circ_0000218通过靶向吸附miR-1182对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000218(circ_0000218)是否通过靶向吸附miR-1182从而影响宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析43例宫颈癌患者癌组织、癌旁组织中circ_0000218和miR-1182的表达水平。根据转染序列不同分为si-NC组、si-circ_0000218组、miR-NC组、miR-1182组、pcDNA组、pcDNAcirc_0000218组、si-circ_0000218+anti-miR-NC组、si-circ_0000218+anti-miR-1182组。运用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell实验分析circ_0000218和miR-1182表达对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹法检测Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析circ_0000218和miR-1182的靶向关系。癌旁组织与宫颈癌组织比较采用配对t检验,两组间比较采用独立样本t检验进行统计学分析。结果宫颈癌组织中circ_0000218表达量高于癌旁组织(4.17±0.32比1.00±0.05),而miR-1182表达量低于癌旁组织(0.33±0.03比1.00±0.05),差异具有统计学意义(P均<0.001)。与si-NC组比较,si-circ_0000218组HeLa细胞增殖活力(0.86±0.04比0.37±0.03)、迁移数量[(86.73±7.13)个比(38.52±3.19)个]和侵袭数量[(66.80±4.95)个比(26.58±2.55)个]以及Ki-67(0.57±0.05比0.18±0.02)、MMP-2(0.74±0.07比0.28±0.03)和MMP-9蛋白表达量(0.64±0.04比0.22±0.02)降低,差异有统计学意义(P均<0.001).与miR-NC组比较,miR-1182组HeLa细胞增殖活力(0.88±0.04比0.46±0.04)、迁移数量[(89.74±5.53)个比(46.63±3.79)个]和侵袭数量[(68.03±4.34)个比(34.63±3.37)个]以及Ki-67(0.59±0.04比0.24±0.02)、MMP-2(0.76±0.05比0.33±0.03)和MMP-9蛋白表达量(0.66±0.04比0.29±0.03)降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。circ_0000218靶向负调控miR-1182表达。与si-circ_0000218+anti-miR-NC组比较,si-circ_0000218+anti-miR-1182组HeLa细胞增殖活力(0.35±0.03比0.76±0.04)、迁移数量[(35.58±3.11)个比(77.04±4.08)个]和侵袭数量[(25.44±2.29)个比(57.61±3.47)个]以及Ki-67(0.16±0.02比0.46±0.04)、MMP-2(0.26±0.02比0.65±0.04)和MMP-9蛋白表达量(0.20±0.02比0.57±0.04)升高,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论circ_0000218通过靶向吸附miR-1182可促进宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

水痘-带状疱疹病毒ORF7蛋白原核表达及单抗制备

水痘-带状疱疹病毒（Varicella-zoster virus,VZV）减毒活疫苗株（V-Oka）为混合毒株,仍具备感染和潜伏神经系统的能力,VZV第7个开放阅读框（Open reading frame7,ORF7）嗜神经因子敲除的毒株有望成为更安全的VZV减毒活疫苗株,本文重组表达VZV ORF7蛋白,制备其单克隆抗体（Monoclonal antibody,McAb）,建立ORF7荧光抗体检测方法,为新一代ORF7敲除的VZV减毒疫苗的检测提供方法学基础。本研究以V-Oka株orf7为扩增模板,构建重组表达质粒pET-28a-ORF7,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,镍离子柱亲合层析纯化表达蛋白,WB鉴定重组蛋白的活性,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗VZV ORF7单克隆抗体,对单抗进行鉴定,选取一株稳定、特异、高效的单抗进行纯化并标记异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate,FITC）。结果显示,重组ORF7蛋白以包涵体形式表达,分子量约29 kD,亲和纯化后纯度约为92.0%,盐酸胍复性蛋白可与VZV全病毒免...     

Xpert MTB/RIF在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者中诊断结核病的价值

为探讨利福平耐药结核分枝杆菌实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mycobacterium tuberculosis/rifampicin,Xpert MTB/RIF)在人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病(human immunodeficiency virus infection/acquired immunodeficiency syndrome,HIV/AIDS)患者中诊断结核病的价值,本研究回顾性分析了2018年1月1日—2020年12月31日复旦大学附属公共卫生临床中心感染与免疫科收治的801例HIV/AIDS合并疑似结核病患者的临床资料。801例患者中,657例进行了Xpert MTB/RIF、外周血结核感染T细胞斑点试验(tuberculosis T cell spot test,T-SPOT.TB)、抗酸染色涂片镜检和BACTEC MGIT 960液体培养等检测。以液体培养及菌型鉴定结果作为结核病诊断的“金标准”,确诊结核病92例,Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB、抗酸染色涂片镜检在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)的灵敏度分别为72.8%、55.4%和69.6%,特异度分别为96.8%、90.3%和84.4%,与“金标准”行一致性检验,Kappa值分别为0.719 (P<0.01)、0.430(P<0.01)和0.424(P<0.01)。Xpert MTB/RIF检测502份呼吸道样本,结果显示其诊断肺结核的灵敏度和特异度分别为66.7%和96.0%;在痰涂片阳性和阴性的患者中,Xpert MTB/RIF诊断肺结核的灵敏度分别为77.4%和35.2%,特异度分别为87.7%和 97.8%。采用Xpert MTB/RIF检测343份肺外标本,结果显示其诊断肺外结核的灵敏度和特异度分别为63.3%和95.2%。以上结果提示,Xpert MTB/RIF在HIV/AIDS患者中诊断结核病(包括肺结核和肺外结核)具有较高的灵敏度和特异度,诊断肺结核的灵敏度高于肺外结核,因此推荐将其作为HIV/AIDS患者疑似结核病的首选检测方法。     

外泌体介导长链非编码RNA H19促进肝癌细胞增殖与转移

外泌体是由细胞分泌的直径为30～150 nm的小囊泡,含有丰富的mRNA、microRNA和长链非编码RNA(lncRNA)。目前,大多数外泌体研究都集中在mRNA和microRNA,而对lncRNA的生物学功能并不十分清楚。研究表明,肿瘤细胞外泌体 lncRNA H19在肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭中发挥了重要作用。本研究将筛选到的lncRNA H19高表达的肝癌细胞HCCLM3,分别收集其高表达lncRNA H19的外泌体和其下调lncRNA H19表达后的外泌体。然后,将收集到的外泌体分别添加到lncRNA H19低表达的肝癌细胞Hep3B和HepG2孵育液中。孵育24 h后,检测其对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,肝癌细胞HCCLM3可分泌大量的外泌体,且能被其他肿瘤细胞大量摄取;与下调lncRNA H19表达的外泌体相比,lncRNA H19高表达的外泌体能显著增强Hep3B和HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力。而这一作用可通过激活PI3K/AKT/mTOR通路实现。上述结果表明,lncRNA H19高表达的肝癌细胞以外泌体方式,增强邻近肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进肝癌的发生与发展。     

TCP转录因子在植物发育和生物胁迫响应中的作用

TCPs是一类植物特有的转录调控因子,通过植物多样性进化来调节植物形态和结构,并参与植物配子体发育、昼夜节律以及激素信号转导等许多重要的生命过程。本文综述了TCP的结构特征、生物学功能及调控机制等,并结合当前研究现状展望了TCP未来的研究方向,以期为进一步的相关研究和应用提供参考。     

甘蔗双低频酶cDNA-AFLP体系的优化

目的：建立一个适合于甘蔗（Saccharum officenarum）为研究材料的cDNA-AFLP反应的优化体系。方法：用Rever-tAidTM First Strandc DNA Synthesis Kit反转录获得第一链,用Rnase H、E.coliDNA聚合酶Ⅰ和E.coliDNA连接酶合成双链cDNA,用双低频酶EcoRⅠ和PstⅠ对dscDNA酶切,连接,预扩增,和选择性扩增的关键因素进行分析。结果：500ng的dscDNA双酶切5h,将16℃过夜连接的产物稀释1倍用作预扩增的模板,预扩增产物稀释50倍作为选择性扩增模板,6%聚丙烯酰胺凝胶检测及银染,扩增条带均匀分布,清晰可辨且主要分布在200～2000bp之间。结论：该体系具有稳定性高,重复性好等优点,可用于甘蔗cDNA-AFLP分析。     

Paxillin在大鼠胰腺发育不同时期表达的研究

目的:研究桩蛋白(Paxillin,Pxn)在胰腺发育不同阶段的表达和细胞定位.方法:运用RT-PCR技术检测Pxn在大鼠胰腺发育不同阶段的mRNA表达水平;运用免疫组织化学检测不同时期桩蛋白在胰腺的定位.结果:RT-PCR结果显示Pxn的mRNA表达量胚胎期高于新生和成年期;免疫组织化学结果显示在不同发育时期桩蛋白不仅在外分泌胰腺有表达,而且在胰岛也有表达.结论:具有调节细胞聚集、粘附迁移功能的桩蛋白可能参与出生后胰岛重塑.     

浅谈医学影像教学中的体会

随着现代科学技术的进步,尤其是计算机技术的发展,医学影像设备不断进步,因此影像诊断的准确性、敏感性、特异性、快速性、无创性不断提高。近年来,X线、CT、MRI、US和核医学设备不断发展,以及各种医疗技术的信息化与智能化,促进了医疗水平的进步,并且改变了传统的诊断与医疗方式。这样的现代化与信息化环境,对影像学医师提出了多元化的要求[1],也同样要求我们对影像医学的教学内容及模式进行一定变革,来适应发展,以便培养出更加符合社会要求的医学工作者。     

柑橘溃疡病菌II型分泌通道基因xpsD突变体的鉴定及功能分析

【目的】鉴定柑橘溃疡病菌胞外水解酶减弱突变体Mxac56-20的Tn5插入位点,及其在柑橘上的致病力。【方法】采用质粒拯救方法获得Tn5旁侧序列,与基因组信息比对后明确突变体的插入位点;构建功能互补载体对突变体进行功能互补,检测互补菌株胞外蛋白水解酶、纤维素酶和淀粉酶的恢复情况;在寄主植物柑橘上观察致病力变化。【结果】Mxac56-20的Tn5插入位点是II型分泌系统xpsD基因,所构建的互补载体使突变体的胞外水解酶活性和致病力得到恢复。【结论】柑橘溃疡病菌xpsD基因的突变,导致胞外水解酶活性降低,在寄主上的致病力减弱,说明柑橘溃疡病菌的II型分泌系统在与寄主互作过程中起到致病因子的作用。     

甜瓜蔓枯病抗性鉴定及PAL基因表达分析

以甜瓜感病品种‘白皮脆’、单基因抗源(PI140471、PI157082、PI511890、PI482398、PI420145)和聚合抗源(145-082、082-890、082-398、145-471、145-890和890-398)为材料,采用梯度浓度蔓枯病菌孢子液接种鉴定以及RT-PCR技术,研究不同材料蔓枯病抗性表现以及抗蔓枯病基因(苯丙氨酸解氨酶基因,PAL)在不同材料及不同组织中的表达情况。结果显示:当接种蔓枯病菌孢子液浓度为5×109个/mL时,单基因抗源已开始出现感病现象,而聚合基因抗源仍表现为高抗或抗,其中145-471(PI420145×PI140471)抗性显著高于单基因抗源亲本和其它聚合抗源材料,表现为高抗(RI1.0)。抗蔓枯病基因PAL在不同抗性材料根、茎、叶中的表达均呈先上调而后下降并趋于稳定的变化趋势,但变化快慢和幅度均不同。研究表明,甜瓜抗蔓枯病基因的聚合能够提高其对蔓枯病的抗性,但不同抗病基因聚合后的抗性表现存在一定差异;抗蔓枯病基因PAL的表达与甜瓜蔓枯病抗性有密切关系,其表达时间与表达量差异可能是影响不同材料抗病能力差异的重要因素;该研究鉴定筛选的高抗蔓枯病材料145-471可用于甜瓜的抗蔓枯病聚合育种。