含人IL－2基因的真核表达质粒的构建及其在真核细胞中的表达

本工作用ＰＣＲ由人的外周血单个核细胞。ｃＤＮＡ人中获取了带有信号肽的ＩＬ－２全ｃＤＮＡ克隆,并构建了不同的表达质粒：带有ＳＶ４０启动子的以质粒为载体的ｐＳＶＫ３－ＩＬ２和以逆转录病毒为载体的ｐＬＮ－ＩＬ２系列：ｐＬＮＣＩＬ２,ｐＬＮＳＩＬ２,ｐＬＩＬ２ＳＮ,它们分别带有ＣＭＶ、ＳＶ４０和ＬＴＲ启动子。用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法、ＳＡ→脂质体法和电穿孔等方法分别将这些ＩＬ－２表达质粒转染人ＣＯＳ－７及ＣＴＬＬ－２细胞中,测定不同时间细胞培养液上清中ＩＬ－２的量。结果表明,这些表达质粒在靶细胞中均有不同程度的一过性表达,ＩＬ－２的分泌至少可持续５天,转染后７２～９６小时ＩＬ－２产量最高,一般可达２８～３０Ｕ／ｍｌ,最高为５０Ｕ／ｍｌ。本工作比较了不同启动子和表达调控元件对ＩＬ－２表达的影响,还比较了在不同靶细胞中这些表达质粒产生ＩＬ－２的量。