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重组工程是近几年发展的新型遗传工程技术. 以 PCR 扩增的线性低拷贝质粒 pACYC184 为载体,用 Gap-repair 方法从大肠杆菌 DY330 染色体上直接体内亚克隆了包括 Red 重组酶基因在内的长约 6.7 kb 的基因序列,构建了 pYM-Red 重组质粒. 在宿主菌 W3110 体内进行了染色体上 galk 基因的敲除,验证了 Red 重组酶的生物功能,并确定了影响 pYM-Red 重组效率的诱导时间和线性 DNA 片段用量. 在 42℃诱导 10 min 和线性 DNA 打靶分子浓度为 300 ng 时, pYM-Red 的重组效率可达到大约每 4 000 个电转存活细胞中有 1 个重组阳性克隆,分别比 pKD46 和 pBR322-Red 系统高 5~6 倍. 相似文献
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Smads基因功能的研究进展 总被引:18,自引:0,他引:18
转化生长因子 -β( TGF-β)超家族通过调节细胞的增殖、分化、移行和凋亡而在脊椎动物发育过程中起重要的作用 . SMAD家族是一类新发现的 TGF-β信号的细胞质内介导者 ,它们可将TGF- β信号直接从细胞膜转导入细胞核内 .受体激活的 SMADs被特导性的细胞表面受体磷酸化后 ,与通用介导分子 SMAD4相互作用形成异源三聚体 ,转移至细胞核内并激活靶基因的转录 .抑制型 SMADs通过负反馈途径阻断或减弱 TGF- β信号 .SMADs通过与 TGF- β配体应答的启动子序列及其它转录因子和辅助活化因子相互作用而调节转录 .通过同源重组在小鼠中定位敲除Smads基因的研究已经开始揭示 SMADs分子在脊椎动物发育过程中的功能 . 相似文献
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CFA/1结构基因的核苷酸序列测定及其重组克隆的电镜观察 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对编码cFA/1亚单位的核苷酸序列进行了测定。根据DNA序列推导,CFA/1的蛋白质序列由170个氨基酸组成,其中23个氨基酸为前导序列即信号肽。发现有3个位置上的氨基酸与由蛋白质测序的结果不同。第37位氨基酸是丙氯酸而不是缬氨酸,第76位的天冬酰胺由天冬氨酸所取代,第97位的氨基酸不是丙氨酸而是丝氨酸。cFA/1亚单位具有非常强的疏水性,47%的氨基酸为疏水氨基酸。cFA/l结构基因有典型的SD序列。CFA/1启动子有-10序列TACAAT,但没有发现 -35序列。CFA/1结构基因的G/c比例占4 0%左右。电镜观察结果证实,受体菌E.Coli C600本身没有菌毛,然而一旦转化进CFA/1重组质 粒,在其菌体表面则生长有浓密的菌毛。 相似文献
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采用无毒的鼠伤寒沙门氏菌sR一1l△Cya,△Crp,△asd菌株作为宿主菌,选择相应的asd+表达载体构建了含大肠杆菌肠毒素B亚基基因(toxB)的重组质粒,并通过两次转化引入宿主菌,构成了平衡致死的重组体。特异性的测定表明,这种无抗药性的杂合菌株能较高水平地表达LT—B抗原,可望成为预防ETEC腹泻和相应的沙门氏菌病双价口服活疫苗的研究基础。 相似文献
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心血管疾病特别是急性心肌梗塞是严重威胁人类健康的疾病,近十多年来,大量研究溶栓治疗药物的作用。溶栓剂可分两类: 1.非特异性,对血栓或循环中纤溶系统均有作用。如链激酶(SK)、尿激酶(UK)、乙酰化纤溶酶-链激酶激活剂复合物(APSAC)、蛇毒溶栓剂(包括去纤酶、溶栓酶和抗栓酶)和蚓激酶(蚯蚓产物)等。 2.选择性作用于血栓部位的纤维蛋白, 相似文献
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