北京油鸡α1-AGP基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA, 利用RT-PCR方法检测a1-酸性糖蛋白基因(a1-AGP)mRNA的差异表达。将a1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1, 构建带有GFP报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP, 将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 并进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: a1-AGP基因开放阅读框长度为612 bp, 编码203个氨基酸, 在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达; 转染后24、48和72 h, pEGFP- a1-AGP转染率在31.3%~47.6%之间, 绿色荧光主要集中在细胞核中, 随着表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状, 经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-a1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株, 利用RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P >0.05)。     

Gas8蛋白的抗体制备及小鼠组织表达图谱分析

目的：制备Gas8抗体,并检测小鼠各组织中Gas8表达谱。方法：在大肠杆菌BL21（DE3）中表达His标签标记的Gas8融合蛋白,以纯化的Gas8重组融合蛋白为抗原制备兔Gas8多抗血清,进一步利用亲和纯化方法制备Gas8多克隆抗体;为确定Gas8抗体的特异性,通过免疫印迹方法检测瞬时表达的Flag-Gas8融合蛋白,同时以抗Flag单克隆抗体作为对照;利用制备的抗体通过Westernblot检测Gas8在小鼠各组织中的表达谱。结果：与Gas8特异性结合的抗体能够通过免疫法获得;利用制备的抗体检测到Gas8在小鼠心、肺、肾、脑、肝、脾、肌肉、睾丸各组织中均表达。结论：获得了特异性抗Gas8抗体,用该抗体可以检测到小鼠组织中Gas8的表达。     

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的血清学调查及PCR诊断

禽骨髓细胞性白血病(myeloid leucosis)(或称禽骨髓细胞瘤,myelcytomatomatosis)(ML)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus)J亚群(ALV-J)引起的禽的一种肿瘤性传染病[1],ALV-J是英国的Payne于1991年从肉鸡中分离出来的一个新的囊膜亚群[2,3].对ALV-J的原型株,HPRS-103的致病性和传播的研究中发现,本病毒能诱导肉鸡产生骨髓细胞瘤病(ML)、肾瘤和其它多种肿瘤,死亡率为1%～2%,偶尔可高达20%.由于本病毒为ALV和禽内源性反转录病毒囊膜(E51)的重组体[4,5],因此其可通过水平传播和垂直传播迅速地感染整个鸡群,使鸡群在短时间内遭受灭顶之灾.近十年来,在许多国家,包括美国在内的肉鸡中,ML已经是引起死亡和其它生产性问题的严重原因.     

RT－PCR克隆里氏木霉甘露聚糖酶cDNA

为了省去繁杂的mRNA提取纯化过程，简便，快速，重现性好的克隆里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶cDNA，本研究依据其cDNA序列设计了一对引物F1和R1，然后用总RNA直接进行RT-PCR，其产物经过EcoRI,BamHI酶切后插入P^GEM-32克隆载体，再转化到JM109感受态细胞中，克隆转化子，酶切测序。结果获得了β-甘露聚糖酶编码的成熟肽cDNA，其序列与GenBank报道完全一样，另外，对有利于用RT-PCR克隆cDNA的高诱导产生β-甘露聚糖酶的里氏木霉RutC-30菌体培养条件进行了研究。