绵羊肺腺瘤病毒中国NM株部分gag基因的克隆与序列分析

参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的基因序列,设计合成一对引物,对绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙株的gag基因中主要编码CA蛋白的基因段进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约897bp的特异条带,将其回收后克隆入pMD—18T载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,与南非株(基因序列号NC—001494)的gag基囚序列比较,核苷酸同源性为83％,推导出的氨基酸同源性为84％。与美国株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为81．5％,氨基酸同源性为83％。这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的一段序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。     

用不同模型估计绒山羊早期生长性状遗传参数的比较

利用内蒙古伊盟阿尔巴斯白绒山羊种羊场从1993年至2000年间白绒山羊的早期生长性状(包括出生重、断乳重、日增重和周岁重)的场内测定数据,对4种不同动物模型估计遗传参数的差异进行了比较分析。不同模型中对母体遗传效应和母体环境效应作了不同的考虑：模型I,不考虑母体遗传效应和母体环境效应;模型Ⅱ,仅考虑母体遗传效应;模型Ⅲ,仅考虑母体环境效应;模型Ⅳ,同时考虑母体遗传效应和母体环境效应。利用MTD-FREML程序采用非求导约束最大似然法(DFREML)估计各模型中的方差组分,用似然比检验对不同模型的差异进行检验。结果表明：对于出生重,母体遗传效应和母体环境效应都有极显著的影响,应采用模型Ⅳ进行分析;对于断乳重和日增重,母体遗传效应的影响不显著,而母体环境效应的影响极显著,应采用模型Ⅲ进行分析;对于周岁重,母体环境效应的影响不显著,而母体遗传效应的影响显著,应采用模型Ⅱ进行分析。     

禽白血病病毒J亚群（ALV—J）的血清学调查及PCR诊断

禽骨髓细胞性白血病 (ｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｃｏｓｉｓ) (或称禽骨髓细胞瘤 ,ｍｙｅｌｃｙｔｏｍａｔｏｍａｔｏｓｉｓ) (ＭＬ)是由禽白血病病毒 (Ａｖｉａｎｌｅｕｋｏｓｉｓｖｉｒｕｓ)Ｊ亚群 (ＡＬＶ Ｊ)引起的禽的一种肿瘤性传染病[1] ,ＡＬＶ -Ｊ是英国的Ｐａｙｎｅ于 199     

人源性天然抗体库的构建及淀粉样蛋白Aβ1-42寡聚体单链抗体的筛选和鉴定

本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体.利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段,将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,获得库容为2.5×109单链抗体库.经辅助噬菌体M13K07拯救,以可溶性Aβ1-42寡聚体为抗原,对抗体库进行4轮筛选,ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆,将筛选到的阳性克隆B19转化至E coliHB2151菌,诱导表达可溶性scFv抗体.SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示可溶性scFv抗体获得了正确表达,且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合,亲和力(Kd)为9×10-6 mol/L.Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆(AD)的治疗研究奠定了基础.     

JSRV衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定

经纯化的JSRV-CA融合蛋白乳化后免疫Balb/c小鼠,四免后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合．最终获得了三株稳定分泌单克隆抗体的细胞系．同时,分段克隆绵羊肺腺瘤病毒ca基因并构建原核表达质粒,在E． coli BL21中诱导表达．以获得的三株抗JSRV-CA蛋白的单克隆细胞分泌的McAb为一抗,应用Western blot对分段表达的CA蛋白进行肽探针扫描,初步鉴定了三株单抗识别的线性表位,并应用非竞争性ELISA法测定了三株单抗的功能性亲和常数．为建立特异性的病原诊断方法、分析CA蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础．     

IL-18在临床疾病中的作用

IL-18是新发现的一种细胞因子,它具有诱生IFN-γ的作用,在抗感染、抗肿瘤、免疫性疾病及免疫调节等诸多方面发挥着重要作用.本文就IL-18的来源、结构特点、生化性质、生物学作用及其在临床疾病中的作用做一简单综述.     

抗病毒天然免疫通路中IRF-3调控新机制

干扰素调节因子-3(interferon regulatory factor-3,IRF-3)是IRF家族中重要 转录因子之一,在调控干扰素(interferon, IFN)基因表达和抗病毒天然免疫反应中具有重要作 用. 最新发现的MITA (mediator of IRF-3 activation, 又称STING/ERIS)蛋白是宿主抗病 毒天然免疫反应中的一种重要调节分子. 病毒侵染时,MITA与IRF-3相互作用,特异性激活 IRF-3,并募集TANK结合激酶1（TANK binding kinase 1, TBK1）与IFN通路中的线粒体抗 病毒信号蛋白MAVS(mitochondrial anti-viral signaling protein)形成复合物,且MITA可 被TBK1磷酸化,诱导Ⅰ型IFN及IFN刺激基因(interferon stimulate genes, ISG)的表达 ,诱发抗病毒天然免疫反应. 同时还发现,泛素连接酶RNF5（ring finger protein 5）可对MITA 发生泛素化修饰从而抑制其对IRF-3活化,实现对宿主抗病毒天然免疫反应负调节作用. 本 室研究发现,严重性急性呼吸系统综合症冠状病毒(severe acute respiratory syndrome co ronavirus, SARS-CoV）和人类新型冠状病毒（human coronavirus NL63, HCoV-NL63）的 木瓜样蛋白酶（papain-like protease, PLP）利用其特有的去泛素化酶（deubiquitinase, DUB）活性,通过宿主细胞泛素-蛋白酶体信号系统对IRF-3的泛素化等翻译后修饰进行调节 ,从而成为该种病毒逃逸机体抗病毒防御系统主要手段之一.     

绵羊fertilin β基因编码区的钓取与结构分析

Fertilin β与精卵的结合和融合有密切关系。为探讨fertilin β蛋白在绵羊受精过程中的作用机理, 采用RACE技术, 首次钓取了该基因的编码区。结果绵羊fertilin β基因的编码区cDNA全长为2,217 bp。同源性分析显示, 绵羊的fertilin β氨基酸序列与牛、猪和人的fertilin β具有79.4%、66.7%和58.1%的同源性。系统发育分析表明, 绵羊fertilin β与牛属于同一分支, 并且也显示了绵羊和牛分类地位最近, 这和传统的分类一致。Fertilin β蛋白结构域分析显示, 绵羊fertilin β去整合素识别序列为TDE, 与牛的序列相同。除了上述三肽序列外, 紧随X-D/E-E的ECD保守序列, 从而形成了X-D/E-ECD五肽保守序列, 在绵羊fertilin β中该五肽序列为TDECE。     

2株瘤胃纤维降解细菌的分离鉴定

从日粮精粗比为3:7的小尾寒羊×蒙古羊杂交一代绵羊的瘤胃内容物中分离到2株严格厌氧细菌,一株球菌WQ-1,1株弧菌WH-2,二者对滤纸有很好的降解能力。通过酶活力试验测得WQ-1的滤纸酶活、羧甲基纤维素酶活和β-葡萄糖苷酶活分别为0.66,7.0 U/mL和15.3 U/mL;WH-2的滤纸酶活、羧甲基纤维素酶活和β-葡萄糖苷酶活分别为0.52,6.9 U/mL和17.2 U/mL。经形态学、生理生化反应、生态特性和遗传型的鉴定,WQ-1归类为瘤胃球菌属(Ruminococcus)的黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)。WH-2归类为丁酸弧菌属(Butyrivibrio)的溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolvens)。     

利用定量杂交法检测绵羊瘤胃纤维细菌的研究*

实验利用通用细菌探针和3株纤维分解菌的特异性探针,初步建立起对瘤胃细菌进行检测的16S rRNA定量杂交的方法。试验将提取的总RNA按浓度系列稀释后与通用细菌探针进行杂交,检测结果所做的回归分析表明,杂交信号与尼龙膜上的所点RNA的量具有明显线性关系。同时对几份瘤胃样品进行3种纤维分解菌的初步定量检测,结果显示3种纤维分解菌的相对丰度与前人报道相似,表明该方法能够对瘤胃细菌进行定量分析,可在后续相关研究中使用。