| 人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 马兴元,谭建华,魏东芝,朱平,孙曼霁.人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定[J].中国生物工程杂志,2005,25(7):54-60. |
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| 作者姓名： | 马兴元 谭建华 魏东芝 朱平 孙曼霁 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室, 长春 130062;
2. 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237;
3. 军事医学科学院毒物药物研究所, 北京 100850 |
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| 基金项目： | 全国“十五”医药卫生科研基金重点资助项目(01-Z-023) |
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| 摘 要： | 研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达。设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1．8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达栽体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GS115中,经MD／MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P．patstoris菌22株。依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4．0mU／ml,表达量占分泌蛋白总量的23．6％。
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| 关 键 词： | 人脑乙酰胆碱酯酶 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 酶活性鉴定 |
| 收稿时间： | 2004-10-22 |
| 修稿时间： | 2004年10月22 |
Secretory Expression and Identification of Acetylcholinesterase(AChE) Gene From Human Brain in Pichia pastoris |
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| MA Xing-yuan,TAN Jian-hua,WEI Dong-zhi,ZHU Ping,SUN Man-ji.Secretory Expression and Identification of Acetylcholinesterase(AChE) Gene From Human Brain in Pichia pastoris[J].China Biotechnology,2005,25(7):54-60. |
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| Authors: | MA Xing-yuan TAN Jian-hua WEI Dong-zhi ZHU Ping SUN Man-ji |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human brain AChE Pichia pastoris Secretory expression |
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