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由于阿尔茨海默病患者的增多及其危害性, 建立能够用于早期诊断的方法受到人们的高度关注. 脑脊液和血液中某些生物学标记物与AD的典型病理变化老年斑(senile plaques, SP)和神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles, NTFs)相关, 在临床诊断和治疗方面显示了广阔的前景, 但截止目前尚缺乏灵敏、特异的生物学标记物及分析方法用以诊断和监测疾病进程. 本文详细综述了近年来体液中阿尔茨海默病生物学标记物及其分析方法的研究进展, 鉴于其病理的复杂性, 许多问题仍有待深入研究. 相似文献
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构建可表达增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced green fluorescent protein,EGFP) 的辅助病毒依赖型腺病毒载体 (Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012 颗粒数 (Virus particle,vp) /mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体 (First generation adenoviral vector,FGAd) FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2 000 vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。 相似文献
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重组抗体药物研究进展及应用 总被引:6,自引:0,他引:6
重组抗体药物的发展经历了鼠源单克隆抗体(McAb)、人 鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体等阶段,目前初步应用于抗肿瘤、抗自身免疫病、抗感染等领域。保持和提高抗体的亲和力、降低抗体的免疫原性是抗体药物基因工程改造的两大原则。在嵌合抗体成功的基础上,通过CDR移植、表面修饰、抗体库以及转基因鼠技术,逐步提高人源化程度至100%。然而,实验室水平的研究结果与实际应用仍然存在一定差距。就重组抗体药物的基本概况、现存的问题与可能的解决办法以及在肿瘤、病毒性疾病和阿尔茨海默病治疗上的应用情况等进行了综述。 相似文献
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根据编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的开放读码框(open reading frame,ORF)设计引物,PCR方法扩增出5'端带His标签的EGF PORF,利用杆状病毒表达系统构建表达EGFP基因的重组杆状病毒DNA分子,转染sf9细胞.取细胞... 相似文献
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本研究旨在利用噬菌体展示技术构建人源性天然抗体库,以可溶性Aβ1-42寡聚体对抗体库进行筛选获得针对低分子量Aβ1-42寡聚体的特异性单链抗体.利用RT-PCR法从10个健康人外周血淋巴细胞中得到全套人抗体VH和VL基因,经过重叠延伸PCR将VH和VL连接得到scFv片段,将scFv片段酶切后克隆至pCANTAB5E噬菌体载体,电转化TG1感受态菌,获得库容为2.5×109单链抗体库.经辅助噬菌体M13K07拯救,以可溶性Aβ1-42寡聚体为抗原,对抗体库进行4轮筛选,ELISA法筛选特异性识别Aβ1-42寡聚体的阳性克隆,将筛选到的阳性克隆B19转化至E coliHB2151菌,诱导表达可溶性scFv抗体.SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示可溶性scFv抗体获得了正确表达,且能够与Aβ1-42三聚体及纤维特异性结合,亲和力(Kd)为9×10-6 mol/L.Aβ1-42寡聚体特异性单链抗体的获得为老年性痴呆(AD)的治疗研究奠定了基础. 相似文献
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目的:获得能稳定分泌抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein, F)单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)的杂交瘤细胞株,以期用于RSV感染的早期诊断和被动免疫治疗研究。方法:通过杂交瘤技术制备可特异性识别RSV F的单抗,体外鉴定生物学特性。结果:获得了可分泌抗RSV F蛋白的杂交瘤细胞株F8,体外连续传代培养2个月,能稳定分泌抗体F8,培养上清效价为1∶1000,亲和常数(Ka)为6.8×108 L/mol。F8属IgG1型抗体,可特异性识别RSV F1亚单位的AA 205-222。免疫酶法蚀斑减少中和实验证实F8具有体外中和活性及融合抑制活性。结论:获得具有中和活性的抗RSV F蛋白的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及被动免疫治疗等奠定了基础。 相似文献
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朊病毒病与阿尔茨海默病具有蛋白质异常折叠的共同特征, 患者均有痴呆的症状, 但前者具有传染性, 而后者没有. 这引起人们的研究兴趣, 从不同角度开展了二者的比较研究. 近年来, 靶向其关键蛋白PrP和Aβ的免疫治疗研究进展很快. 本文结合实际研究工作, 着眼于治疗性抗体的疾病靶向性和构象特异性等主要特征, 综述了针对PrP和Aβ治疗性抗体研究中的新视点和新策略, 以期为探索这两种疾病的共同机制及治疗方法提供参考. 相似文献
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目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗呼吸道合胞病毒F蛋白的单链抗体。方法:以RSV F蛋白为靶抗原,通过“吸附-洗涤-洗脱-扩增”过程从天然人源性噬菌体抗体库中筛选特异性抗F蛋白单链抗体。5轮筛选后,单克隆经ELISA检测,阳性克隆进行核酸序列分析,并将阳性克隆噬菌体感染E.coli HB2151,经IPTG诱导,制备抗RSV F蛋白的可溶性单链抗体,并进行Western及Dot blot分析。结果:经过筛选,获得了18株能与F蛋白特异性结合的阳性克隆,取OD值最高的克隆E4经测序并检索Kabat数据库分析,显示其基因与人免疫球蛋白可变区基因具有高度同源性,Western及Dot blot分析表明为单链抗体。结论:利用天然人源性噬菌体抗体库技术制备出高特异性的人源性抗RSV F蛋白单链抗体。 相似文献
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目的:研究中药通心络(TXL)与治疗SAMP8小鼠早期脑内淀粉样病理变化改善的相关性.方法:取4月龄雄性SAMP8小鼠,随机分为6组:SAMP8(空白对照)组、石杉碱甲(阳性对照)组、TXL低剂(治疗)组、TXL中剂(治疗)组、TXL高剂(治疗)组、SAMR1(对照)组,每组15只.于第八周末,检测海马神经元染色质聚缩情况、皮质和海马耱原沉积情况、脑内淀粉样物质沉积情况、小鼠皮质Aβ 1-42寡聚体的水平.结果:(1)HE染色结果显示SAMP8组有明显的核深染现象,通心络治疗组有改善;(2)与SAMP8对照组相比,TXL中剂组、TXL高剂组淀粉样沉积均有显著性差异(P<0.01);(3)与SAMP8组相比,TXL低剂组(P<0.05)、TXL中剂组(P<0.01)和TXL高剂组(P<0.05)PAS阳性颗粒(acid-Schiff(PAS)-positive granular structures,PGS)显著减少;(4)与SAMP8相比,TXL各治疗组Aβ 42寡聚体水平均有显著性降(P<0.01);(5)TXL治疗剂量与淀粉样沉积、糖原沉积具有相关性,TXL中剂量治疗即可达到改善的效果,而Aβ 42寡聚体聚集水平与TXL剂量有显著的线性负相关(r=-0.856,P<0.01).结论:通心络治疗能够明显改善SAMP8小鼠早期脑内淀粉样病变. 相似文献