分泌重组抗体的CHO细胞体外培养条件的优化

目的：对生物反应器细胞培养时培养时培养基组成进行优化。方法：以稳定转染了抗CD3人源化抗体的CHO细胞为模型,以无血清培养基经生物反应器高密度细胞培养后分子量小于50kDR的超滤液为基础培养基,在细胞培养板中考察添加氨基酸、丁酸钠、柠檬酸铁等多种成分对细胞生长状态和蛋白表达量的影响、结果：2mmol/L丁酸钠可以有效地诱导蛋白的表达,丁酸钠和柠檬酸铁对于促蛋白表达有协同作用,适量添加培养过程中消耗较快的氨基酸可提高细胞数和蛋白的表达量。结论：利用所述方法可快速优化培养基成分,显著提高生物反应器中细胞的蛋白表达量。     

生物技术专业应用型人才培养模式的研究与实践

生物技术专业学生,毕业后大量从事技术操作工作,例如在生物医药公司、医学院校实验室等从事实验和技术操作,面临所学知识的不断更新和技术的不断发展,做到这些必须具备良好的综合素质和创新能力。根据生物技术专业的特点,结合理工医学科优势,从适应产业发展的角度,本文主要就挖掘一体化创新人才培养新途经、夯实多元化本科知识基础和构建医学院校实践教学体系三方面为产业培养应用型人才进行探索。     

人皮肤成纤维细胞中α1(Ⅰ)前胶原基因转录调控研究

为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性 .凝胶滞留实验 (EM SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白 .基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞 ,探讨前胶原基因激活阻断的新手段 .结果表明 ,- 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp序列具有强启动调控活性 ,而 - 10 5～ + 4 2bp片段启动活性最低 .EMSA对高启动活性小片段DNA结合蛋白的分析提示 ,- 2 6 8～ + 4 2bp序列中存在转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1的特异结合位点 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 1至靶细胞可竞争性阻断胶原基因启动转录激活 .研究提示 ,人α1(Ⅰ )前胶原基因 - 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp片段有高启动活性 .转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1与 - 2 6 8～ + 4 2bp序列中相应识别序列的结合与其基础高转录活性有关 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 1可从转录水平阻断胶原基因的激活     

CT增强在结肠癌分期中的应用及联合血清CEA、CA199、 CA724及microRNA-21对良恶性病变的诊断价值

摘要 目的：探讨CT增强在结肠癌分期中的应用及联合血清CEA、CA199、 CA724及microRNA-21对良恶性病变的诊断价值。方法：将我院2018年3月至2022年3月确诊的85例结肠癌患者纳入观察组,选取同期85例结肠良性肿瘤患者纳入对照组。以病理结果为金标准,分析CT增强分期对结肠癌患者T、N、M分期的诊断价值,并比较两组的血清CEA、CA199、 CA724、microRNA-21水平,同时评估CT增强及血清CEA、CA199、CA724、microRNA-21单独及联合诊断结肠癌良恶性病变价值。结果：CT增强T分期准确率为88.2%,一致性较高（Kappa值=0.812）;CT增强N分期准确率为63.5% ,一致性一般（Kappa值=0.449）;CT增强M分期准确率为90.6%,一致性较高（Kappa值=0.739）。观察组血清CEA、CA199、CA724、microRNA-21水平均高于对照组（P<0.05）。受试者工作特征曲线（ROC）分析结果显示：CT增强及血清CEA、CA199、CA724、microRNA-21单独及联合诊断结肠癌良恶性病变的ROC曲线下的面积（AUC）（0.95CI）分别为0.783、0.722（0.497～0.944）、0.694（0.475～0.916）、0.704（0.434～0.977）、0.687（0.393～0.967）、0.917（0.829～0.982）。CT增强及联合血清CEA、CA199、CA724、microRNA-21检查恶性结肠癌患者75例,诊断灵敏度88.2%,特异性90.6%,准确性89.4%。结论：CT增强可以应用于结肠癌分期,并且CT增强结合血清CEA、CA199、CA724及microRNA-21可以有效、准确地判断结肠癌的良恶性病变情况,对提高结肠癌的诊断具有重要临床意义。     

不同海拔汉族健康人大循环及微循环特征的对比

目的: 观察青海不同海拔高度的果洛(4 100 m)和互助(2 600 m)与平原地区上海(4 m)汉族健康人大循环及微循环特征。方法: 将青海果洛28名年龄(45.62±10.15)岁、青海互助27名年龄(47.25±8.43)岁、上海20名年龄(43.12±8.28)岁的三地区汉族健康人分为:果洛组(GL)、互助组(HZ)和上海组(SH);抽取静脉血分别行血常规:红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板(PLT)的检测;凝血功能:凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(Fib)、部分凝血活酶(APTT)、凝血酶时间(TT)的检测,应用连续无创血流动力学监测仪(CNAP)连续测定连续心排量(CO)、每搏输出量(SV)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、脉压差变异率(PPV)、血管外周阻力指数(SVRI),应用脉氧监测仪测得指脉氧(SPO₂),用旁流暗视野成像(SDF)监测技术观察舌下微循环指标:总血管密度(TVD)、灌注血管密度(PVD)、灌注血管比例(PPV)、微血管流动指数(MFI)。结果: 与上海组比较,互助组和果洛组的RBC、HGB明显升高(P＜0.05),而PLT明显降低(P＜0.05);互助组的PT、Fib、APTT、TT、CO、HR、SV、MAP、SPO₂均明显降低(P＜0.05),而TVD、PVD、PPV、MFI均明显升高(P＜0.05);果洛组的HCT、 Fib、CO、SV、PPV、MAP、TVD、PVD均明显升高(P＜0.05),而PT、INR、TT、SPO₂均明显降低(P＜ 0.05)。与互助组比较,果洛在组的RBC、HGB、HCT、 Fib、APTT均明显升高(P＜0.05);而SPO₂、TVD、PVD、INR、TT均明显降低(P＜0.05)。结论: 不同海拔地区的健康人微循环具有较明显的差异,高海拔地区健康人群微循环密度较平原地区明显增加,特别是在中度海拔地区更为明显,其特殊的生理意义,对救治高原地区感染性休克及慢性高原病有指导意义。     

正交试验优选超声提取芦笋总皂苷的工艺

目的:优选超声提取芦笋总皂苷的最佳工艺。方法:以高氯酸作为显色剂,用紫外分光光度法测定芦笋中总皂苷的含量,并以提取率为评价指标,采用单因素实验和正交试验优选最佳提取工艺。结果:芦笋总皂苷超声提取的最佳工艺为乙醇浓度70%,料液比1:15(W/V),超声时间50 min,超声温度40℃。结论:该提取工艺可行,为芦笋总皂苷的进一步研究提供了依据。     

LC-MS对奥马珠单抗与其生物类似物CMAB007的分析与结构特征

哮喘是当今世界威胁公共健康的最主要的慢性肺部疾病,作为治疗中重度和难治性哮喘的特效药奥马珠单抗治疗费用相对昂贵,生物类似药CMAB007的研制可以降低治疗费用。本研究用质谱分析一种奥马珠单抗生物类似药CMAB007与原研药的一致性,分别从氨基酸分析、肽图、N/C端序列,还原质谱,寡糖含量,N糖分析等层面对CMAB007和奥马珠单抗进行了系统的比对研究,为进一步临床研究打下基础。结果表明CMAB007和奥马珠单抗氨基酸序列一致,赖氨酸剪切也基本一致,带唾液酸修饰糖形和带核心岩藻糖形比例相近,高甘露糖形比例差异不大,CMAB007略低于奥马珠单抗。因此CMAB007满足生物类似药在结构比对上一致性的要求,有望成为国内首先上市的重组抗人Ig E单克隆抗体药物。     

重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定

蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。     

Nucleostemin和PUMA在骨肉瘤细胞的表达及意义

目的研究Nucleostemin(NS)和p53上调凋亡调控因子(P53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)在骨肉瘤中的表达。探讨其表达与骨肉瘤的病理分型,临床外科分期的关系。方法收集30例骨肉瘤患者手术标本,采用免疫组织化学SABC法检测这组标本中NS和PUMA的表达,应用图像分析系统测量其阳性表达的平均光密度值。结果 1.NS蛋白定位于细胞核,NS在骨肉瘤组表达高于骨软骨瘤组(P<0.05),在骨肉瘤组随Ennking分期的递增而增加(P<0.05),NS的表达与骨肉瘤的病理分型无关(P>0.05)。2.PUMA定位于细胞质,在骨肉瘤组表达明显低于骨软骨瘤组(P<0.05),其表达与骨肉瘤Ennking分期和病理分型无关(P>0.05)。结论 NS和PUMA在骨肉瘤发生和发展过程中起着重要的作用。     

PCSK9 单克隆抗体作用机制与临床研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是前蛋白转化酶家族成员之一,它通过与肝细胞表面低密度脂蛋白受体(LDLR)结合,使体内低密度脂蛋白水平升高,引发高血脂。PSCK9抑制剂可以达到降低血脂的临床效果并已经成为重要的减少冠心病发病率的药物靶点。尤其是单克隆抗体药物,作为目前唯一的具有降脂功能的单克隆抗体,在临床试验上的表现对于家族遗传性高血脂的治疗及冠心病的防治都具有重要意义。本文将主要对PCSK9的作用机制及其单克隆抗体的研发现状、临床试验进展进行总结,旨在对降脂单抗药物研发与临床应用作为参考。