江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化*

将江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas,A.h.P)神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因克隆于分泌型原核表选载体pET-22b⁺,以c端融合了6个组氨酸的形式在大肠杆菌B12l(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的20％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用6mol／L的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子(Ni²⁺)配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达80％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用PCl2细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有NGF生物活力。     

神经生长因子与细胞凋亡

神经生长因子（ＮＧＦ）是第一个被发现、也是目前为止研究得最清楚的一个神经营养因子（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ）。它能够促进发育中的感觉神经元及交感神经元的存活及分化,营养成熟的神经元,维持其正常的生物学功能。然而,近两年来研究发现,ＮＧＦ也...     

巨峰葡萄花芽分化过程中成花基因LEA FY的表达

目的:研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达差异,为实际生产提供理论依据。方法:用半定量RT-PCR方法研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达。结果:LEAFY基因的表达量在所研究的8个时期内有明显差异,在5叶期、6叶期、7叶期、8叶期的表达量相对较高。结论:根据成花基因LEAFY表达上的差异,可以人为地提前或延迟巨峰葡萄的花期。     

尖吻蝮蛇毒中类似于神经营养性因子物质的纯化及特性

分别利用离了交换,凝胶过滤及ｍｏｎｏＳ多步层析,从尖吻蝮蛇提纯到一个类似于神经营养因子的蛋白质。通过胶胶过滤测定其分子量为２６ｋＤ,由两个亚基 共价相互作用相连接在一直等电聚集显示其等电点为７．８。．它的生物活力与小鼠２．５ＳＮＧＦ相当,在１－１００μｇ／Ｌ的浓度范围内维持ＰＣ１２细胞在无血清培养基中的存活。同时,它还可以诱导ＰＣ１２细胞转变为类似于交感神经元的表型 。     

江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒神经生长因子的分离纯化和特性

神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗ ｔｈ ｆａｃｔｏｒ, Ｎ Ｇ Ｆ）是第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一种神经营养因子 利用 Ｐ Ｃ１２ 细胞生物活力测定为跟踪检测手段,分别经过 Ｃ Ｍ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ Ｌ ６ Ｂ、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 及 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ ｍ ｏｎｏ Ｓ层析,从３０ ｇ 江浙蝮蛇粗毒中分离纯化到２００ μｇ Ｎ Ｇ Ｆ,纯化倍数高达１０５经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 测定,该蛋白分子量为 ２６ ｋ Ｄ,由两个亚基通过二硫键交联组成二体形式等电聚焦显示其等电点为６７,与氨基酸组成分析结果相吻合 江浙蝮蛇神经生长因子的生物活力水平与小鼠２５ Ｓ Ｎ Ｇ Ｆ相当,在１～１００ μｇ／ Ｌ 的浓度范围内维持 Ｐ Ｃ１２ 细胞在无血清条件下的存活     

巨峰葡萄花芽分化过程中成花基因LEAFY的表达

目的:研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达差异,为实际生产提供理论依据。方法:用半定量RT-PCR方法研究LEAFY基因在巨峰葡萄花芽分化期间的表达。结果:LEAFY基因的表达量在所研究的8个时期内有明显差异,在5叶期、6叶期、7叶期、8叶期的表达量相对较高。结论:根据成花基因LEAFY表达上的差异,可以人为地提前或延迟巨峰葡萄的花期。     

PTPase对IL-2信号转导通路的正调和负调作用

用蛋白质酪氨酸磷酸酯酶(PTPase)抑制剂正矾酸钠处理细胞,可以大为增强细胞内蛋白质的酪氨酸磷酸化水平.电泳迁移率变动分析(EMSA)发现,此时Stat5发生酪氨酸磷酸化而被激活,并与γ-干扰素活化序列(GAS)结合.与白细胞介素-2(IL-2)活化Stat5不同,正矾酸钠对Stat5的活化不能被蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂完全阻断.此外发现,正矾酸钠可以加强IL-2对启动子区含有GAS的报告基因表达的上调作用.以上结果证明PTPase对IL-2诱导的JAK-STAT信号转导通路起负调作用.然而,抑制PTPase的活性却可以阻断IL-2对TNF-β基因和c-myc基因转录的激活,并导致细胞死亡.因此,PTPase在IL-2诱导的不同信号转导通路中分别起正调和负调作用,这两种作用都是通过它的酯酶活性来实现的.     

江浙蝮蛇神经生长因子在家蚕幼虫中的表达

江浙蝮蛇神经生长因子（ＮＧＦ）基因克隆于昆虫病毒转移栽体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组转移栽体ｐＢａｃ－ＰＡＫ－ＮＧ〈与线性化Ｂｍ－ＡａｃＰＡＫ６修饰病基因组ＤＮＡ共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒洒家蚕幼虫,５天后收集血淋巴,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测及利用ＰＣ１２细胞进行ＮＧＦ生物活力测定证明,神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达,且表达产物具有良好的生物学活性     

江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

将江浙蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ,Ａ．ｈ．Ｐ．）神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）基因克隆于分泌型原核表达载体ｐＥＴ２２ｂ＋,以Ｃ端融合了６个组氨酸的形式在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行了ＩＰＴＧ诱导表达。ＳＤＳＰＡＧＥ分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的２０％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用６ｍｏｌ／Ｌ的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达８０％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用ＰＣ１２细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有ＮＧＦ生物活力。