高低转移肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83-a中P21过表达的研究

为探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用,利用FuGene转染方法将 P21基因的表达质粒转入一对分别具高、低转移能力的肺腺癌细胞系An ip973和AGZY83-a中。对p21蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线,克隆形成率,原位末端标记分析和流式细胞仪分析。p21蛋白过表达的一对细胞系细胞生长曲线斜率降低,克隆形成能力下降并出现明显的G1期阻滞,但未检测到凋亡信号。结果表明p21基因的过表达通过G1期阻滞抑制这一对肺腺癌细胞的生长,P21基因可以作为肺腺癌基因治疗的候选基因。 Abstract:In order to investigate the suppression effect of tumor suppressor genes in lung adenocarcinoma,we transfected P21 expression vector into a pair of lung adenocarcinoma cell lines with different metastasis potential:Anip973(high metastasis potential)and AGZY83-a(low metastasis potential).The suppression effects of p21 were evaluated by cell growth curve,cloning efficiency assay,flow cytometric analysis and Tunel technique.We found that increased expression of p21 in both cell lines was associated with significant lengthening of G1 phase,decreased proliferation potential and decreased cloning efficiency.No apoptosis was found in the cell lines with overexpressed P21 gene.The results showed that increased expression of P21 gene suppressed the lung adenocarcinoma cells by G1 arrest and P21 gene proved a candidate gene in lung adenocarcinoma gene therapy.     

细胞色素P450与癌症基因治疗

细胞色素Ｐ45 0基因与癌症化疗潜药(该类潜药可通过Ｐ45 0催化的加单氧酶反应而活化 )结合的癌症基因疗法引人注意[1]一些抗癌药物可被Ｐ45 0酶系代谢 (表1 )。环磷酰胺 (ＣＰＡ )、异环磷酰胺 (ｉｆｏｓ ｆａｍｉｄｅ)、甲基苄肼、甲苄肼 ( ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ)和氮烯咪胺 (ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ) ,经特定Ｐ45 0酶系的代谢所产生的中间物具有抗癌活性。硫代ＴＥＰＡ、阿霉素、依托泊甙 (ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ)和三苯氧胺 (ｔａｍｏｘｉｆｅｎ)本身具有抗癌活性 ,但通过Ｐ45 0代谢形成的具有细胞毒性的代谢物 ,抗癌活性可得到加强。还…     

系列腺病毒伴随病毒载体的构建及表达β-半乳糖苷酶的研究

为了便于开展用重组腺病毒伴随病毒（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ,ｒＡＡＶ）载体进行基因治疗的研究,构建了三种通用型ＡＡＶ载体ｐＷＡＶ－１、ｐＷＡＶ－２和ｐＳＮＡＶ,每种载体均含有ＡＡＶ－２两端的倒转末端重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔｓ,ＩＴＲ）,中间依次为巨细胞病毒（ＣＭＶ）立早增强子和启动子、多克隆位点和ｐｏｌｙＡ信号。研究只     

靶向转录研究新进展

靶向转录（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）是指在转录水平将目的基因界定于靶位点进行有效表达的过程,有许多因子参与这一复杂调控,包括许多顺序作用元件如组织特异性启动子／增强子、可被内、外源刺激诱导的启动子以及绝缘子、静息子等,它们与靶组织内的转录因子相互作用实现基因的定位表达,而结合基因开关、二步转录激活系统及Ｃｒｅ／ＬｏｘＰ系统又可控制表达产物的消长。     

人类基因组及后基因组研究进展及其应用与开发研究现状

人类对自身基因组的研究,随着人类基因组工作草图的绘制完成和对基因功能研究的深入已加快进入了实质性、关键性的开发利用阶段。本文概述了人类基因组及后基因组的研究进展及依此开展基因治疗及基因（组）药物研制等应用开发研究的现状。     

CpG免疫调节序列最新研究进展

细菌等非脊椎动物的ＤＮＡ和人工合成的寡聚核苷酸（ＯＤＮ）中所包含的免疫刺激ＣｐＧ序列（ＣｐＧ－Ｓ）被抗原呈递细胞（ＡＰＣ）摄入后,经由ｐＨ依赖的胞内体酸化,产生活性氧（ＲＯＳ）,然后分别活化转录因子ＡＰ－１和ＮＦ－λＢ,激活细胞因子等基因的表达,从而刺激机体产生免疫应答,包括刺激多种免疫活性细胞分泌细胞因子,使机体产生快速高水平的抗体应答及细胞免疫应答。能产生这种刺激作用的最适序列为ＣｐＧ５’端为     

血管内皮生长因子基因对兔髂动脉内膜损伤的组织形态变化过程的影响

探讨血管内皮细胞的特异丝裂原－血管内皮生长因子（VEGF）基因阻止血管内膜损伤后形成再狭窄的组织变化过程。建立球囊拉伤血管内膜的兔髂动脉模型,将携带VEGF目的基因的真核表达载体pcDNA3/VEGF经多聚赖氨酸处理的PTCA球囊导管导入拉伤的血管内膜。VEGF基因组拉伤2周时血管内壁有VEGF mRNA和蛋白的高表达。血管内膜内皮化较快。2周时即有许多血管内皮细胞呈岛状分布。4周时内膜基本恢复光滑。内膜平滑肌细胞增生明显减少,而对照组2周时血管内膜粗糙,基底膜暴露,拉伤后4周仍无内皮细胞再生,最后形成虫蚀样改变。血管中膜平滑肌细胞穿过内弹性膜进入内膜并大量增生,内膜增厚。VEGF基因定位导入血管内壁后。VEGF mRNA和蛋白高表达且发挥其生物学效应,内皮细胞岛状增生,加快内膜内皮化,减轻内膜增厚。     

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .     

人肾细胞癌细胞阳离子脂质体的转染效率

以ＭＴＳ染色法测定实验剂量的Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对细胞的毒性作用,以β－半乳糖苷酶基因为报告基因,通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ而转染,用Ｘ－ｇａｌ染色法,测定转染效率,结果表明实验剂量（１０μｇ／ｍｌ）的Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对细胞生长无明显毒性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ对多数肾细胞癌细胞的转染是有效的,且转染效率随Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 度的增高（２．５－１０μｇ／ｍｌ）而增高,说明Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ可安     

基因组生物技术的研究现状及应用

近几年,生物技术在全世界范围取得了飞速的进展,一些重大生物研究项目如人类基因组计划、克隆技术等开始引起公众的广泛注意。本文综述了二十世纪九十年代以来基因组生物技术的发展状况,重点介绍了人类基因组计划、动物基因组程序,以及基因组学研究成果的应用。