端粒酶RNA反义基因对肝癌细胞的影响

用RT-PCR的方法钓取端粒酶RNA基因的cDNA,并将其反向插入到逆转录病毒载体pLNCX上,构建hTR基因的反义表达质粒。将质粒经脂质体介导转染人肝癌SMMG-7721细胞中表达。结果表明hTR反义基因的表达有效地封闭或抑制肝癌细胞的端粒酶活性,抑制细胞的生长和增殖,延长细胞的倍增时间并促进细胞凋亡。     

植物乳杆菌培养上清对不同血清型沙门氏菌的抑制效果及作用机理

【目的】探究植物乳杆菌培养上清(Lactobacillus plantarum culture supernatant,LPC)对3种血清型沙门氏菌猪霍乱(Salmonella cholerae,SC)、肠炎(Salmonella enteritidis,SE)和鸡白痢(Salmonella pullorum, SP)的生长和致病性的抑制作用效果及机理。【方法】将2%LPC与3种沙门氏菌分别共培养后,采用比浊法及牛津杯抑菌圈试验检测沙门氏菌生长情况及LPC中的主要抑菌物质,使用实时荧光定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)探究沙门氏菌致病性相关基因表达水平,最后通过结晶紫染色法检测沙门氏菌的生物被膜。【结果】2%LPC能够显著抑制3种沙门氏菌的生长,其作用效果与庆大霉素(gentamicin, GM)相近且对SE的生长抑制效果优于GM,其主要抑菌物质为有机酸;2%LPC对3株沙门氏菌SPI-1编码的主要毒力基因(InvA、InvF、SopE、SopB、SipB、HilA和SipA)、SPI-2毒...     

蛇毒治疗去痛片成瘾（附3例报告）

去痛片为普通止痛药 ,由氨基比林、非那西丁、咖啡因、苯巴比妥组成 ,其中氨基比林、非那西丁解热镇痛 ,咖啡因为中枢兴奋剂与前者配合增强疗效。苯巴比妥具镇静、催眠作用 ,减轻疼痛 ,改善不良心境。但该药长期滥用极易成瘾 ,产生耐受性 ,影响人的生理及生活方式 ,作者应用蛇毒治疗去痛片成瘾 3例 ,疗效肯定。现报告如下。1　病例资料　　例 1　患者 ,男 ,2 1岁 ,战士 ,反复依赖去痛片 1 0月余 ,1 0月前新兵强化训练过程中 ,精神紧张 ,腹部不适 ,到连卫生队诊治 ,予口服去痛片 ,每天 2片 ,5天后腹部不适感消失 ,精神振奋 ,能承受一定的训练…     

阳荷根乙醇提取物的生物活性研究

为测定阳荷Zingiber striolatum根75%乙醇粗提物及其不同浓度乙醇梯度洗脱所得样品的体外抗氧化、抑硝化、抗肝癌等生物活性,采用清除体外DPPH、ABTS自由基两种方法考察抗氧化活性;用体外清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺合成两种方法比较抑硝化能力;用MTT方法比较其对人肝癌细胞株HepG2和SMMC7721肝癌细胞的相对存活率。结果显示,不同乙醇浓度梯度洗脱所得样品的抗氧化活性整体上比总的75%乙醇粗提物活性好。ZC-Ⅱ(75%乙醇粗提物用25%乙醇洗脱的样品)抑硝化效果最好,清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺合成的IC50值分别为8.198 mg·mL^-1、1.270 mg·mL^-1。ZC-Ⅴ(75%乙醇粗提物用95%乙醇洗脱的样品)的抗肝癌效果达到95.6%,并存在剂量依赖效果。证实不同乙醇浓度洗脱所得样品的生物活性高于总粗提物活性,且生物活性部位主要集中在小极性部位。     

腹腔镜结肠癌根治术与传统开腹结肠癌根治术的临床对比分析

目的:探讨腹腔镜结肠癌根治术与传统开腹结肠癌根治术疗效的差别。方法:随机将86例结肠癌患者分为两组,各43例。腹腔镜组采用腹腔镜结肠癌根治术,传统开腹组采用开腹结肠癌根治术,观察两组患者手术情况及术后并发症情况。结果:腹腔镜组手术时间、淋巴结清扫数与传统开腹组比较无显著差异(P0.05);腹腔镜组术中出血量少于传统开腹组、住院时间短于传统开腹组(P0.05);腹腔镜组排气时间短于传统开腹组(P0.01),两组并发症发生率差异有统计学意义(P0.01)。结论:腹腔镜结肠癌根治术具有术中出血量少、创伤小、术后恢复快、住院时间明显缩短等特点,可达到传统开腹手术的效果,值得广泛应用。     

MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究

目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的产量和质量。方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂Cycloheximide、溶酶体抑制剂Leupeptin、蛋白酶体抑制剂MG-132,验证TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞的降解途径;免疫印迹(Western blot)方法检测在细胞内TNFR-Fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测分泌表达的TNFR-Fc融合蛋白的含量。Protein A亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(HPLC)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的L929细胞毒作用来检测纯化的TNFR-Fc蛋白的活性。结果:TNFR-Fc在CHO细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达TNFR-Fc的CHO细胞培养过程中添加50μmol/L MG-132,可以使TNFR-Fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加。结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在CHO细胞中的表达量提供了现实依据。     

原子力显微镜研究多西他赛对人肺腺癌A549细胞的作用机制

利用原子力显微镜(AFM)研究了化疗药物多西他赛对肺腺癌细胞A549的作用机制。选取了不同浓度多西他赛作用下的A549细胞,观察和分析了多西他赛对A549细胞形貌信息和生物力学特性的影响。结果表明细胞的峰谷差和超微结构的平均粗糙度随着药物浓度增加而减小,表面粘附力随着药物浓度增加而增大。该结果对AFM可作为一种利用纳米量级分辨率进行药物药效评估的工具进行了佐证。     

福建省枳椇种质资源遗传多样性RAPD分析

建立和优化枳椇Hovenia acerba的RAPD反应体系,并对福建省12个种源地35份枳椇材料进行遗传多样性及亲缘关系研究。利用筛选出的10个RAPD引物共检测基因组DNA中193个位点,其中多态性位点161个(83.42%)。供试材料观测等位基因数(Na)1.8342、有效等位基因数(Ne)1.4155,Nei’s基因多样性(H)0.2493,Shannon多样性指数(I)0.3822。以遗传相似系数0.754为阈值,可将35份枳椇分成五大组。RAPD标记可有效揭示福建省枳椇种质资源的遗传多样性,所测枳椇种质资源遗传多样性丰富,极具开发利用价值。     

大花蕙兰原生质体分离纯化

以大花蕙兰的叶片、根为试材,分析不同酶液组合、摇床转速、酶解温度、材料酶液比、酶解时间等因素对其原生质体分离的影响。大花蕙兰叶片、根经过90 min质壁分离预处理后,在温度28 ℃,于摇床上50 r·min^-1振荡酶解6 h,叶、根分别在酶解液为纤维素酶2.0%＋果胶酶0.1%＋离析酶0.2%＋崩溃酶0.2%和纤维素酶2.0%＋果胶酶0.3%＋离析酶0.1%＋崩溃酶0.1%中得到最高产量的原生质体。     

非洲马铃果4种吲哚类生物碱的体外抗肿瘤效果

为比较非洲马铃果Voacanga africana中长春胺、冠狗牙花定碱、老刺木胺、伏康京碱等4种吲哚类生物碱的体外抗肿瘤活性,采用MTT法分析其对SKOV3、BEL7402、SMMC7721、Changliver四株细胞株增殖的抑制作用,并通过AO/EB双染观察细胞凋亡的形态变化。结果显示,4种吲哚生物碱对四株细胞株的增殖抑制现象存在剂量依赖关系。50 μg·mL-1老刺木胺对四株细胞株的生长抑制率均达95%以上;相同浓度下,伏康京碱仅对BEL7402、Changliver的抑制率超过78%;冠狗牙花定碱仅对Changliver有超过50%的增殖抑制率;长春胺对四株细胞株的增殖抑制效果不明显。经AO/EB法染色后,四株细胞株在12.5 μg·mL-1老刺木胺的作用下呈现细胞核皱缩、浓聚和偏移的现象,说明老刺木胺具有明显诱导细胞凋亡的作用;50 μg·mL-1伏康京碱仅对BEL7402和Changliver具有一样的效果,另两种生物碱作用的细胞株并未见有明显的细胞凋亡现象。MTT法和AO/EB双染法表现结果一致。老刺木胺和伏康京碱两种生物碱能够诱导卵巢癌细胞和人肝细胞凋亡从而发挥抗肿瘤作用,长春胺和冠狗牙花定碱作用效果相对较弱。