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昆虫细胞的大规模培养 总被引:3,自引:0,他引:3
昆虫细胞的大规模培养李文青,肖成祖(北京军事医学科学院生物工程研究所,)昆虫细胞培养的鼻祖是德国人forhardBendict(1878—1958)[1],他在1915年发表了有关昆虫细胞培养的第一篇文章[2]。早期,昆虫细胞的培养是为了进行昆虫的生... 相似文献
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根据尿激酶原与尿激酶一级结构的区别并结合计算机分子模拟,设计合成了包括尿激酶原Thr152-Glu163肽段的13肽,然后与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,用BI林巴细胞融合技术获得了3种尿激酶原特异性单克隆抗体,这3种抗体仅与尿激酶原和合成多肽反应 ,而不与尿激酶及其结构类似物组织型纤溶酶原激活剂,凝血酶,纤维蛋白原反应,琼脂双向免疫扩散实验及酶活性抑制实验表明,3种抗体均为IgG类的IgG1亚类,所有3种抗体均不抑制酶活力,探讨了这组抗体用于尿激酶原结构与功能及其定量,定性分析研究方面的可能性。 相似文献
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多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA 总被引:14,自引:2,他引:12
在30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)的DNA重组CHO细胞,定期部分更换Cytopore多孔微载体,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在91d连接换液培养过程中,细胞密度可维持在(1.3~2.6)×107/mL,活细胞比率维持在90%以上。在7.5L搅拌罐中培养细胞,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在67d连续换液培养中,细胞最高密度为2.64×107/mL,活细胞比率维持在95%以上。与稳压操作相比,利用周期变压刺激技术可提高产量10%~20%,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率,利用4步纯化工艺,从含u-PA约135g的2100L上清中获得约80gu-PA(单链比例约为90%)。 相似文献
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使用小鼠乳清酸蛋白基因(WAP)启动子控制下的人集落刺激因子(G-CSF)基因为显微注射片段,采用PCR方法检测了转基因胚,为消除PCR扩增中的假阳性结果,构建了两个具有部分同源性的亚克隆片段进行共注射.PCR扩增片段跨越这一同源区域,仅当注射的片段能够整合并发生正常重组,转基因整合胚才能以相对高的比例扩增出特异性片段.结果表明,1、2和8细胞期的阳性率分别为11.1%、55.5%和44.4%,较常规PCR检测获得更为明确的结论,为在大动物转基因胚胎检测提供了依据 相似文献
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