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微阵列(microarrays)技术及其应用 总被引:4,自引:0,他引:4
微阵列分为cDNA微阵列和寡聚核苷酸微阵列,微阵列上“印”有大量已知部分序列的DNA探针,微阵列技术就是利用分子杂交原理,使同时被比较的标本(用同位素或荧光素标记)与微阵列杂交,通过检测杂交信号强度及数据处理,把他们转化成不同标本中特异基因的丰度,从而全国比较不同标本的基因表达水平的差异,微阵列技术是一种探索基因组功能的有力手段。 相似文献
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白介素-2受体及其介导的信号转导 总被引:2,自引:0,他引:2
白介素2(IL-2)是一种重要的调控免疫系统细胞增殖和分化的细胞因子。其生物活性的发挥是通过与细胞表面白介素-2受体(IL-2R)结合,继而激活胞质内多种非受体型蛋白质酪氨酸激酶(PTK),进一步启动3种主要信号转导途径:控制基因转录的Jak-STA... 相似文献
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本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer 和Darnell 的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNAl~2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05~2.26,A_(260)/A_(280)=2.03~2.20。RNA 含量为48.33±4.72%,DNA 含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、8S、9S、15S 和20S。冻干的iRNA 制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase 或pronase 处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。 相似文献
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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明 ,mmc启动VEGF基因在小鼠肌细胞C2C12和NIH3T3细胞中能有效表达且具有一定的肌细胞特异表达功能 相似文献
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本文以人VEGFcDNA为目的基因,构建成逆转录病毒质粒载体,并进一步包装成重组缺陷型逆转录病毒,以此感染原代兔皮肤成纤维细胞,经G418筛选,获得了具有分泌VEGF能力的抗性细胞克隆,经Southern、PCR、Northern、RT-PCR等检测,证实了外源基因已整合至原代兔皮肤成纤维细胞基因组中,无重排和产生野生型病毒之患。整合的VEGF可在修饰细胞中转录,经内皮细胞增殖实验和血管通透性实验证实其表达产物具有强大的生物活性。为进一步研究VEGF的生物学功能和生理效应提供有用的工具。 相似文献
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Taq DNA聚合酶具有反应速度快、温度作用范围广及良好的续进性等特点,可视为一种理想的DNA顺序分析酶。本文首先对非对称性PCR扩增过程中单、双链DNA产物的积累情况进行了分析,然后采用标记延伸二步法,对Taq DNA聚合酶的性质及影响因素进行分析。为进一步改进Taq DNA聚合酶测序的方法,本反应建立了“Klenow-型”的直接掺入标记同位素测序法,即在反应液中加入与标记核苷酸相应的一定浓度的冷dNTP。此法不但解决了二步法中引物后部分DNA顺序无法读出的缺点,而且简化了反应步骤,亦能得到令人满意的顺序分析结果,每次可读出至少400碱基的序列。 相似文献
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腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点,但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白,并诱导机体的细胞和体液免疫反应,影响了目的基因在体内的稳定表达。为了克服这一缺点,构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体HAdI-hFVII。该载体去除了病毒基因组的l3、L1、L2、VAI-VAI、pTP等基因序列。在第一代重组病毒AdI-hFVII辅助下,能在293细胞包装和扩增。经氯化铯梯度超速离心后,能与辅助病毒有效分离。小鼠体内研究表明,该载体能在体内高效转移和表达hFVII基因。与笫一代腺病毒载体比较,外源基因表达稳定性明显提高,提示该载体在体内具有较低的免疫原性。 相似文献
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荧光差异显示PCR克隆参与胃腺癌转移的基因wcl1 总被引:4,自引:0,他引:4
使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发现在转移灶CRL 186 3细胞中有 38个基因被显著上调 ,7个基因被显著下调 ,包括未被发现的基因 3个 .利用生物信息学技术对其中 1个在RF 4 8中高度上调的wcl1进行克隆和鉴定 ,发现wcl1的cDNA全长为 6 6 4bp ,含有 1个 2 4 0bp的完整阅读框 .用RT PCR和Northern印迹证实 ,结果与克隆拼接的大小完全一致 (NCBI数据库收录号AF36 4 86 3) .wcl1编码肽位于胞浆内含 79个氨基酸 ,理论上的pI Mr:5 2 8 896 1 72 .氨基酸序列分析发现 ,其N端 4~ 5 5氨基酸处为未知功能区UPF0 0 16蛋白 ,5 7~ 78处有一段亮氨酸拉链结构域 ,未发现与已知的蛋白质有高度的同源性 .该基因定位于 11q14.组织分布表明 ,wcl1除在分化差的胃腺癌中的表达要高于相应的正常胃组织 ,在微血管内皮中表达也明显高于乳腺管癌、脑纤维状星形细胞瘤 ,未检测到在其它组织有分布 .研究提示 ,Wcl1可能为胃腺癌转移过程中参与核内基因转录的相关蛋白质 . 相似文献
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