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含人IL-2基因的真核表达质粒的构建及其在真核细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本工作用PCR由人的外周血单个核细胞。cDNA人中获取了带有信号肽的IL-2全cDNA克隆,并构建了不同的表达质粒:带有SV40启动子的以质粒为载体的pSVK3-IL2和以逆转录病毒为载体的pLN-IL2系列:pLNCIL2,pLNSIL2,pLIL2SN,它们分别带有CMV、SV40和LTR启动子。用DEAE-Dextran法、SA→脂质体法和电穿孔等方法分别将这些IL-2表达质粒转染人COS-7及CTLL-2细胞中,测定不同时间细胞培养液上清中IL-2的量。结果表明,这些表达质粒在靶细胞中均有不同程度的一过性表达,IL-2的分泌至少可持续5天,转染后72~96小时IL-2产量最高,一般可达28~30U/ml,最高为50U/ml。本工作比较了不同启动子和表达调控元件对IL-2表达的影响,还比较了在不同靶细胞中这些表达质粒产生IL-2的量。 相似文献
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用基因定位突变法,将白细胞介素-2(IL-2)分子中17Leu和20Asp进行一系列突变,并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明17Leu突变为Asp时,IL-2的空间结构无明显变化。生物活性却显著下降;20Asp突变为Leu,以及17Leu与20Asp对调后,均导致IL-2的空间结构发生变化,并严重影响其生物活性。上述结果说明17Leu突变为Asp后对活性的影响并非由空间结构变化所引起,而与残基本身性质有关:17Leu与20Asp这两个重要的残基,必须位于各自特定的空间位置,才能发挥其生物作用。 相似文献
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用凝胶阻滞分析的方法, 发现鼠T淋巴细胞系CTLL-2在白细胞介素-2(IL-2)刺激下可活化一个DNA结合因子, 它与γ-干扰素活化序列(GAS)专一性结合, 命名这个DNA结合因子为白细胞介素-2活化核因子(IL-2-NAF).IL-2-NAF的活化非常迅速, 不需要新的蛋白质合成, 并且它的活化程度随着IL-2刺激细胞的时间的不同而发生相应的变化. 进一步研究表明, IL-2-NAF的活化过程是通过酪氨酸激酶的信号传递途径, 并且它本身的酪氨酸残基也被磷酸化, 酪氨酸残基的磷酸化为其结合DNA所必需. IL-4、γ-IFN刺激CTLL-2细胞不活化与GAS专一性结合的因子. 而在Hut-102细胞中, IL-2、IL-4均可活化GAS结合因子, 但活化程度较弱. 相似文献