PCR 扩增Sry 基因进行鲸类动物性别的鉴定

哺乳动物Y染色体短臂上的Sry 基因决定雄性发育方向。本研究参照哺乳动物Sry 基因保守区序列设计引物, 以非性别特异性的线粒体DNA 细胞色素b 基因作为阳性对照, 用PCR 扩增江豚、长喙真海豚等鲸类动物的Sry 基因片断并对其进行凝胶电泳分析来鉴定鲸类动物的性别。通过此方法对87 个已知性别鲸类动物标本的检验, 结果完全正确, 并进一步应用此方法成功地完成了另外33 个未知性别鲸类标本的性别鉴定。由此建立了一套简单、快速、可靠的鲸类动物的性别鉴定方法。     

人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定

研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达。设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1．8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达栽体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GS115中,经MD／MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P．patstoris菌22株。依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4．0mU／ml,表达量占分泌蛋白总量的23．6％。     

胎鼠脊髓源性神经干细胞分离培养与鉴定

目的:研究胎鼠的脊髓源性神经干细胞的分离培养方法并观察其增殖和分化能力。方法:利用显微操作技术分离获得胎鼠脊髓组织、无血清培养技术和酶消化法结合机械法传代培养神经干细胞、免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞和分化情况。结果:建立了胎鼠脊髓源性神经干细胞的分离、培养和鉴定的方法,观察到了脊髓源性神经干细胞具有较强的增殖能力,在添加有5ng／mlEGF和5ng／mlbFGF的无血清培养液中可贴壁分化为神经元、少突细胞和星形胶质细胞。结论:在体外培养条件下分离培养的胎鼠脊髓源性神经干细胞具有干细胞的特性即较强的增殖能力和多向分化潜能。     

美洲大蠊主要变应原蛋白的质谱鉴定与分析

为了建立美洲大蠊Periplaneta americana变应原蛋白的质谱鉴定方法,我们将美洲大蠊粗浸液通过DEAE-52离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析等分离步骤得到纯化的74 kD蛋白,对纯化前后的该74 kD蛋白分别进行SDS-PAGE及凝胶内胰酶酶切,再经液相色谱-电喷雾-串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）在线联机分析,所得质谱数据进入网站（http://www.matrixscience.com）进行Mascot检索比对。通过对两者质谱鉴定结果的比较来评估美洲大蠊天然主要变应原蛋白的纯化效果。结果表明,纯化蛋白经HPLC-ESI-MS/MS鉴定是美洲大蠊主要变应原蛋白;离子交换层析等纯化步骤可以去除同一分子量的杂蛋白(如卵黄原蛋白),从而获得较好的鉴定结果。我们首次成功地运用质谱建立起变应原蛋白的新鉴定方法。     

菜籽饼粕粗蛋白降解菌的筛选、初步鉴定与发酵条件摸索

在接种了本实验室保存的诱变菌株A的未灭菌的菜籽饼粕发酵样品中筛选得到3株能以 菜籽饼粕为原料生长的菌株,编号为S₁、S₂、S₃,菌株A和这3株菌种通过鉴定确定为凝结芽孢杆 菌、圆孢芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和球形芽孢杆菌。通过设计正交实验摸索出这4株菌种的最佳 培养条件。并对饼粕固体混合菌发酵进行了初步摸索和探讨。     

普通枇杷、大渡河枇杷和栎叶枇杷遗传关系研究——基于RAPD和AFLP分析

利用筛选得到的24个随机引物和5对AFLP引物组合对普通枇杷、大渡河枇杷及栎叶枇杷的遗传关系进行RAPD及AFLP分析,结果表明,普通枇杷与栎叶枇杷的相似性系数最小(0.3864和0.5364),而大渡河枇杷介于普通枇杷和栎叶枇杷之间,偏向于栎叶枇杷。分别以普通枇杷、大渡河枇杷和栎叶枇杷作为待定杂种,计算了三者谱带的叠加性,结果表明,无论是RAPD分子标记,还是AFLP分子标记,以大渡河枇杷作待定杂种获得最高叠加性,支持大渡河枇杷可能是普通枇杷与栎叶枇杷的杂交种的结论。     

热带太平洋深海微生物抗肿瘤活性的初步研究

以４个人体癌细胞株为模型、利用四甲基偶氮唑盐（Methyl Thiazolyl blue Tetrazolium bromide,MTT）比色法和磺酰罗丹明（SulfoRhodamine B,SRB）染色法对55株来自于热带太平洋深海微生物（细菌和霉菌）的培养液的乙酸乙酯抽提物以及菌体的甲醇提取物进行了细胞毒活性筛选,并主要采用分子生物学方法鉴定了该批菌株. 结果表明,55株微生物发酵样品共１１０个提取物中,９０％样品表现出细胞毒活性;其中13株微生物的活性较强（提取物有效抑制浓度≤16μg/ml）,具有较好的开发应用前景。同时还发现,菌体中检测到的活性菌株数大于发酵液中检测到的活性菌株数, 细菌的筛选得率高于霉菌的筛选得率.鉴定结果显示, 50株微生物分属于21属、29种,其中１３个较高活性菌株来源于８个属。本文为我国深海微生物资源的开发利用,提供了探索性研究信息。     

BIOLOG系统鉴定黄瓜根围促生菌的初步研究

对筛选出的８株具有明显促生防病作用的黄瓜根围促生菌ＣＮ１１,ＣＮ３１,ＣＮ４５,ＣＮ１ １６,ＣＮ１２９,ＸＢ１２０,ＸＢ５,ＸＢ４１通过ＢＩＯＬＯＧ法进行了分类鉴定,分别为：铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｎｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）,波纹假单胞菌（Ｐ． Ｃｏｒｒｕｇａｔａ）,短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）,荧光假单胞菌Ｂ型（Ｐ． Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ｔｙｐｅ Ｂ）,铜绿假单胞菌（Ｐ． Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）,荧光假     

一步法提取植物DNA用于大规模RAPD分析

ＲＡＰＤ技术已广泛地用于植物的系统演化、种群多样性、群体遗传学及杂种种子纯度的鉴定等工作中〔１～３〕。本文基于快速节省的原则对碱液法提取植物ＤＮＡ进行一些改进。１材料与方法ＤＮＡ提取方法取１０～２０ｍｇ幼叶 ,加１００μｌ０ ５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ（或附加０ ５ %～１ ５ %巯基乙醇）研磨后 ,取４０μｌ研磨液加入２００μｌ１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ７ ６缓冲液（或附加０ ５%不溶性聚乙烯吡咯烷酮 ,ＰＶＰ）中 ,８０００×ｇ离心５ｍｉｎ,上清液即可用于ＰＣＲ反应。ＰＣＲ反应体系含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉ…     

用RAPD技术对特化等级裂腹鱼类新缘关系的探讨

为确定特化等级裂腹鱼类的遗传分化关系,对７种２２个裂腹鱿个体进行随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）研究。从所使用的４０个随机引物中,选择了３７个扩增带谱清晰的引物进行分析。根据构建的分子系统树显示,特化等级裂腹鱼类划分为３个属级分类单元较为合适,这与采用形态学特征进行系统分析所得出的结论一致。在２２个个体之间遗传距离矩阵中,最大的跗距离指数达到了９０．３８％,此外,还有较多的跗距离指数也在６０％￣９０