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1.
为获纯度较高的t-PA抗原,对本组构建的表达t-PA的CHO工程细胞的无血清培养上清进行SDS-PAGE,铜染色,从中提纯少量抗原t-PA,获得高纯度的产物,蛋白回收率达88%。中和抑制实验表明,回收的目的蛋白能完全被t-PA抗血清所抑制。  相似文献   
2.
t-PA突变体工程细胞株FSGGI48形态与其亲代细胞CHO-dhfr相似呈多角形,类似上皮细胞。在MTX加压至5×10~(-6)mol/L时,少数细胞形态略变瘦长,但仍呈多角形,因此该工程细胞株形态正常。抗体中和抑制试验及纤维蛋白板80℃加热试验显示,FSGGI48细胞表达产物与st-PA的活性均能被抗t-PA抗体所抑制,而胰酶的活性则不被抑制,且二者在80℃加热的纤维蛋白板上均不产生溶解圈,胰酶则产生溶解圈,由此可知,该细胞株表达产物为特异的rt-PA产品。细胞无血清培养上清经FA-PA检测,亚克隆株表达水平为4000IU/10~6细胞/24h。分别测定冻存3个月后复苏和体外传代3个月以上细胞的表达水平,结果显示部分亚克隆细胞株表达水平下降,多数仍为3000-4000IU/10~6细胞/24h,说明细胞株稳定性好。裸鼠试验表明,该工程株活细胞、细胞DNA、纯化的细胞表达产物均无致瘤性。支原体检查结果为阴性。染色体分析显示,FSGGI48细胞与其亲代细胞(CHO-dhfr细胞)染色体数目相同均为20条,但均有不同程度不同类型的畸变。CHO-dhfr细胞畸变率为6%。该工程细胞的畸变率为15%-18%,在允许范围内。结果证明,t-PA突变体细胞株FSGGI48为性能优良的工程细胞株。  相似文献   
3.
为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。  相似文献   
4.
为了得到t—PA组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达,将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除.构建了FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线性化后.采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr-)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞,混合加压.挑选克隆。在1×10-7mol/L MTX压力下。获得表达水平达1 500~2500Iu/106细胞·24h的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好.倍增时间约为36h.且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。  相似文献   
5.
体内存在两种纤溶酶原激活剂(plasminogen activator, PA):血液中生理性的组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及尿中的尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)。它们通过将纤溶酶原转变成有活性的纤溶酶而启动纤溶过程使血栓溶解。目前模拟体内纤溶过程以纤维蛋白为底物的PA物质活性测定方法有纤维蛋白溶圈法和发光分析法,但这两种方法不能  相似文献   
6.
鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的人源化分子   总被引:1,自引:0,他引:1  
产生免疫原性的残基主要是位于蛋白表面的暴露残基,为了消除鼠抗体对人的免疫原性,利用表面再塑的方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体链Fv片段进行了人源化分子设计。首先确定了鼠及人Fv片段的表面残基,在此基础上分析了鼠与人抗体Fv表面残基的差异,将存在差异的鼠抗体表面残基换成人的,从而实现鼠抗体的人源化。  相似文献   
7.
已经从melanoma细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA,在此基础上用双脱氧终止法测定了t-PAcDNA编码区全序列及3′非编码区部分序列,并发现与Pennica等发表的t-PAcDNA序列相比,有两处差异,其一是第1725位核苷酸残基为C而非A,并使此处序列与Pennica序列相比新产生一个StyI切点,但由于差异发生在密码子第三位,没有引起编码的氨基酸变化;其二是第1777位核苷酸残基(终止密码子后第4位核苷酸残基)为T而非G,使与终止密码子相隔3个核苷酸残基处产生了一个新的TGA,与Pennica序列相比此处的BstNI切点也消失了。  相似文献   
8.
序列分析中发现tPAK2编码区结构基因中存在一段反转重复序列,富含G、C。利用计算机预测tPAmRNA二级结构证明tPAmRNA在此处可以形成△Gm=-25.5KCal/mol的发夹结构。本研究利用定点突变技术消除了这段反转重复序列,在大肠杆菌中进行了消除前后tPA转录和翻译水平的比较。结果表明消除之后,细菌总RNA中tPA特异mRNA含量减少,细菌表达产物中tPA蛋白占破菌沉淀物的百分比却基本不变。提示大肠杆菌中基因编码区mRNA二级结构一般不构成转录的终止,但有利于mRNA的稳定性,对翻译表达无影响。  相似文献   
9.
进一步对FS54—2、—3、—4、—5、—6、—7及—7b等双价减毒株的侵袭力、毒力、免疫原性与免疫保护性及遗传稳定性等进行了研究,证明双价减毒株仍保持了入侵肠上皮细胞的能力;小动物实验安全低毒;有很好的免疫原性,对小鼠有很好的双重免疫保护性。  相似文献   
10.
植物种多样性对生态系统功能的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用8种1年生植物,利用室外盆栽方法构建的植物群落对物种多样性与群落生产力、杂草入侵性之间的关系及其潜在的作用机理进行了研究.结果表明,各物种单播时其生产力和抗杂草入侵能力都有较大差异.物种多样性与群落生产力之间不存在线性关系,而呈现单峰格局关系,即在一定范围内(本研究为4种),物种多样性对生产力增加有促进作用,超过该范围,物种多样性增加,群落生产力不再增加.但群落生产力和物种多样性均与杂草入侵量之间呈显著负相关关系.相对产量总和(RYT)分析表明,资源互补效应是本研究中所观察到的多样性-生产力、多样性-入侵性及生产力-入侵性关系的主要作用机理.  相似文献   
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