抗凋亡策略在细胞大规模培养中的应用

随着阐明凋亡发生的分子机制,现在可运用多种方法阻止细胞凋亡的发生。在大规模细胞培养过程中应用这些方法可促进细胞的存活,实现细胞大规模高密度培养,从而提高细胞生产有价值生物技术产品的能力。     

心脏对异丙肾上腺素反应性与心搏间期近似熵的关系

在正常新西兰兔测得搏间期近似熵较大,阿托品阻断后心搏间斯近似熵下降的基础上,观察兔心脏在上述两种状态下对异丙肾上腺素反应的差距。结果显示：在正常时,心脏对0．2μg/kg,0．4μg/kg,0．6μg/kg,异丙肾上腺素的反应性均强于应用阿托品后,并有显著差异P＜0．05,待阿托品作用部分消除后,心脏对异丙肾上腺素的反应性也部分恢复。表明心搏间期复杂性越大对异丙肾上腺素反应越敏感,支持“非周期敏感”是可兴奋细胞、组织或器官基本反应特征的假说。     

人肝癌细胞系HHCC中CD147和MMP—2共存了的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法结合激光共聚焦显微镜观察了CD147分子和MMP-2在人肝癌HHCC细胞系中的表达,结果表明在HHCC细胞中CD147分子和MMP-2均呈免疫反应阳性,CD147反应位于核膜和核周胞质,MMP-2反应位于胞浆。     

乙醇诱导杂交瘤细胞凋亡的检测

为建立杂交瘤细胞凋亡检测模型,在乙醇诱导下,采用荧光染色、MTT等方法检测H18杂交瘤细胞凋亡时的形态学及增殖活性变化,并用流式细胞仪对其进行定量分析,夹心ELISA检测IgG抗体分泌的变化情况。结果发现5lOmmol／L乙醇作用5～6h的凋亡诱导效果最为明显,在诱导条件下,杂交瘤细胞的活细胞数显著下降,凋亡细胞比例较高。抗体浓度明显下降,与乙醇浓度呈负相关,但与细胞增殖活性无明显的线性关系。故以此为凋亡检测模型,可为后续抗凋亡细胞株的建立与筛选研究提供初步的实验基础,并为乙醇对IgG型抗体分泌的影响研究提供了可能的实验模型。     

DMSO抑制杂交瘤增殖促进抗体的分泌

利用DMSO促进杂交瘤细胞分泌单克隆抗体,并对其作用机制进行了研究。结果表明在杂交瘤细胞对数生长后期添加0.6%浓度的DMSO与对照相比可提高抗体的产量2倍;流式细胞仪检测细胞周期表明此时837%的细胞处于G1期;免疫印记结果显示在有DMSO作用下杂交瘤细胞P27 蛋白表达显著升高。因此,DMSO 可通过促进P27蛋白的表达,抑制杂交瘤细胞的增殖,从而提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。对DMSO进一步在高密度大规模培养杂交瘤细胞中的应用具有重要意义。     

杂交瘤细胞培养中摄氧速率(OUR)的在线检测及其与细胞生长及代谢的关系

在批式及灌流培养条件下研究了杂交瘤细胞在无血清培养基中的生长、代谢情况与氧消耗的关系。应用动力学方法在线进行OUR的检测,同时离线取样检测其他参数。结果发现OUR与谷氨酰胺的消耗、抗体的生成及活细胞密度间有明显的相关关系,进一步的分析还发现在对数生长期,OUR与活细胞密度间具有良好的线性关系,qOUR(0.103±0.028)×10^-12mol/cell/h,可以通过它来进行细胞密度的在线检测。并通过以ΔOUR=0时刻作为灌流调整点进行连续灌流培养的初步实验验证了OUR作为培养过程反馈控制参数的可能性。     

H18杂交瘤抗凋亡能力的改造

利用PCR从pGEMTbcl-X_L质粒中获得bcl-X_L基因,构建真核表达载体pEF-bcl-X^{L,脂质体法转染杂交瘤细胞,G418筛选稳定表达株,Western blotting检测目的蛋白表达,流式细胞仪检测Bcl-X_L提高杂交瘤抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。 将构建的编码鼠bcl-X_L基因的真核表达载体pEF-bcl-X_L,转染H18细胞后,获得稳定的表达株细胞;稳定表达Bcl-X_L的细胞具有抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。鼠bcl-X_L基因在杂交瘤细胞中稳定表达,提高了杂交瘤抗凋亡的能力,对高密度大规模培养杂交瘤细胞具有重要意义。}     

人肝癌细胞系HHCC中CD147和MMP-2共存的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法结合激光共聚焦显微镜观察了CD147分子和MMP-2在人肝癌HHCC细胞系中的表达.结果表明在HHCC细胞中CD147分子和MMP-2均呈免疫反应阳性,CD1 47反应位于核膜和核周胞质,MMP-2反应位于胞浆.