广西产金环蛇(Bungarus fasciatus)蛇毒中类心脏毒素物理化学性质的研究

前文我们报道了广西产金环蛇蛇毒中类心脏毒素a 及b 的分离。本文就它们的物理化学性质作了进一步研究。二种毒素氨基酸组成十分相似,通过凝胶过滤,测得它们的分子量分别为15,900和12,100。它们N 端的二个氨基酸顺序完全相同,为Gly·Leu…。经羧肽酶A降解测得它们的C 端顺序为……Ala·Cys·Tyr。等电聚焦测得它们的等电点分别为8.8和9.2。紫外吸收光谱显示它们279nmE_(1厘米)~(1%)分别为11.7和12.7。     

眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)蛇毒四个神经毒组份的纯化和某些性质的研究

根据前文报导的方法(蔡景霞等人,1980),用羧甲基纤维素葡聚糖凝胶C25分离我国广西眼镜王蛇(Ophiophasus hannah)蛇毒,获得十七个蛋白组份。其中组份7、8、9和11蛋白回收率比较高,且具有明显的抗去极化神经肌肉阻遏作用。 由于它们还含有磷酸单酯酶,磷酸二酯酶,5'—核苷酸酶和核糖核酸酶等酶活性,我们进一步用羧甲基纤维素CM32和葡聚糖凝胶G50纯化了组份7、8、9和11。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,它们均为单一条带,且具有神经肌肉阻遏作用,没有磷酸单酯酶等酶活性。随后测定了它们的氨基酸组成和N—末端氨基酸。根据离体大白鼠膈神经膈肌标本和去神经大白鼠膈肌标本实验和氨基酸组成测定结果表明,眼镜王蛇毒似乎既含长链神经毒也含短链神经毒,它们的作用部位是在神经肌肉突触后膜,对突触前膜没有影响,都是突触后神经毒素。     

胰岛素及其类似物缔合行为及酪氨酸微环境的比较研究

用三种紫外差光谱技术对Ins、DPI、DOI 分子缔合行为及酪氨酸微环境进行了比较研究。结果显示DPI、DOI 与Ins 一样,存在着随pH 与浓度的缔合。表明与β-折迭结构相比,疏水相互作用在分子缔合中起主要作用。但从Ins 的缔合能力较DPI、DOI 强,可认为β-折迭对维持二体的稳定仍有重要作用。溶剂微扰结果显示,在1mg/ml 所研究的三个pH(1.8,3.5,7.5),Ins 存在的最小单位是二体,而DPI、DOI 在pH 1.8,7.5主要以单体形式存在,但在pH 3.5则呈现强烈缔合并导致一个酪氨酸由暴露到埋藏的变化。DPI 有一个位于缝隙中的酪氨酸残基,它仅能为重水微扰,而不能被DMSO 微扰,推测它是A_19酪氨酸。微扰研究还表明Ins 与DPI 和DOI 在缔合及pH、浓度差光谱产生的机理上有所不同。在所研究的条件下,Ins 缔合是从二体到六体的过程,这一过程仅导致二体间A_(14)酪氨酸氢键形成,并不涉及酪氨酸暴露与埋藏的变化。而DPI 和DOI 则是从单体到二体(或更高聚体)的过程,这一过程涉及酪氨酸由暴露到埋藏的变化。pH 滴定的结果未发现Ins、DPI、DOI 酪氨酸滴定行为的不同。     

胰岛素及其类似物缔合行为及酪氨酸微环境的比较研究

用三种紫外差光谱技术对Ins、DPI、DOI分子缔合行为及酪氨酸微环境进行了比较研究。结果显示DPI、DOI与Ins一样,存在着随pH与浓度的缔合。表明与β-折迭结构相比,疏水相互作用在分子缔合中起主要作用。但从Ins的缔合能力较DPI、DOI强,可认为β-折迭对维持二体的稳定仍有重要作用。溶剂微扰结果显示,在1 mg/ml所研究的三个pH(1.8,3.5,7.5),Ins存在的最小单位是二体,而DPI、DOI在pH 1.8,7.5主要以单体形式存在,但在pH 3.5则呈现强烈缔合并导致一个酪氨酸由暴露到埋藏的变化。DPI有一个位于缝隙中的酪氨酸残基,它仅能为重水微扰,而不能被DMSO微扰,推测它是A_(19)酪氨酸。微扰研究还表明Ins与DPI和DOI在缔合及pH、浓度差光谱产生的机理上有所不同。在所研究的条件下,Ins缔合是从二体到六体的过程,这一过程仅导致二体间A_(14)酪氨酸氢键形成,并不涉及酪氨酸暴露与埋藏的变化。而DPI和DOI则是从单体到二体(或更高聚体)的过程,这一过程涉及酪氨酸由暴露到埋藏的变化。pH滴定的结果未发现Ins、DPI、DOI酪氨酸滴定行为的不同。     

会议报导

国际基因工程与生物技术中心(ICGEB)于1988年3月21日—25日在意大利,里亚斯特市,国际理论物理中心召开“从蛋白质结构到蛋白质工程”学术研讨会。研讨会来自24个国家89名科学家参加,13人在大会上作了报告。中科院生物物理所王家槐、雷克健,复旦大学王启松代表863生物技术专家委员会参加了会议。王家槐在会上介绍了本实验室蛋白质结构的研究成果。国际理论物理中心主任,1979年诺贝尔奖获得者萨拉姆教授作了“基本力的统一”     

[Trp]~(B_1)胰岛素结构研究——Ⅱ.差值傅立叶法结构分析

在四圆衍射仪上收集了猪和牛[Trp]~(B_1)胰岛素单晶体3.1埃分辨率的衍射数据,并计算获得了这两个胰岛素类似物对猪胰岛素的差值电子密度图。这两套图的特点基本上相似,B_1-Trp残基附近密度变化较大,从密度的形状与连续性看来,在不对称单位的两个分子中,分子Ⅰ的色氨酸侧链似乎指向分子内部。在本文的最后部分对所得到的结果作了讨论。     

胰岛素B_(26-30)五肽的二维核磁共振研究

用同核相关谱(HOMCOR)和NOE相关谱(NOESY)在D_2O中完成了胰岛素B_(26-30)五肽共振峰的归属.对其溶液构象进行了初步分析.     

蛋白质工程及其展望

一、蛋白质工程的产生及主要内容 人们在研究蛋白质结构与功能关系时,通常通过造成结构上的改变然后观测相应功能的改变,以弄清某一功能的结构基础,从而达到创造具有某些有经济效益的新性质的蛋白质。