利用定量杂交法检测绵羊瘤胃纤维细菌的研究

实验利用通用细菌探针和3株纤维分解菌的特异性探针,初步建立起对瘤胃细菌进行检测的16SrRNA定量杂交的方法。试验将提取的总RNA按浓度系列稀释后与通用细菌探针进行杂交,检测结果所做的回归分析表明,杂交信号与尼龙膜上的所点RNA的量具有明显线性关系。同时对几份瘤胃样品进行3种纤维分解菌的初步定量检测,结果显示3种纤维分解菌的相对丰度与前人报道相似,表明该方法能够对瘤胃细菌进行定量分析,可在后续相关研究中使用。     

牛卵母细胞孤雌激活及马-牛异质克隆胚构建

首先用不同的激活剂孤雌激活体外成熟培养的牛卵母细胞,经试验获得:离子霉素、A23187和7%乙醇联合6-DMAP可有效地激活牛卵母细胞,并支持其发育到囊胚,但离子霉素激活效率显著优于其他两种(P<0.05);以10?S SOFaa 颗粒细胞为发育体系培养激活的成熟牛卵母细胞可得到较高的卵裂率和囊胚率(72.30%,14.91%)。其次,通过体外培养成年马皮肤成纤维细胞,将获得的成纤维细胞经血清饥饿培养后,作为核供体移入去核牛卵母细胞透明带下,电融合后,能得到融合的马牛重构胚,在交流电脉冲起始电压20V,持续时间10s,频率0.2MHz,结束电压15V,2次脉冲和融合间隔为0.125s的条件下,当融合电压为2.0kV/cm,脉冲时程为40μs时,重组胚的融合率和卵裂率最高(52.27%,71.74%)。     

乳酸杆菌对攻毒小鼠的保护作用和对肠道菌群的影响

将含有乳酸杆菌Lactobacillus casei Zhang的悬浮液分组饲喂小鼠,然后分别用E.coliO157和K88攻毒观察发病情况。攻毒4d后取对照组和喂菌组未死亡小鼠的肠内容物,用选择性培养基分离纯化大肠杆菌和乳酸菌,提取分离到菌株的总DNA,进行ERIC-PCR扩增分析。发现灌服L.casei Zhang可以降低攻毒后小鼠的死亡率,在停止饲喂乳酸菌的第4d从小鼠肠道内分离到L.casei Zhang,从饲喂组未分离到E.coliO157和K88,喂L.casei Zhang使小鼠肠道中大肠杆菌总数极显著低于对照组。表明所饲喂的乳杆菌可以在小鼠肠道内定殖并对小鼠起到保护作用。     

嗜酸乳杆菌MG2_1对大鼠血清脂质代谢的影响研究

利用从蒙古国酸马奶中分离鉴定,并通过耐酸性及体外降胆固醇能力测试筛选获得的L.acidophilusMG2_1菌制备成活菌体和热致死菌体制剂与高脂饲料同时灌喂Wistar系大鼠,研究探讨了对其血清脂质代谢的影响。结果显示,试验第14天时菌活菌体组和热致死菌体组与单纯饲喂高脂饲料对照组比较,对大鼠血清胆固醇浓度的上升分别呈现显著(p<0.05)和极显著的抑制效果(p<0.01),其热致死菌体组大鼠血清HDL_C,显著高于高脂饲料对照组(p<0.05)。并且各试验组大鼠动脉硬化指数均极显著地低于高脂饲料对照组(p<0.01)。热致死菌体组大鼠粪便中总胆汁酸含量也显著高于高脂饲料组(p<0.05)。可见,该菌株具有一定的抑制大鼠血清胆固醇含量上升和预防动脉硬化的作用。但在整个试验期内不改变灌服菌液剂量的情况下,随着试验时间的延长,该菌株对大鼠血清脂质的影响呈减弱趋势。     

Gas8蛋白的抗体制备及小鼠组织表达图谱分析

目的：制备Gas8抗体,并检测小鼠各组织中Gas8表达谱。方法：在大肠杆菌BL21（DE3）中表达His标签标记的Gas8融合蛋白,以纯化的Gas8重组融合蛋白为抗原制备兔Gas8多抗血清,进一步利用亲和纯化方法制备Gas8多克隆抗体;为确定Gas8抗体的特异性,通过免疫印迹方法检测瞬时表达的Flag-Gas8融合蛋白,同时以抗Flag单克隆抗体作为对照;利用制备的抗体通过Westernblot检测Gas8在小鼠各组织中的表达谱。结果：与Gas8特异性结合的抗体能够通过免疫法获得;利用制备的抗体检测到Gas8在小鼠心、肺、肾、脑、肝、脾、肌肉、睾丸各组织中均表达。结论：获得了特异性抗Gas8抗体,用该抗体可以检测到小鼠组织中Gas8的表达。     

北京油鸡α1-AGP基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA, 利用RT-PCR方法检测a1-酸性糖蛋白基因(a1-AGP)mRNA的差异表达。将a1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1, 构建带有GFP报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP, 将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 并进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: a1-AGP基因开放阅读框长度为612 bp, 编码203个氨基酸, 在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达; 转染后24、48和72 h, pEGFP- a1-AGP转染率在31.3%~47.6%之间, 绿色荧光主要集中在细胞核中, 随着表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状, 经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-a1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株, 利用RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P >0.05)。     

利用相似致病菌中保守的致病菌特有基因预测新的毒力相关基因

目的:在致病机制相似的致病菌中寻找保守的致病菌特有基因,预测新的毒力相关基因。方法:首先选取致病机制相似的致病菌EHEC与EPEC,利用本实验室构建的包含115 152条致病菌特有基因片段的数据库进行本地Blast,得到致病菌特有基因,对致病菌特有基因在相似致病菌中的保守性进行分析,得到新的可能的毒力相关基因。结果:在6株EHEC菌中找到95条保守的致病菌特有基因,其中大部分为已知的毒力相关基因,还有许多可能的毒力相关基因;在9株相似致病菌(EHEC、EPEC)中找到10条保守的致病菌特有的蛋白基因,其中9条为已知的致病相关基因,1条为可能的致病相关基因。结论:应用本方法可以发现新的毒力基因,为后续对致病菌致病机制的实验研究奠定了基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJBLZ株序列剖析

预测与分析HP-PRRSV BJBLZ株序列特点,为进一步该毒株的研究做准备.利用分子生物学软件及服务器,对HP-PRRSV BJBLZ株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示HP-PRRSV BJBLZ株至少可划分12个非结构蛋白和6个结构蛋白;同源性比较显示GP3和GP5蛋白变异性高,M和N蛋白保守.GP3、GP5和M蛋白糖基化位点与参考株有变化,GP2、GP4和N蛋白糖基化位点与所有参考株一致.服务器预测显示,N蛋白的碱性氨基酸比例明显高于其他蛋白,总平均亲水值明显低于其他蛋白;GP2、GP3和GP4蛋白不稳定,GP5、M和N蛋白稳定.6个结构蛋白预测不溶性概率均占66％以上,GP3不溶性概率最高.可以利用以上一些不同于以往各代表株的特点,为PRRS的诊断和防治进行进一步的研究.     

家鸽不同组织同工酶的初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对家鸽不同组织的酯酶同工酶、乳酸脱氢酶同工酶的酶谱进行了观察和试验分析。计算了家鸽8种组织酯酶同工酶各自酶带的Rf值。显示出家鸽8种组织的酯酶同工酶酶带和7种组织的乳酸脱氢酶同工酶酶谱分布特征具有明显的组织特异性。初步分析了基因位点与酶谱带型之间的相互关系,对于鸟类的生化分析和遗传研究有参考作用。     

利用错配碱基产生酶切位点快速检测禽类Mx蛋白基因单核苷酸改变

该方法针对无合适酶切位点的检测位点设计引物,应用于禽类Mx蛋白基因631位氨基酸位点的突变检测,利用错配碱基产生内切酶识别的酶切位点检测SNP,尝试一种操作简便结果可靠的检测单核苷酸多态性并能快速判定631位点氨基酸的方法.实验结果表明,利用这种方法产生的酶切位点能有效地对631位氨基酸位点进行分型,可以快速检测SNP.