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| 重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定 | |
| 引用本文： | 郑娟,郭怀祖,李晶,段树燕,赵自叶,张大鹏,郭尚敬,王皓.重组内肽酶AspN的原核表达纯化和活性鉴定[J].生物技术通报,2015(1). |
| 作者姓名： | 郑娟 郭怀祖 李晶 段树燕 赵自叶 张大鹏 郭尚敬 王皓 |
| 作者单位： | 1. 聊城大学药学院，聊城 252000; 抗体药物与靶向治疗国家重点实验室，上海 201203 2. 抗体药物与靶向治疗国家重点实验室，上海 201203; 第二军医大学肿瘤研究所，上海 200433 3. 聊城大学药学院,聊城,252000 |
| 摘 要： | 蛋白内肽酶AspN是一种锌金属内切肽酶,能选择性切割天冬氨酸的N端肽键,广泛应用于蛋白的多肽制备及质量肽图谱鉴定。目前内肽酶AspN来源于细菌分泌,产量低,制备困难,成本高,极大地限制了该酶的应用。将脑膜脓毒性黄杆菌分泌的蛋白内肽酶Asp N所对应的基因克隆入表达载体p ET32a,导入E.coli BL21(DE3),首次运用原核表达系统进行可溶性融合表达,亲和层析对重组蛋白进行纯化。用HPLC、SDS-PAGE和荧光底物Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp对重组酶进行酶活鉴定。结果表明重组的内肽酶Asp N具有与标准品基本一致的酶切活性,能够较好地应用于生物和制药领域。 |
| 关 键 词： | 重组内肽酶AspN 原核表达 纯化 活性鉴定 |
Cloning,Expression,Purification and Characterization of Soluble Recombinant Endoproteainase AspN |
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| Zheng Juan,Guo Huaizu,Li Jing,Duan Shuyan,Zhao Ziye,Zhang Dapeng,Guo Shangjing,Wang Hao.Cloning,Expression,Purification and Characterization of Soluble Recombinant Endoproteainase AspN[J].Biotechnology Bulletin,2015(1). | |
| Authors: | Zheng Juan Guo Huaizu Li Jing Duan Shuyan Zhao Ziye Zhang Dapeng Guo Shangjing Wang Hao |
| Abstract: | |
| Keywords: | recombinant endoproteinase AspN prokaryotic expression purification activity assay |
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