circ_0000267靶向miR-198对急性淋巴细胞白血病细胞KOCL44增殖和凋亡的影响

目的探讨circ_0000267对急性淋巴细胞白血病（ALL）KOCL44细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法选择ALL细胞株KOCL44为研究对象,分别将小干扰RNA （siRNA）阴性对照（si-NC）、circ_0000267 siRNA （si-circ_0000267）、微小RNA （miRNA）阴性对照（miR-NC）、miR-198模拟物（miR-198）、circ_0000267 siRNA+miRNA抑制剂阴性对照（si-circ_0000267+anti-miR-NC）和circ_0000267 siRNA+miR-198抑制剂（si-circ_0000267+anti-miR-198）转染细胞,48 h后通过RT-qPCR检测细胞circ_0000267和miR-198相对表达水平,采用CCK-8法检测KOCL44细胞的增殖水平,流式细胞术实验检测KOCL44细胞的凋亡水平,Western blot检测KOCL44细胞Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,通过双荧光素酶报告实验验证circ_0000267和miR-198靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验。 结果与健康志愿者比较,ALL患者circ_0000267表达水平（1.00±0.06比3.19±0.21）上调,miR-198表达水平（1.00±0.07比0.41±0.03）下调,差异有统计学意义（P < 0.05）。敲低circ_0000267或者过表达miR-198可抑制KOCL44细胞增殖（0.68±0.05比0.32±0.02、0.69±0.06比0.39±0.03）、Ki-67 （0.84±0.06比0.37±0.03、0.85±0.06比0.45±0.04）和Bcl-2蛋白表达（0.63±0.05比0.22±0.02、0.65±0.04比0.29±0.02）,促进细胞凋亡[（6.53±0.51）﹪比（24.29±2.06）﹪、（7.38±0.57）﹪比（20.03±1.66）﹪]和Bax蛋白表达（0.31±0.03比0.77±0.04、0.30±0.02比0.71±0.04）,差异有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶报告实验验证circ_0000267可以靶向miR-198表达,干扰miR-198表达可以逆转抑制circ_0000267表达对KOCL44细胞的增殖和凋亡的作用,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论circ_0000267通过调控miR-198抑制ALL细胞增殖,并促进凋亡,为临床治疗ALL提供新的依据。     

miR-98-5p靶向PYGO2基因对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨miR-98-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其作用机制。 方法选取2016年1月至2019年1月郴州市第一人民医院收治的宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织;予以miR-98-5p、si-PYGO2及anti-miR-98-5p单独或共培养Siha细胞,记为：miR-NC组、miR-98-5p组、si-NC组、si-PYGO2组、anti-miR-NC组、anti-miR-98-5p组、miR-98-5p+pcDNA组、miR-98-5p+pcDNA-PYGO2组。运用qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-98-5p和PYGO2 mRNA的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;将WT-PYGO2、MUT-PYGO2分别与miR-NC、miR-98-5p共转染至Siha细胞中,双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。采用方差分析和t检验进行统计学分析。 结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-98-5p表达水平降低（0.98±0.08比0.47±0.05）,PYGO2 mRNA （1.00±0.07比2.43±0.24）和蛋白表达水平（0.27±0.03比0.62±0.05）均升高（P均< 0.001）。与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Siha、Hela、Caski中PYGO2 mRNA （0.98±0.09比2.76±0.23、2.46±0.24、2.55±0.21）和蛋白表达水平（0.21±0.03比0.62±0.06、0.51±0.05、0.57±0.06）升高;miR-98-5p的表达水平降低（1.00±0.08比0.34±0.04、0.56±0.05、0.46±0.04） （P均< 0.05）。与miR-NC组相比,miR-98-5p组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.61±0.05比0.42±0.04,72 h：1.02±0.09比0.59±0.06）、迁移数量[ （112.46±10.27）个比（48.35±4.96）个]及侵袭数量[ （92.47±9.56）个比（39.46±3.52）个]均降低（P均< 0.05）。与si-NC组相比,si-PYGO2组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.64±0.06比0.46±0.05,72 h：1.05±0.08比0.67±0.06）、Siha迁移数量[ （106.48±9.75）个比（42.16±4.25）个]和侵袭数量[ （87.63±8.11）个比（35.42±6.20）个]均降低（P均< 0.05）;Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达水平降低,p21、p27表达水平升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与miR-NC组比较,miR-98-5p组转染WT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（0.38±0.04比0.99±0.08）降低（P < 0.05）,转染MUT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（1.03±0.08比1.01±0.09）差异无统计学意义（P > 0.05）。PYGO2过表达逆转了miR-98-5p过表达对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。 结论miR-98-5p可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其靶向调控PYGO2的表达有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。     

lncRNA MAGI2-AS3下调miR-31-5p抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法根据转染载体不同将A549细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3组(转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-31-5p组(转染anti-miR-31-5p)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-NC)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-31-5p mimics)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-31-5p和MAGI2-AS3 RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证MAGI2-AS3与miR-31-5p的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡与周期。两组间比较采用独立样本t检验进行分析;多组间比较采用单因素方差分析,组内多重比较采用SNK-q检验。结果与人正常肺细胞HBE相比,肺癌细胞A549中的MAGI2-AS3表达量(0.48±0.03比1.29±0.06)降低,miR-31-5p表达量(1.01±0.05比0.25±0.02)升高;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3组A549细胞活力(0.48±0.04比0.77±0.06)、迁移[(81.33±2.87)个比(124.33±3.09)个]和侵袭[(32.00±2.83)个比(53.00±3.27)个]细胞数、S期细胞所占比例(23.01﹪±1.00﹪比32.95﹪±1.06﹪)均降低,凋亡率(19.95﹪±1.25﹪比7.23﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(43.58﹪±2.15﹪比33.56﹪±1.23﹪)均升高;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-31-5p组A549细胞活力(0.53±0.04比0.78±0.06)、迁移[(76.00±3.74)个比(108.33±2.87)个]和侵袭[(30.00±1.63)个比(42.33±2.05)个]细胞数、S期细胞所占比例(24.43﹪±1.13﹪比32.91﹪±1.08﹪)降低,凋亡率(18.21﹪±1.24﹪比7.29﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(41.56﹪±2.19﹪比33.53﹪±1.27﹪)升高,差异有统计学意义(P均<0.05);双荧光素酶报告系统结果显示,MAGI2-AS3靶向负调控miR-31-5p的表达。与pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组A549细胞活力(0.68±0.06比0.50±0.04)、迁移[(91.00±1.63)个比(52.67±2.62)个]和侵袭[(62.67±2.49)个比(31.67±4.03个)]细胞数升高,凋亡率(10.59﹪±1.0﹪比21.11﹪±1.14﹪)降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论lncRNA MAGI2-AS3通过靶向miR-31-5p抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。lncRNA MAGI2-AS3是肺癌潜在分子治疗靶点。     

氧化槐果碱通过调控lncRNA DUXAP8/miR-519b-3p轴影响宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的实验研究

为了探讨氧化槐果碱(OSC)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制,本研究将HeLa细胞分为对照组(Con组)、OSC组、转染DUXAP8小干扰RNA(si-DUXAP8)组、转染小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、OSC+DUXAP8过表达载体(pcDNA-DUXAP8)组和OSC+空载体(pcDNA)组,然后用MTT法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中DUXAP8和miR-519b-3p水平;双荧光素酶报告基因实验验证DUXAP8和miR-519b-3p调控关系。结果显示,与Con组比较,OSC组HeLa细胞抑制率、凋亡率、Bax和p21蛋白水平、miR-519b-3p水平升高(P0.05),细胞迁移数、侵袭数、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9的蛋白水平和DUXAP8水平降低(P0.05),且呈剂量依赖性(P0.05);与si-NC组比较,si-DUXAP8组HeLa细胞抑制率、凋亡率和Bax、p21蛋白水平升高(P0.05),细胞迁移和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的蛋白水平降低(P0.05);DUXAP8在HeLa细胞中靶向负调控miR-519b-3p表达;与OSC+pcDNA组比较,OSC+pcDNA-DUXAP8组HeLa细胞抑制率、凋亡率和Bax、p21的蛋白水平降低(P0.05),细胞迁移和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的蛋白水平升高(P0.05)。这提示氧化槐果可能通过调DUXAP8/miR-519b-3p轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

circ＿0015756通过调控miR-515-5p/HMGB3轴影响肺癌细胞增殖、凋亡和迁移

为探讨环状RNA 0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平。同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、miR-515-5p模拟物、si-circ_0015756+miR-515-5p抑制物分别转染肺癌细胞A549,采用四甲基偶氮唑蓝实验、平板克隆实验检测A549细胞的增殖能力,采用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率,采用划痕愈合实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移能力。蛋白质印迹法测定高迁移率族蛋白3(HMGB3)的表达水平。双荧光素酶分析circ_0015756与miR-515-5p、miR-515-5p与HMGB3的靶向关系。结果显示,肺癌组织中circ_0015756的相对水平显著高于癌旁组织(P0.05),miR-515-5p的相对水平显著低于癌旁组织(P0.05)。干扰circ_0015756表达后A549细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-515-5p的相对水平显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。过表达miR-515-5p后A549细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。抑制miR-515-5p表达明显减弱干扰circ_0015756表达对A549细胞增殖、集落形成、迁移以及HMGB3蛋白表达的影响(P0.05)。circ_0015756与miR-515-5p直接结合,miR-515-5p与HMGB3直接结合。总之,干扰circ_0015756通过靶向上调miR-515-5p/HMGB3轴抑制肺癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

甘草提取物通过调控miR-212-5p/BCL2L2 基因抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨甘草提取物GL-1对甲状腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法以10、20、30 μg/mL GL-1处理甲状腺肿瘤细胞CAL-62,或在CAL-62细胞中转染miR-212-5p mimics、anti-miR-212-5p、si-BCL2L2、pcDNA-BCL2L2。其中转染pcDNA-BCL2L2细胞并以30 μg/mL GL-1处理。噻唑蓝比色法 (MTT)检测CAL-62细胞增殖,Transwell小室法检测CAL-62细胞迁移和侵袭,实时定量PCR (qPCR)检测CAL-62细胞中miR-212-5p表达,Western blot检测相关蛋白Bcl-2样蛋白2 (BCL2L2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)表达。生物学信息预测miR-212-5p的下游靶基因,双荧光素酶基因报告实验进一步验证。数据采用单因素方差分析、Tukey’s事后检验和t检验。结果与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1降低CAL-62细胞24、48、72 h的细胞活性 (P < 0.05),并呈剂量、时间依赖性。与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1干预后,CAL-62细胞侵袭数[(143.56±14.22)个、(100.32±10.23)个、(68.23±6.49)个比(189.65±15.23)个]、迁移数[(198.56±14.35)个、(141.35±12.58)个、(89.56±8.95)个比 (295.36±17.56)个]和BCL2L2蛋白表达量 (0.76±0.08、0.51±0.06、0.24±0.02比1.00±0.12)均降低 (P 均< 0.05),而miR-212-5p水平 (1.61±0.11、1.99±0.13、2.28±0.15比1.00±0.07)升高(P < 0.05),并呈剂量依赖性。过表达miR-212-5p和沉默BCL2L2表达在24、48、72 h时CAL-62细胞活性、细胞迁移数、侵袭数和Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量降低 (P < 0.05)。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告实验证实BCL2L2是miR-212-5p的靶基因。过表达miR-212-5p抑制BCL2L2蛋白水平,沉默miR-212-5p促进BCL2L2蛋白表达 (P < 0.05)。过表达BCL2L2可逆转GL-1对CAL-62细胞增殖、迁移、侵袭及Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用。结论 GL-1通过miR-212-5p/BCL2L2抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

二氯乙酸对人肾癌细胞株A498侵袭及迁移的抑制作用研究

目的探讨二氯乙酸(DCA)对人肾癌细胞株A498侵袭及迁移的影响,并分析其机制。方法取人肾癌细胞株A498培养,分为阴性对照(等容积无菌生理盐水)组、DCA低、中、高(5、10、20 mmol/L)剂量组,培养48 h。Transwell小室实验检测侵袭能力,细胞划痕实验检测迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)基因表达,Western blot检测蛋白表达及磷酸化JNK(p-JNK)。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与DCA高剂量组相比,DCA中、低剂量组、阴性对照组侵袭活性[(75.33±10.09)比(167.89±47.12)、(372.74±50.06)、(530.26±81.22)个/视野]、E-cadherin mRNA相对表达量(1.52±0.12比1.35±0.11、1.02±0.11、0.85±0.12)、E-cadherin蛋白相对表达量(1.32±0.19比0.89±0.14、0.37±0.08、0.13±0.03)均降低(P均<0.001);而迁移率[(10.05±2.31)﹪比(23.95±4.20)﹪、(36.26±5.01)﹪、(53.59±6.71)﹪]、N-cadherin mRNA蛋白相对表达量(0.42±0.06比0.58±0.07、0.80±0.10、0.95±0.11),N-cadherin蛋白相对表达量(0.15±0.03比0.25±0.04、0.74±0.07、0.95±0.11)、p-JNK水平(0.14±0.03比0.29±0.05、0.68±0.07、0.95±0.10)均升高(P均<0.001)。不同剂量和阴性对照组的JNK mRNA与蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DCA可抑制人肾癌细胞株A498侵袭及迁移,且一定范围内呈剂量依赖性,推测与调控侵袭及迁移相关基因与蛋白表达有关。     

miR-363-3p靶向 TWIST1调控上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的探讨miR-363-3p靶向TWIST1调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭的分子机制。 方法将体外培养的A549细胞分为空白对照组（细胞未做任何处理）;模拟物对照组（转染miR-363-3p模拟物阴性对照）;模拟物组（转染miR-363-3p模拟物）;后期实验另设：模拟物+ pcDNA组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）;模拟物+ TWIST1组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1-TWIST1过表达质粒）。采用RT-PCR检测细胞中miR-363-3p的表达,Western blot检测细胞中TWIST1蛋白和上皮间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin的表达,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和TWIST1的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞中miR-363-3p表达水平（1.00±0.08、0.97±0.05比3.82±0.45）升高,TWIST1 mRNA （1.00±0.06、0.98±0.06比0.39±0.02）和蛋白的表达水平（0.81±0.05、0.78±0.06比0.42±0.02）降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞Vimentin蛋白表达水平（0.58±0.04、0.55±0.05比0.36±0.03）降低,E-cadherin蛋白的表达水平（0.22±0.02、0.25±0.03比0.47±0.03）增高,迁移细胞数（85.75±5.45、83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（128.26±6.15、125.95±8.05比71.64±5.75）降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与模拟物对照组比较,模拟物组细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.55±0.05比0.36±0.03）降低,而E-cadherin蛋白表达水平（0.25±0.03比0.47±0.03）升高,迁移细胞数（83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（125.95±8.05比71.64±5.75）均减少（P均< 0.05）。TWIST1是miR-363-3p潜在的靶基因。与模拟物+ pcDNA3.1组比较,模拟物+ TWIST1组A549细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.32±0.02比0.42±0.03）升高,而E-cadherin蛋白表达水平（0.56±0.04比0.38±0.03）降低,A549细胞的迁移数（49.45±4.22比67.52±5.05）和侵袭数（72.45±5.73比108.35±6.56）增加（P均< 0.05）。 结论miR-363-3p可通过靶向TWIST1调控EMT抑制A549细胞迁移和侵袭。     

LncRNA ZNF667-AS1靶向 miR-31-5p对食管癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)ZNF667-AS1通过靶向miR-31-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及潜在的机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测ZNF667-AS1在食管癌细胞Eca109、EC1、TE1和正常食管上皮细胞Het-1A的表达水平,并选择表达差异最大的细胞株进行后续实验。采用脂质体转染技术将pcDNA3.1-ZNF667-AS1过表达重组载体质粒转染至人食管癌Eca109细胞,实验分为对照组(未行转染的Eca109细胞)、pcDNA3.1组(转染空载体质粒的Eca109细胞)和ZNF667-AS1组(转染pcDNA3.1-ZNF667-AS1质粒的Eca109细胞),qPCR技术检测pcDNA3.1-ZNF667-AS1的转染效果,噻唑蓝比色法(MTT)和平板克隆实验检测过表达ZNF667-AS1对Eca109细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测Eca109细胞迁移能力,流式细胞术检测Eca109细胞凋亡率,Western blot检测Eca109细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、上皮标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、间充质标志物神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平,生物信息学预测ZNF667-AS1与miR-31-5p的互补配对关系,荧光素酶报告实验和qPCR技术验证ZNF667-AS1和miR-31-5p的靶向调控关系。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与Het-1A细胞相比,食管癌Eca109、EC1和TE1细胞中ZNF667-AS1的表达水平均降低(1.00±0.08比0.29±0.04,0.36±0.05,0.33±0.06),差异有统计学意义(P<0.001)。与ZNF667-AS1组相比,对照组及pcDNA3.1组中ZNF667-AS1的表达水平(3.14±0.32比1.00±0.10,0.94±0.09),细胞活力[(63.42±3.75)%比100.00±4.85、(97.69±4.57)%],细胞克隆形成数[(34.26±3.52)个比(95.64±10.22)个、(92.80±10.04、个],Cyclin D1表达水平(0.26±0.05比0.75±0.08、0.71±0.07),迁移细胞数[(20.24±2.35)个比(63.55±6.04)个、(60.02±6.12)个],细胞中E-cadherin表达水平(0.19±0.02比0.48±0.05,0.49±0.05)和miR-31-5p的表达水平(0.30±0.03比1.00±0.10,0.95±0.09)均升高,p21表达水平(0.79±0.09比0.24±0.05,0.26±0.06),细胞凋亡率[(29.17±1.26)%比(3.41±0.73)%,(3.72±0.78)%],细胞中N-cadherin(0.87±0.09比0.42±0.04,0.40±0.04)、Vimentin表达水平(0.82±0.08比0.44±0.04,0.44±0.04)均降低,差异有统计学意义(P均<0.001),与对照组比较,pcDNA3.1组ZNF667-AS1的表达水平,细胞活力,细胞克隆形成数,Cyclin D1和p21表达水平,迁移细胞数,细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和miR-31-5p表达水平,细胞凋亡率差异无统计学意义(P均>0.05)。生物信息学预测发现ZNF667-AS1和miR-31-5p存在靶向结合位点;荧光素酶报告实验结果显示,与空载转染组比较,miR-31-5p组ZNF667-AS1-Wt相对荧光素酶活性(1.00±0.10比0.19±0.02)降低(P<0.05),ZNF667-AS1-Mut相对荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达ZNF667-AS1能抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能与ZNF667-AS1靶向调控miR-31-5p有关。     

miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭

[目的]探讨miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭作用。[方法]检测40例肺癌患者癌组织和癌旁组织中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并分析NFIC表达与肺癌患者病理特征的相关性。按Lipofectamine 2000方法分别将miR-NC、miR-550a-3 mimics和miR-550a-3inhibitor转染到HCC827细胞,48h后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,同时检测细胞中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并检测细胞中NFIC、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。[结果]肺癌组织中miR-550a-3表达水平(1.83±0.19)高于癌旁组织(1.00±0.15),NFIC mRNA表达水平(0.62±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.10)(P<0.05);以miR-550a-3 mRNA均数为标准,将肺癌患者分为高表达组(22例)和低表达组(18例),miR-550a-3与病理类型和TNM分期相关(P<0.05),与年龄、性别、是否吸烟和肿瘤直径不相关(P>0.05)...     

Circ_0058106 promotes proliferation,metastasis and EMT process by regulating Wnt2b/β-catenin/c-Myc pathway through miR-185-3p in hypopharyngeal squamous cell carcinoma

Hypopharyngeal squamous cell carcinoma (HSCC) accounts 95% of hypopharyngeal cancer, which is characterized by high early metastasis rate and poor prognosis. It is reported that circular RNA is involved in the occurrence and development of cancer; however, the role of circRNA in hypopharyngeal cancer has little been investigated. We performed hypopharyngeal carcinoma circRNA microarray and qRT-PCR verification. The results showed circ_0058106 expression level was significantly upregulated in tumor tissues than in corresponding normal tissues. We found that circ_0058106 upregulation promoted proliferation, migration and invasion of HSCC cells, while knockdown of circ_0058106 inhibited proliferation, migration and invasion of HSCC cells both in vitro and in vivo. Bioinformatics predicted circ_0058106 may interact with miR-185-3p. We verified circ_0058106 directly bound miR-185-3p and downregulated miR-185-3p expression by using dual-luciferase reporter assay and qRT-PCR. Moreover, we proved circ_0058106 promoted HSCC cells tumorigenesis and EMT process by regulating Wnt2b/β-catenin/c-Myc pathway via miR-185-3p. In conclusion, our findings firstly confirmed the carcinogenic effect of circ_0058106 in promoting HSCC cells tumorigenesis, metastasis, invasion and EMT process by regulating Wnt2b/β-catenin/c-Myc pathway through sponging miR-185-3p, indicating that circ_0058106 may be a new therapeutic target and prognostic marker for HSCC.Subject terms: Head and neck cancer, Head and neck cancer     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

Circ_0025039 acts an oncogenic role in the progression of non-small cell lung cancer through miR-636-dependent regulation of CORO1C

Non-small cell lung cancer remains the leading cause of cancer-related death worldwide. Circular RNA plays vital roles in NSCLC progression. This study is designed to reveal the role of circ_0025039 in NSCLC cell malignancy. The RNA expression of circ_0025039, microRNA-636 (miR-636), and coronin 1C was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction. Protein expression was checked by Western blot analysis or immunohistochemistry assay. Cell proliferation, migration, invasion, tube formation ability, sphere formation capacity, and apoptosis were investigated by cell counting kit-8, 5-Ethynyl-29-deoxyuridine, transwell assay, tube formation assay, sphere formation assay, and flow cytometry analysis, respectively. Mouse model assay was conducted to reveal the effect of circ_0025039 silencing on tumor formation in vivo. The interaction between miR-636 and circ_0025039 or CORO1C was identified through dual-luciferase reporter and RNA pull-down assays. The expression of circ_0025039 and CORO1C was significantly increased, while miR-636 was decreased in NSCLC tissues and cells compared with controls. Circ_0025039 depletion repressed NSCLC cell proliferation, migration, invasion, tube-forming capacity, and sphere formation ability, but induced cell apoptosis. The neoplasm formation was repressed after circ_0025039 silencing. Additionally, circ_0025039 acted as a sponge for miR-636, which was found to target CORO1C. Importantly, the contribution of circ_0025039 to NSCLC progression was mediated by miR-636/CORO1C axis. Circ_0025039 silencing repressed NSCLC malignant progression by reducing CORO1C expression through miR-636, showing the possibility of circ_0025039 as a therapeutic target for NSCLC.

     

Circ_0004015 silencing represses cisplatin chemoresistance and tumor progression by reducing KLF8 in a miR-198-dependent manner in non-small cell lung cancer

Circular RNA (circRNA) plays vital roles in diverse cancer progression, including non-small cell lung cancer (NSCLC). Herein, the role of circ_0004015 in regulating the sensitivity of NSCLC to cisplatin (DDP) is revealed. The RNA expression of circ_0004015, microRNA-198 (miR-198) and kruppel like factor 8 (KLF8) was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction. Protein expression was checked by western blot. The half maximal inhibitory concentration of DDP and cell proliferation were determined by cell counting kit-8 assay. Cell colony formation ability, migration, invasion and apoptosis were investigated by colony-forming assay, transwell assay and flow cytometry analysis, respectively. The effect of circ_0004015 knockdown on DDP sensitivity in vivo was demonstrated by mouse model assay. The interactions among circ_0004015, miR-198 and KLF8 were predicted by bioinformatics methods, and identified by mechanism assays. The expression of circ_0004015 and KLF8 was apparently upregulated, while miR-198 expression was downregulated in DDP-resistant NSCLC tissues and cells compared with control groups. Additionally, circ_0004015 silencing repressed DDP resistance, cell proliferation, migration and invasion, but induced cell apoptosis in DDP-resistant NSCLC cells. Circ_0004015 knockdown promoted the effect of DDP on tumor formation in vivo. Also, miR-198 inhibitors attenuated circ_0004015 depletion-mediated action though associating with circ_0004015. MiR-198 regulated DDP sensitivity and NSCLC progression by targeting KLF8. Furthermore, circ_0004015 modulated KLF8 expression through interaction with miR-198. Circ_0004015 conferred DDP resistance and promoted NSCLC progression by miR-198/KLF8 pathway, proving a potential target for studying DDP-mediated treatment of NSCLC.