Southern十字转印杂交法——一个组建DNA物理图谱的最新技术

New England Nuclear(NEN)公司1984年推出一个组建DNA物理图谱的最新方法：Southern十字转印杂交系统。其构思之巧、效率之高、结果之精为其他方法所望尘莫及。此法是将一个限制酶的消化物制成放射性探针,与另一个酶的消化物分别进行制备性电泳,并转印到特制的膜上。将两膜面对面、垂直的叠合进行固体杂交。经放射自显影后,在一张X光片上可直接排出各片段的顺序,组建成这两个酶的物理图谱。一次实验甚至可完成十个酶物理图谱的组建。     

大尺蠖核多角体病毒DNA的限制性消化和物理图谱

用5种限制性核酸内切酶消化大尺蠖核多角体病毒(BsNPV)基因组DNA,所得片段数分别是:BamH Ⅰ,9;Bgl Ⅱ,7;Xho Ⅰ,10;HindⅢ 13;EcoR Ⅰ,12,从各个片段的累加测出BsNPV基因组的平均大小约为91,75kb;分子量约为59.60×10~6d。在单酶消化的基础上,用BamH Ⅰ/Bgl Ⅱ双酶消化得到16个片段(即9+7);大小为91,27kb,用、Bgl Ⅱ/Xho Ⅰ双酶消化产生7+10=17个片段,大小为90.04kb,由此组建了这三个酶在BsNPV基因组上的物理图谱。     

DNA顺序的dd×TP链终止法测定

用Messing的M13克隆系统和sanger的ddxTP链终止法,测定了酵母线粒体DNA片段的核苷酸顺序。为了提高在一张x光胶片上的阅读水平,作者对sanger法的某些操作进行了适当修正。通过降低ddxTP／dxTP的用量比率、多次加样以及合理掌握两次加样的间隔时间和电泳结束时间、ss—DNA模板的筛选等措施,在一张17×80cm的x光胶片上的阅读水平达到394bp,从而测出了酵母线粒体DNA细胞色素b基因的一个大片段为709bp。     

紫外线诱发白地霉(Geotrichumcandidum)变異的研究

(一)研究了紫外线照射的剂量与白地霉AS 2．361存活率和变异率的关系,存活率是随着剂量的增加而降低,变异率则随着剂量的增加而增高,井达到最高峯;当继续增加剂量时变异率就下降,当剂量达到最高时变异率重新上升,而获得双峯曲线。出现最大变异频率的最适剂量为距离在25厘米照射时间为5分钟。 (二)共研究了10761个菌落,得到形态变异菌落6…60个,变异性最大的有360个,分为六个类型：第一类型是凉帽状菌落;第二类茵落干癣而薄,表面满布针状小孔;第三类菌落紧密;第四类为中部下陷成空窗状菌落;第五类菌落茸毛短而稀疏;第六类菌落厚,中部呈梗状突起。其中以照射5分钟出现的类型和菌落都最多,照射1分钟最少。 (三)白地霉As 2．361经单次紫外线照射结果,筛选出的形态变株中能显著增高菌体内脂肪和蛋白质的含量。所测20个变株中,其脂肪合量全部高于原始菌株,有65％的变株增高了蛋白质含量。2次照射后所选出变株蛋白厦含量又有提高,脂肪情况刖相反。3次照射,蛋白质含量下降,而脂肪增高。     

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框,该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液,４种ｄＮＴＰ底物,逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作,实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用,这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可     

甜味蛋白研究的新进展

甜味蛋白(thaumatin)是世界上已知最甜的物质,具有很大的应用前景.Thaumatin的基因核苷酸和蛋白质氨基酸序列都已测定.晶体分析表明它具有高稳定的四级结构.在味蕾小孔中发现了介导thaumatin发生作用的物质.Thaumatin自身的功能仍不清楚.在多种生物中发现了thaumatin类似蛋白质,具有不同的生物活性.用基因工程手段实现了thaumatin在多种原核和真核生物中的表达,但迄今仍未得到理想的基因工程产品.     

泸州大曲酒窖泥中微生物的生态分布和嫌气发酵特征

在泸州大曲酒新窖老熟的研究方面,我们对酒窖窖泥中细菌的生态分布及嫌气性细菌的代谢活动作了一些探讨,本文主要报道这方面