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齐义鹏 《Virologica Sinica》1990,(4)
第五届国际无脊椎动物病理和微生物防治学术讨论会于1990.8.20~24日在澳大利亚阿德赖德市举行。大会收到论文243篇,其中昆虫病毒43篇,会议代表266人,来自世界27个国家和地区。我国提供论文14篇,出席代表4人。大会由阿德赖德大学的Pinnock教授主持。开幕式上由著名的昆虫病毒学者、加州大学的Federici教授作了题为“无脊椎动物病理学的光明前景”的大会报告。会议分为28个专题,与昆虫病毒有关的有细胞培养,流行病和生态学,GV,NPV,分子生物学和基因工程等五个专题。Miller作了分子杆状病毒学、激素调控及病毒杀虫剂的改进;Maeda:利用杆状病毒载体在昆虫 相似文献
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质粒的提取与纯化是基因工程的重要内容。我们用昆虫杆状病毒BsNPV DNA的Bam HI片段与质粒pBR322重组得到重组体pBSa18和pBSb36。用LB摇床培养。 质粒pBR322 DNA用Gonzalls等(1980)的常规法提取。重组质粒的提取是离心40ml培养液收获细胞,加pH7.8 4×TEA缓冲液50ml,GSE(甘油50%,SDS 5%,EDTA0.1M)18ml,70℃保温10分钟,-20℃冷冻过夜,次日在4℃离心12 000r/min15分钟,取上清直接进行制备性琼脂糖凝胶电 相似文献
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昆虫杆状病毒表达系统中阳性重组病毒的筛选 总被引:2,自引:0,他引:2
近年来,随着杆状病毒表达系统的普遍应用,阳性重组病毒筛选方法也有了很大的改进,从过去的经验性的ocu+/ocu-空斑表型筛选发展到根据颜色差异,药物抗性,抗生素抗性等等筛选重组病毒.同源重组过程也可在大肠杆菌或酵母甚至体外进行,大大提高了重组率,由于重组率是如此之高,有些方法可以免去繁琐的空斑选择,很快得到重组病毒的纯培养.文章对各种筛选方法进行了比较,并指出各自的优缺点. 相似文献
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截短和融合的绿色荧光蛋白的表达及其荧光特性 总被引:1,自引:0,他引:1
水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 (GFP)是一种能发射强烈荧光的特殊蛋白质 ,其荧光的产生是由于内部第 6 5~ 6 7位的Ser -Tyr- Gly自身环化和氧化形成生色基团的缘故 .Ser6 5→Thr(简称S6 5T)突变型的荧光强度较野生型GFP高出6倍 ,并且其激发波更长 ,肉眼可见发出的强烈荧光 .将 gfpS65TP基因从 3′端截短 36bp ,不影响GFPS65T的荧光特性 ,但当截短到 2 2 5bp时 ,几乎失去了荧光特性 .将HBVe抗原基因与突变型 gfpS65TP融合 ,发现其激发光谱又回复到野生型状态 .虽然其荧光强度与 gfpS65TP相似 ,但发射波谱变宽且肉眼不能观察 .若将表达这种融合蛋白的菌落在低温下存放数日 ,则又恢复了它肉眼可见的绿色荧光 .以上结果说明GFP的发光机制除与生色基团有关外 ,也与GFP分子的构象完整性和分子内微环境有关 ,野生型GFP与HCVCore抗原的融合也证实了这一点 . 相似文献
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用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白 总被引:2,自引:0,他引:2
用细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白(GFP)与HCV抗原的双功能融合蛋白,经ELISA测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HCV的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础. 相似文献
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杆状病毒的垂直传播及绿色荧光蛋白在棉铃虫幼虫中的表达 总被引:7,自引:1,他引:6
用转座穿梭系统构建了携带绿色荧光蛋白基因(gfp)的重组棉铃虫核型多角体病毒rHa-FGP,以其多角体添食感染棉铃虫3龄幼虫,室内饲养3代,各代均可见自然光下发绿色荧光的棉铃虫幼虫,其中子代不再重复感染。F0、F1、F2代发绿色荧光的棉铃虫幼虫所占百分比分别为34%、20%、8%。提取虫体内的病毒多角体DNA,以PCR和斑点杂交鉴定表明,gfp不仅在亲代棉铃虫体内正常表达,而且在子代幼虫中表达,HaNPV通过卵实现了垂直传播。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献