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大肠杆菌肠毒素的基因融合及其免疫原性的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
应用重组基因工程技术,将热敏肠毒素B亚基(LT-B)基因与含有部分前体的耐热肠毒素(pro-ST)基因融合在一起,构建了表达LT-B/pro-ST融合蛋白的重组质粒.该融合蛋白不仅保持结合神经节苷脂(GM1)的能力,而且具有热敏肠毒素和耐热肠毒素的抗原性.乳鼠实验证明,融合蛋白虽然含有野生耐热肠毒素,但不具耐热肠毒素的生物毒性.腹腔免疫和鼻饲免疫均能激发产生抗ETEC两种肠毒素的抗体. 相似文献
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为了进一步验证载体pCSB136和pCSX72作为表面呈现载体的可行性,化学合成脊髓灰质炎病毒C3表位和C-myc十肽有位的基因片段,并插入到上述载体的相应位点间,采用全菌PCR筛选到正向插入的重组子,全细胞ELISA和电镜观察显示,重组蛋白以杂和菌毛的形式得到了表达,并保持CS3和外源位的抗原性,表明脊髓灰质炎病毒C3表位和C-myc十肽捕位在细菌表面得到了表达,证实载体pCSB136和pCSX72可用于外源表位的呈现,为构建基因工程活苗疫苗奠定了基础。 相似文献
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大多数真核生物mRNA的翻译起始都符合Kozak提出的扫描学说,即40s小亚基携带相应的起始因子进入mRNA的5′末端,沿mRNA线性滑动,至第一个AUG起始密码处与60s大亚基结合,形成第一个肽键,然后进入肽链延伸阶段。本课题组所构建的重组质粒pMM 5065含人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA。序列分析证明,该质粒中t-PA起始密码子ATG的5′端序列为:AAGCTTGCATGCCTGCAGGTC ATG GAT……,可见转录后t-PA mRNA起妈密码子AUG的5′端还有一个AUG三联体(即上游AUG),形成一个较长的与t-PA框架不同的阅读框 相似文献
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已经从melanoma细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA,在此基础上用双脱氧终止法测定了t-PAcDNA编码区全序列及3′非编码区部分序列,并发现与Pennica等发表的t-PAcDNA序列相比,有两处差异,其一是第1725位核苷酸残基为C而非A,并使此处序列与Pennica序列相比新产生一个StyI切点,但由于差异发生在密码子第三位,没有引起编码的氨基酸变化;其二是第1777位核苷酸残基(终止密码子后第4位核苷酸残基)为T而非G,使与终止密码子相隔3个核苷酸残基处产生了一个新的TGA,与Pennica序列相比此处的BstNI切点也消失了。 相似文献
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利用宿主-载体平衡致死系统构建志贺氏菌3价疫苗候选株 总被引:1,自引:0,他引:1
选择福氏2a志贺氏菌疫苗株T32为受体菌,通过基因同源重组交换技术,对其染色体asd基因进行定位突变,使之不能在LB培基上生长;同时利用链球菌asd基因构建Asd+的无抗药性互补载体,两者组成1套T32宿主载体平衡致死系统.进一步应用该系统克隆和表达了具有重要免疫保护功能的宋内I相O抗原基因和志贺氏毒素B亚单位基因(stxB),构建成福氏2a-宋内-StxB3价菌苗候选株FSD0l.结果显示:该菌株遗传稳定,重组质粒不需用抗生素选择,能有效表达3价抗原和产生针对上述3种野生型毒株的免疫保护反应. 相似文献
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抑瘤素M(onecostatinM,OSM)是一种多功能的细胞生长调节因子.从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA,采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA;将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中,筛选三个阳性克隆进行序列分析,与国外报导序列完全一致;将抑癌素M的cDNA克隆到质粒pBV220后再转化DH5a进行模拟表达,SDS-PAGE分析表明有OSM表达,表达量约占细菌总蛋白5%,经过初步纯化的OSM能明显抑制A375细胞的生长. 相似文献
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CS3菌毛可以作为异源抗原决定簇的表达载体 总被引:2,自引:0,他引:2
CS3是肠毒素源性大肠杆菌的菌毛蛋白 ,是一种很强的免疫原 .利用CS3菌毛作为异源抗原决定簇载体 ,在计算机分析预测CS3亚基的抗原表位区、二级结构的基础上 ,运用PCR定点突变在CS3亚基结构基因中引入了SacⅡ酶切位点序列 ,插入霍乱毒素B亚基抗原表位CTP3的DNA序列 ,构建了表达CS3/CTP3的重组菌株 .电镜和免疫电镜观察证明 ,CS3/CTP3以杂合菌毛的形式存在于菌体表面 .SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示了CS3/CTP3杂合蛋白的存在 .口服和腹腔注射免疫Balb/c小鼠 ,该重组菌株可诱发抗CS3和抗CTP3的双重免疫应答 .结果表明CS3可以作为表达异源抗原决定簇的表达载体 ,可望成为研制口服粘膜免疫多价疫苗的新型系统 相似文献