615小鼠血红蛋白α链的氨基酸组成及个别肽段的氨基酸序列

用CM-Cellulose-23柱层析分离纯化了615小鼠珠蛋白α链,测定其N端氨基酸残基为缬氨酸.615小鼠珠蛋白α链含有141个氨基酸残基,其中19个亮氨酸残基,10个组氨酸残基,9个缬氨酸残基,上述氨基酸残基的数目与文献中其亲本C₅₇BL不同.用胰蛋白酶水解615小鼠珠蛋白α链,发现有不溶性的‘核心’和可溶性的酶解片段.其中一个酶解肽段从N端数第8位氨基酸残基发生了突变,由亲本的缬氨酸变为亮氨酸.     

人源抗肿瘤坏死因子—α噬菌体抗体的基因结构分析

从混合的噬菌体抗体库中筛选到了抗人ＴＮＦα的人源单克隆抗体,并对筛选到的抗体基因进行了序列测定和分析。结果表明,筛选到的４个特异性抗ＴＮＦα噬菌体抗体克隆的重链的重链基因序列相同,该重链基因长６８１ｂｐ,编码２２７个氨基酸残基,属于人免疫球蛋白第Ⅲ家族,其中１－１１９位氨基酸残基为重链可变区（ＶＨ）,１２０－２２７位为重链恒定区１（ＣＨ１）。４个噬菌体抗体克隆的轻链均缺失,因此实际上筛选到的是单重     

α-淀粉酶抑制剂AAI的核磁共振氢谱谱峰归属及结构分析

α－淀粉酶抑制剂ＡＡＩ（α－Ａｍｙｌａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）是从墨西哥苋属植物Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｈｙｐｏｃｈｏｎｄｒｉａｃｕｓ种子中提取的由３２个氨基酸残基组成的多肽。它能强烈地抑制几种昆虫幼虫的α－淀粉酶活性,而不抑制人及哺乳类动物的α－淀粉酶活性。使用核磁共振方法收集了ＡＡＩ的二维氢谱谱图,完成了全部主链和绝大部分侧链质子共振峰的序列归属,并利用Ｘ－ＰＬＯＲ软件计算出ＡＡＩ的三维结构。     

青霉素及头孢霉素的生物合成(续)

三、生物合成的机制及反应的专一性 1、假设的中间体虽然青霉素及头孢菌素的环系形成机制还没有最后确定,但排除过几个假设机制,用~3H-标记的缬氨酸证明LLD-ACV中的D-缬氨酸残基,由L-缬氨酸转变而成,LLD-ACV环合成异青霉素N时,没有游离的含α,β-脱氢缬氨酸的中间体。同样,环合成β-内酰胺环时也不包含α,β-脱氢半胱氨酸残基。于青霉素及头孢菌素生物合成时,除了含上述脱氢缬氨酸及脱氢半胱氨酸残基外,还提出过几个游离中间体,曾经假定LLD-ACV的缬氨酸残基氧化成D-β-羟     

人α—珠蛋白基因表达调控研究进展

人α－类珠蛋白基因簇位于１６号染色体的短臂近端粒区,由４个功能基因和３个假基因组成,其中,ζ－珠蛋白基因在胚胎期表达,α２、α１和θ珠蛋白基因在胎儿和成人期表达。α－类珠蛋白基因的主要调控序列位于ζ－珠蛋白基因上游４０ｋｂ的位置,称为ＨＳ－４０,另外还存在其它的ＨＳ－位点。在ＨＳ－４０和各种珠蛋白基因启动子上有多种红系和通用反式作用因子的结合位点,它们间的协同作用保证了α－类珠蛋白基因表达的组织和     

铁代谢的某些研究进展

近年来,由于测定方法的改进,放射免疫法及电子显微镜的广泛应用,~(52)Fe 的产生,以及对过去常用研究方法的重新评价;特别是分子生物学的发展,使铁代谢的研究获得了新的进展。人体的铁一、人体铁的含量成年人体内平均约含铁4克左右。妇女由于月经失血、怀孕后供应胎儿及分娩失血等生理及病理性失血,缺铁的发生率很高,青年健康妇女缺铁者可达20%,孕妇缺铁性贫血的发病率可达20～50%。铁在人体内分布很广,几乎所有组织(包括各种内分泌腺)都含有铁,绝大多数以复合物的形式存在,以肝和脾含铁量为高。近来证明肺里含铁亦多(平均值为319±176微克/克或770ppm,干重)。二、铁在体内的存在形式1.铁卟啉类(1)血红蛋白分子量为64,500,含铁0.34%,由珠蛋白和亚铁血红蛋白组成。珠蛋白共有4条多肽链,一对α-链,一对β-链,前者每条链含有142个氨基酸残基,后者每条链含有146个氨基酸残基。每     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有Ｎ－糖苷酶活性,２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键,其中主链原子间氢键１６５个,主链原子与侧链原子间氢键５４个,侧链原子间氢键２１个,蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个,主链Ｃ＝Ｏ,主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键,Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力,并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大,Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上,Ａｒｇ容易形成远程的氢键,而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键,特别是保守残基间的氢键,对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响,α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有Ｎ－糖苷酶活性,２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键,其中主链原子间氢键１６５个,主链原子与侧链原子间氢键５４个,侧链原子间氢键２１个,蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个,主链Ｃ＝Ｏ,主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键,Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力,并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大,Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上,Ａｒｇ容易形成远程的氢键,而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键,特别是保守残基间的氢键,对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响,α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。     

镰刀形红细胞的形成

镰刀形红细胞贫血症是一种严重的溶血性疾病,其特点是在氧分压低的情况下,红细胞就由正常的双凹圆饼状变成镰刀形。产生镰刀形细胞贫血症的根本原因是基因突变,导致转录、翻译错误,使血红蛋白分子的β多肽链上,第六位的谷氨酸被缬氨酸代替,这一个氨基酸分子的改变是怎样引起红细胞形成镰刀状的呢? 从蛋白质分子的一级结构看,正常血红蛋白(HbA)与镰刀形红细胞血红蛋白(HbS)的差异,是位于β链N端第六位上的氨基酸残基不同,其氨基酸残基顺序如下: HbA:缬-组-亮-酷-脯-谷-谷-赖…… HbS:缬-组-亮-酪-脯-缬-谷-赖……谷氨酸的侧链基团带负电荷,缬氨酸的侧链基     

hTGF—α的C结构域半保守残基对其结构与功能的影响

ＥＧＦ家族Ｃ结构域有较高的同源性,其中有一些氨基酸表现为半保守性质。我们应用定点突变法对ｈＴ－ＧＦ－αＣ结构域的半保守残基进行突变,代之以ｈＥＧＦ的相应残基,构建３个突变分子ｈＴＧＦ－αＶ３５、ｈＴＧＦ－αＱ４４和ｈＴＧＦ－αＹ４５Ｒ４６。实验发现ｈＥＧＦ与ＥＧＦ受体的亲和力为ｈＴＧＦ－α的２倍,而３个突变体与ＥＧＦ受体的亲和力分别为ｈＴＧＦ－α的２２％,１３．４％和２５％;ｈＥＧＦ促ＮＲＫ－４９     

细胞珠蛋白的结构及其生物学效应

细胞珠蛋白(cytoglobin,Cygb)是最近发现的脊椎动物珠蛋白超家族的一员,在体内分布广泛。人Cygb基因定位于染色体17q25,含有4个外显子和3个内含子,编码190个氨基酸残基(分子量20.9kD)。Cygb拥有经典的“three-over-three”α螺旋三明治折叠结构,同神经珠蛋白(Ngb)一样,Cygb血红素在缺乏外源性配体时呈“六配位”结构。Cygb的确切功能尚不十分清楚,目前主要有携氧与储氧、氧感受器、活性氧基团和NO的清道夫、NADH氧化酶或过氧化氢酶样作用和参与胶原形成等假说。     

螺旋霉素产生菌的推理选育

螺旋霉素(spiramycin,以下简称SPM)为十六元大环内酯类抗生索〔r〕。内酯环C－3位上羟基酰化侧链片段构成SPM不同组分。C－3位上羟基酰化酶的合成受葡萄糖的诱导．该诱导作用受丁酸的抑制〔2〕。SPM的生物合成受高浓度铵离子的抑制。而支链氨基酸,如缬氨酸,经分解代谢可产生乙酸、丙酸、丁酸〔S〕。作为SPM生物合成的前体。本文根据SPM的生物合成途径,采用诱变和耐L－缬氨酸、耐α－氨基丁酸相结合的筛选方法．获得了高产菌株。     

小鼠PC-1基因在大肠杆菌中的表达和纯化

利用PCR和基因重组技术构建了小嫌PC－1基因全长cDNA及其N端45个氨基酸残基的表达质粒pGEX-4T-1-mPC-1和pGEX-4T-1-mPC-1-45。经IPTG诱导后,在大肠杆菌DH5α中,GST－mPC-1和GST－mPC-1-45两个融合蛋白都获得了可溶性高表达。经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,获得了纯的GST－mPC-1和GST－mPC-1-45蛋白。     

固有无序蛋白与蛋白质相互作用位点残基特征分析

本文对固有无序蛋白(IDPs)与其他蛋白质相互作用位点残基特征进行了研究.首先在数据库中选出满足条件的109条IDPs蛋白质链及与其他配体蛋白形成的299个IDPs-蛋白质复合物,然后提取复合物中作为相互作用位点的IDPs-蛋白质残基.这109条IDPs链中共含有50 031个氨基酸残基,其中处于作用位点的残基有4 822个.通过分析发现,20种氨基酸在形成IDPs-蛋白质相互作用位点残基时具有不同的倾向性,根据形成作用位点残基的倾向性,20种氨基酸可分成三大类:倾向型氨基酸(ILE、LEU、ARG、PHE、TYR、MET、TRP)、中间型氨基酸(GLN、GLU、THR、LYS、VAL、ASP、HIS)、非倾向型氨基酸(PRO、SER、GLY、ALA、ASN、CYS).研究结果还进一步表明,不同氨基酸在有序区域与无序区域形成IDPs-蛋白质作用位点残基的倾向性不同.其中,氨基酸TRP、LEU、ILE、CYS在有序和无序区域形成作用位点残基的差异性尤为明显,而氨基酸GLU、PHE、HIS、ALA则基本没有多大差别.对IDPs-蛋白质相互作用位点残基理化特征进行分析发现:疏水性强、侧链净电荷量较少、极性较小、溶剂可及性表面积较大、侧链体积较大、极化率较大的氨基酸比较倾向于形成作用位点残基.主成分分析结果显示,残基的极化率、侧链体积和溶剂可及表面积对作用位点残基影响最大.     

虎纹捕鸟蛛凝集素-I(SHL-I)的核磁共振氢谱谱峰的完全归属

描述了从虎纹捕鸟蛛毒液分离的凝集素ＳＨＬ－Ｉ的核磁共振氢谱谱峰的完全归属。通过分析二维ＤＱＦ－ＣＯＳＹ,ＣＯＳＹ,ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱,鉴别出全部３２个氨基酸残基自旋体系。然后由ＣＯＳＹ,ＮＯＥＳＹ谱指纹区的ｄαＮ连系推测出序列专一归属,并得到了ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ谱中ｄαＮ,ｄＮＮ的验证。从而明确分辨了除Ｃｙｓ２外所有主链质子和大于９６％的侧链质子。这一结果为最终确定ＳＨＬ－Ｉ的溶液构象奠定了基础。     

非连续聚丙烯酰胺凝胶电泳在珠蛋白链的分离及地中海贫血研究中的应用

首次应用非连续聚丙烯酰胺凝胶(12％和7.5％)电泳将胚胎、胎儿及成人溶血液中各种正常珠蛋白链分离。其电泳移动顺序为:α、β、Gγ、δ、Aδ、ε和ζ链,δ与Gγ链得到较好的分离。10例β—地中海贫血杂合子血样的δ链光密扫描测定结果为2.62±0.76％。重型β—地中海贫血患者的Gγ与Aγ比1.09～1.27,各类样品的α/非α链含量比约为1。结合网织红细胞体外培育,~3H—亮氨酸标记新合成的珠蛋白链,以放射性荧光自显影技术测定了五例α—地贫患者的珠蛋白链合成速率,其α/β合成比均小于1(0.79～0.89),而正常对照为0.97。在珠蛋白链的研究中,该方法具有简单、灵敏等优点。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究Ⅱ疏水相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白结构模型中共有疏水残基１４１个,占践基总数的５７％。其中１２８个疏水残基有相互作用,占疏水残基的９１％。疏水残基之间的相互作用与其是否在α－螺旋或β片层内没有多大关系。本文着重分析了α－螺旋间和α螺旋与β结构之间的疏水相互作用;讨论了α５和大β片层中疏水残基与亲本残基的分布特点,这一特点对该蛋白分子最后折叠成特定的空间结构有重要影响。类似的情况在同源蛋白天花粉蛋白中也是存在的。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究Ⅱ疏水相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白结构模型中共有疏水残基１４１个,占践基总数的５７％。其中１２８个疏水残基有相互作用,占疏水残基的９１％。疏水残基之间的相互作用与其是否在α－螺旋或β片层内没有多大关系。本文着重分析了α－螺旋间和α螺旋与β结构之间的疏水相互作用;讨论了α５和大β片层中疏水残基与亲本残基的分布特点,这一特点对该蛋白分子最后折叠成特定的空间结构有重要影响。类似的情况在同源蛋白天花粉蛋白中也是存在的。     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究——Ⅴ.615小鼠肝RNA聚合酶B(Ⅱ)的免疫学特性研究

用615小鼠肝RNA聚合酶B免疫母鸡获得了抗血清。在免疫扩散实验中,这种抗血清和615小鼠肝RNA聚合酶B之间形成清晰的沉淀线;与L615(可移植性小鼠白血病)小鼠及大鼠肝RNA聚合酶B之间形成弱的沉淀线;而与615小鼠肝RNA聚合酶A和C以及大肠杆菌RNA聚合酶之间不形成沉淀线。这种抗血清对615小鼠肝RNA聚合酶B离体转录活性有明显的抑制作用,而对大肠杆菌的RNA聚合酶没有抑制作用。在免疫扩散实验中,这种抗血清可以和不同批号的615小鼠肝RNA聚合酶B产生沉淀线。 这种抗血清和615小鼠肝RNA聚合酶B形成免疫沉淀后的离心上清液电泳图谱中,血清免疫球蛋白的区带消失了。     

200例血清结合珠蛋白分型的研究

结合珠蛋白是血浆中一种含糖的α_2球蛋白,由α链和β链所组成,根据淀粉凝胶电泳分离的图谱,人血清结合珠蛋白可分成三种类型:Hp1一1,Hp1—2及Hp2—2型。每个人含有哪种类型的结合珠蛋白是由遗传物质基因所决定的。