影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素及其意义。采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型。应用光镜,免疫组织化学,核酸原位分子杂交和细胞图像分析技术,检测肝癌细胞转化生长因子β（TGFβ）,血管内皮生长因子（VEGF）,c-fosmRNA的表达与癌周肥大细胞（MS）数量变化的相关性。结果显示肝癌细胞浆中TGFβ,VEGF和c-fosmRNA呈阳性表达,其中TGFβ,c-fosmRNA表达的强度与癌周MC数量变化呈平行关系。而VEGF表达的强度与癌周MC数量变化无关。结果表明：肝癌细胞通过释放TGFβ并通过激活原癌基因（c-fos)以旁分泌方式或癌基因产物影响癌周MC的数量。     

人肝癌细胞系HHCC中CD147和MMP—2共存了的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法结合激光共聚焦显微镜观察了CD147分子和MMP-2在人肝癌HHCC细胞系中的表达,结果表明在HHCC细胞中CD147分子和MMP-2均呈免疫反应阳性,CD147反应位于核膜和核周胞质,MMP-2反应位于胞浆。     

利用流式细胞术研究大肠埃希菌对肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—16A3的作用

利用小鼠肝癌腹水瘤细胞Hca-F25/CL-16A3,运用流式细胞技术研究了大肠埃希菌对肿瘤细胞的作用,对细胞DNA含量的影响以及诱导细胞凋亡的作用,结果表明：大肠埃希菌在直接希伤肿瘤细胞的同时,还可以影响细胞DNA的含量,并可诱导细胞发生调亡。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过靶向miR-200c诱导DNA异常甲基化

乙型肝炎病毒x (hepatitis B virus x,HBx)蛋白是导致肝癌(hepatocellular Carcinoma,HCC)的重要因素.但HBX在HCC形成过程中表观遗传机制尚有待阐明.本研究发现microRNA-200c (miR-200c)在过表达乙型肝炎病毒的HCC中下调,并且其直接靶向DNA甲基转移酶3A (DNA methyltransferase 3A,DNMT3A).此外,miR-200c和DNMT3A在HB诱发的肝癌组织中呈现负相关.乙型肝炎病毒诱导miR-200c下调,进而引起DNMT3A表达上调,导致细胞中肿瘤相关基因的启动子超甲基化.我们对乙型肝炎病毒诱导的肝癌表观遗传学改变进行了进一步研究,并提出一种基于miRNA的靶向治疗乙型肝炎病毒相关肝癌的潜在方法.