人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定

研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达。设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1．8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达栽体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GS115中,经MD／MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P．patstoris菌22株。依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4．0mU／ml,表达量占分泌蛋白总量的23．6％。     

ICR系雄性小鼠月龄对体外受精的影响

目前 ,小鼠体外受精技术越来越完善 ,已被广泛应用于其他生物工程技术领域。以往在体外受精时 ,通常使用性成熟的小鼠。而有关适合体外受精的雄性小鼠的月龄期限的研究尚未见有报道。为了确定适合小鼠体外受精的雄性小鼠的月龄期限 ,本研究探讨了雄性小鼠的月龄对体外受精的影响。1　材料与方法1 1　实验小鼠　选择 2～ 14月龄的ＩＣＲ系雄性小鼠和性成熟ＩＣＲ系雌性小鼠 (5～ 8周龄 )。1.2　体外受精　采用颈椎脱椎法宰杀实验用雄性小鼠后 ,采取附睾尾精子 ,用经二氧化碳培养箱 (37℃ ,5 %ＣＯ2 ,95 %空气 ,加湿 )中预平衡 12ｈ以上的 16…     

GnRH脉冲模式对FSH分泌的影响

本文目的是进行GnRH脉冲模式对FSH分泌影响的研究。用GnRH以不同的脉冲振幅、不同的频率对GTH细胞进行刺激后,检测FSH的24 h分泌量。结果表明,FSH的24 h分泌量,以频率为120 min、振幅20 nmol/L时的GnRH脉冲模式为最高,并且随着GnRH刺激频率的增快或减慢,FSH的分泌量均呈逐渐减少趋势。所以,GnRH脉冲频率本身就是一个调控信号,不同脉冲频率GnRH对FSH表达有着明显不同的影响,在相同振幅条件下,低频脉冲刺激(120 min间隔)时FSH的分泌达到高峰。     

PMSG、E_2、PGF_(2α)和hCG组合处理对初情前蓝狐卵巢和子宫的影响

为了完善提高狐狸繁殖效率的超排技术,探讨了用PMSG、E2、PGF2α和hCG的不同组合处理对诱发初情前雌性蓝狐发情及其对卵巢和子宫发育的影响.EPP组(E2、PMSG和PGF2α组合)和EPPh组(E2、PMSG、PGF2α和hCG组合)分别有2只和3只发情,而对照组未见发情;EPP和EPPh组卵巢指数和有腔卵泡百分率显著高于对照组(P<0.05),而初级卵泡所占百分率则显著低于对照组.此外,EPPh组次级卵泡所占百分率与对照组相比显著降低(P<0.05);当用EPP和EPPh法处理雌性蓝狐后,子宫指数、子宫壁和子宫内膜厚度显著高于对照组(P<0.05).结果 表明,EPP和EPPh处理不仅具有诱发雌性蓝狐发情的功效,而且能够提高初情前雌性蓝狐卵巢指数和增加有腔卵泡数量.     

大鼠GTH细胞内cAMP的改变对LH分泌的影响

将GTH细胞用FSK(cAMP兴奋剂)或SO22,536(cAMP抑制剂兴奋剂)处理后,用GnRH脉冲刺激,再用ELISA法检测其LH分泌量,并与空白对照组比较。结果表明,FSK能显著提高GTH细胞中cAMP含量,SO22,536能显著降低GTH细胞中cAMP含量,FSK和SO22,536都不会影响GTH细胞的PKC活性,GTH细胞cAMP含量显著影响LH的分泌,LH随着cAMP的升高而升高,随着cAMP的降低而降低。cAMP-PKA是GnRH脉冲刺激所引起LH分泌受体后的信号转导途径。     

改变大鼠促性腺激素细胞内cAMP含量对卵泡刺激素分泌的影响

目的:分析大鼠卵泡刺激素(FSH)分泌的受体后信号转导机制。方法:将促性腺激素(GTH)细胞用毛喉素(FSK)或腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理后,用促性腺激素释放激素脉冲刺激,再用酶联免疫吸附法检测其FSH分泌量,并与空白对照组比较。结果:FSK能显著提高GTH细胞中环磷酸腺苷(cAMP)含量,SQ22536能显著降低GTH细胞中的cAMP含量,FSK和SQ22536都不会影响GTH细胞的蛋白激酶C活性,GTH细胞cAMP含量的变化对FSH分泌的影响不显著。结论:cAMP-PKA(蛋白激酶A)不是FSHβ亚基分泌的受体后信号转导途径。     

大鼠垂体促性腺激素细胞内cAMP的改变对LHβ mRNA表达的影响

目的 分析大鼠LHβ mRNA表达的促性腺激素释放激素(GnRH)受体后信号转导机制.方法 将体外培养的大鼠腺垂体促性腺激素(GTH)细胞用cAMP的兴奋剂FSK或抑制剂SQ22536处理后,再用高频GnRH脉冲刺激,然后用实时荧光定量PCR法测定细胞LHβ mRNA的Ct值,并与空白组比较.结果 LHβ mRNA的Ct值随着GTH细胞cAMP含量的增高而显著降低,随着cAMP含量的降低而显著增高.结论 cAMP是高频GnRH脉冲刺激所引起的LHβ mRNA表达的受体后的信号转导途径.     

大鼠促性腺激素细胞内蛋白激酶C的改变对黄体生成素mRNA表达的影响

目的:分析大鼠黄体生成素(LH)表达的受体后信号转导机制。方法:促性腺激素(GTH)细胞内蛋白激酶C(PKC)兴奋或抑制后,用促性腺激素释放激素(GnRH)脉冲刺激,然后用实时荧光定量PCR方法测定细胞LH的β亚基(LHβ)mRNA的表达量,并与空白组比较。结果:LHβmRNA随着PKC活性的升高而显著升高,随着PKC活性的降低而显著降低。结论:GnRH脉冲刺激引起LHβmRNA表达,其受体后的信号转导是PKC-Ca2+途径。     

孕马血清促性腺激素对幼龄鼠卵巢和子宫发育的影响

目的探明孕马血清促性腺激素（PMSG）调控哺乳动物生殖生理机制。方法用4 IU PMSG分别处理出生第5天、第10天、第15天和第21天幼鼠,观察其对卵巢和子宫发育的影响。结果（1）PMSG处理后,出生第15天幼鼠的卵巢指数（33.08%）与对照组（27.16%）间差异显著（P〈0.05）;（2）PMSG处理后,第5天、10天和第15天幼鼠的初级卵泡和有腔卵泡相对数量与对照相比无差异,而21 d处理组次级卵泡相对数量显著增加;（3）虽然出生后10 d前的幼鼠子宫对PMSG的反应较弱,但是,PMSG对出生后15-21 d幼鼠子宫重量指数、子宫肌层和子宫内膜层厚度发育具有明显的促进作用,而对子宫腺体数量增加无影响。结论PMSG对幼鼠卵巢的发育无明显影响;PMSG对出生后第15天前后的子宫发挥作用,而且其作用随着出生日龄的增加而增强。     

梅花鹿胎盘中药复方对机体运动能力的影响

梅花鹿胎盘中药复方对机体运动能力的影响谭建华，崔青山，罗基花，王绍，程远国，甄英凯，张万忠（长春农牧大学兽医研究所长春１３００６２）梅花鹿胎盘是大补之品，可补血生精，增强体质。我们制备了以梅花鹿胎盘为主药，辅以适量人参、大枣的中药复方，对其提高机体运...